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上海嶸崴達(dá)實業(yè)有限公司
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正確清洗實驗器皿的方法介紹2018/08/20
常規(guī)洗滌法(一般容器)1.清洗實驗器皿前先用肥皂洗手。2.先用自來水沖去灰塵,再用毛刷蘸洗滌劑液仔細(xì)刷凈內(nèi)外表面,之后邊刷邊用水沖至無洗滌劑液;3.再用自來水沖洗3~5次,去離子水沖洗3次。4.不便刷洗的實驗器皿先用洗滌劑液浸泡后用水沖洗。洗凈的玻璃器皿內(nèi)外不掛水珠,器壁上殘留的水用指示劑檢查為中性。5.去污粉不得用于洗滌刻度器皿和玻璃儀器內(nèi)壁,以防劃傷玻璃。不同材質(zhì)器皿的洗滌1.銀、鎳和鐵質(zhì)器皿用NaOH熔融,也可用1:3稀HCl短時間浸泡后用水沖洗2.瑪瑙器皿不宜浸洗,要先用洗滌劑洗后用水沖
細(xì)胞培養(yǎng)的一般過程2018/08/20
一、準(zhǔn)備工作準(zhǔn)備工作對開展細(xì)胞培養(yǎng)異常重要,工作量也較大,應(yīng)給予足夠的重視,準(zhǔn)備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導(dǎo)致實驗失敗或無法進(jìn)行。準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒,培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌,無菌室或超凈臺的清潔與消毒,培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試。二、取材在無菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞(視實驗?zāi)康亩ǎ?,?jīng)過一定的處理(如消化分散細(xì)胞、分離等)后接入培養(yǎng)器血中,這一過程稱為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無取材這一過程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。理論上講各種動物和人體內(nèi)
干擾素的產(chǎn)生及作用2018/08/17
干擾素(IFN)是一種廣譜抗病毒劑,并不直接殺傷或抑制病毒,而主要是通過細(xì)胞表面受體作用使細(xì)胞產(chǎn)生抗病毒蛋白,從而抑制病毒的復(fù)制;同時還可增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)、巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的活力,從而起到免疫調(diào)節(jié)作用,并增強(qiáng)抗病毒能力。干擾素是一組具有多種功能的活性蛋白質(zhì)(主要是糖蛋白),是一種由單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子。它們在同種細(xì)胞上具有廣譜的抗病毒、影響細(xì)胞生長,以及分化、調(diào)節(jié)免疫功能等多種生物活性。干擾素不能直接滅活病毒,而是通過誘導(dǎo)細(xì)胞合成抗病毒蛋白(AVP)發(fā)揮效應(yīng)。干擾素首
移液管的注意事項2018/07/20
1.移液管(吸量管)不應(yīng)在烘箱中烘干。2.移液管(吸量管)不能移取太熱或太冷的溶液。3.同一實驗中應(yīng)盡可能使用同一支移液管。4.移液管在使用完畢后,應(yīng)立即用自來水及蒸餾水沖洗干凈,置于移液管架上。5.移液管和容量瓶常配合使用,因此在使用前常作兩者的相對體積校準(zhǔn)。6.在使用吸量管時,為了減少測量誤差,每次都應(yīng)從上面刻度(0刻度)處為起始點,往下放出所需體積的溶液,而不是需要多少體積就吸取多少體積。
分享影響培養(yǎng)基滅菌效果的因素2018/07/05
培養(yǎng)基滅菌是否*,影響因素很多,除了培養(yǎng)基內(nèi)雜菌的種類和數(shù)量,滅菌溫度的高低,時間長短外,還取決于:1.營養(yǎng)成分的保持濕熱滅菌時,微生物被殺死的同時,培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分也遭到了一定的破壞,特別是氨基酸和維生素。如在121℃,僅20min,就有59%的賴氨酸和精氨酸及其他堿性氨基酸被破壞,蛋氨酸和色氨酸也有相當(dāng)數(shù)量被破壞。在熱的作用下某些營養(yǎng)成分還可能因受熱而相互之間發(fā)生反應(yīng),造成培養(yǎng)基中原有營養(yǎng)成分的數(shù)量變化,因而影響培養(yǎng)基質(zhì)量。2.微生物的耐熱性細(xì)菌芽孢的熱阻較大,滅菌所需要的時間取決于把細(xì)菌芽
細(xì)胞用于組織修復(fù)具有重要意義2018/07/05
近日,科學(xué)家發(fā)現(xiàn)了驅(qū)動胚胎干細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞成熟分化的一條分子機(jī)制,內(nèi)皮細(xì)胞是可以形成血管的一類細(xì)胞,通過這一機(jī)制了解該分化過程對于幫助科學(xué)家們有效地將干細(xì)胞誘導(dǎo)為內(nèi)皮細(xì)胞用于組織修復(fù)具有重要意義。這項研究發(fā)現(xiàn)了兩個能夠調(diào)節(jié)胚胎干細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞分化所需特定基因表達(dá)的關(guān)鍵酶,這兩個關(guān)鍵酶主要負(fù)責(zé)進(jìn)行表觀遺傳學(xué)修飾。表觀遺傳學(xué)修飾是通過對DNA或與DNA相互作用的蛋白添加或去除某種化學(xué)基團(tuán)改變特定基因表達(dá)活性,而不改變DNA本身序列的一種基因表達(dá)調(diào)控方法。研究人員利用小鼠模型對幾種組蛋白去甲基化酶能否
什么因素會影響抗原抗體反應(yīng)呢?2018/05/25
抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合后,雖由親水膠體變?yōu)槭杷z體,若溶液中無電解質(zhì)參加,仍不出現(xiàn)可見反應(yīng)。為了促使沉淀物或凝集物的形成,常用0.85%氯化鈉或各種緩沖液作為抗原及抗體的稀釋液。由于氯化鈉在水溶液中解離成Na+和C1-,可分別中和膠體粒子上的電荷,使膠體粒子的電勢下降。當(dāng)電勢降至臨界電勢(12~15mV)以下時,則能促使抗原抗體復(fù)合物從溶液中析出,形成可見的沉淀物或凝集物。(一)溫度在一定范圍內(nèi),溫度升高可加速分子運動,抗原與抗體碰撞機(jī)會增多,使反應(yīng)加速。但若溫度高于56℃時,可導(dǎo)致已結(jié)合的抗
血清對細(xì)胞生長具有促進(jìn)作用2018/03/06
血清是一種成分復(fù)雜的混合物,且對細(xì)胞生長具有促進(jìn)作用,我們培養(yǎng)細(xì)胞離不開血清。那在大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)中由血清引起的細(xì)胞生長狀態(tài)不佳及病毒滴度的影響都有哪些表現(xiàn)?1、細(xì)胞生長速度緩慢,長滿單層時間長;從同一細(xì)胞瓶中分出兩瓶細(xì)胞,用同一種培養(yǎng)液,分別加入10%的對照血清和待檢血清,在相同條件下培養(yǎng)72小時,會出現(xiàn)對照血清長滿單層,而待檢血清大約只有60~70%,這種血清就不適合用來大規(guī)模培養(yǎng)細(xì)胞。2、細(xì)胞傳代后形態(tài)不正常,細(xì)胞狀態(tài)發(fā)生變化;由于血清的質(zhì)量問題,使原本狀態(tài)正常的細(xì)胞經(jīng)傳代后形態(tài)會變差;比如
體外細(xì)胞的原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)2018/03/05
一、實驗原理細(xì)胞培養(yǎng)可分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。直接從體內(nèi)獲取的組織細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)為原代培養(yǎng);當(dāng)原代培養(yǎng)的細(xì)胞增殖達(dá)到一定密度后,則需要做再培養(yǎng),即將培養(yǎng)的細(xì)胞分散后,從一個容器以1:2或其他比率轉(zhuǎn)移到另一個或幾個容器中擴(kuò)大培養(yǎng),為傳代培養(yǎng),傳代培養(yǎng)的累積次數(shù)就是細(xì)胞的代數(shù)。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,實驗證明這樣可以限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或DMS作保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形
常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)初代消化培養(yǎng)法2017/11/30
1.準(zhǔn)備:取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面,紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。2.布局:點燃酒精燈,安裝吸管帽。3.處理組織:把組織塊置于燒杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如懷疑組織可能污染,可先置于含有青鏈霉素的混合液中30~60分鐘。4.剪切:用眼科剪把組織切成2~3毫米大小的塊,以便于消化。加入比組織塊總量多30~50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角燒瓶中,結(jié)扎瓶口或塞以膠塞。5.消化:或用恒溫水浴,或置于37℃溫箱消化均可,消化中每隔20分鐘應(yīng)搖
抗體是怎么形成的?2017/11/30
抗體是怎么形成的?抗原進(jìn)入機(jī)體后,首先一部分被抗原提呈細(xì)胞捕獲,加工處理后呈遞給Th(T細(xì)胞輔助細(xì)胞,使Th細(xì)胞活化,另一部分直接跟B細(xì)胞表面的抗原受體(BCR)結(jié)合,產(chǎn)生刺激B細(xì)胞活化的信號,然后活化的Th細(xì)胞給B細(xì)胞第二個刺激信號,這時B細(xì)胞就被活化產(chǎn)生抗體,和抗原特異性的結(jié)合.然后抗體通過自身的巨噬細(xì)胞,中性粒細(xì)胞等吞噬細(xì)胞的受體與這些細(xì)胞結(jié)合,介導(dǎo)抗原抗體復(fù)合物被吞噬,進(jìn)而被降解.體液免疫:生發(fā)中心母細(xì)胞的輕鏈和重鏈V基因可發(fā)生高頻率的點突變,在抗原誘導(dǎo)的情況下產(chǎn)生.在初次免疫應(yīng)答時,大
細(xì)胞培養(yǎng)2017/09/13
一、動物細(xì)胞培養(yǎng)在所有的細(xì)胞離體培養(yǎng)中,zui困難的是動物細(xì)胞培養(yǎng)。下面是它所需要的特殊條件。⑴血清:動物細(xì)胞離體培養(yǎng)常常需要血清。zui常用的是小牛血清。血清提供生長必需因子,如激素、微量元素、礦物質(zhì)和脂肪。有一天人們真正學(xué)會了配制和血清一樣的培養(yǎng)液,那時血清才可被取代。在這里,血清等于是動物細(xì)胞離體培養(yǎng)的天然營養(yǎng)液。⑵支持物:大多數(shù)動物細(xì)胞有貼壁生長的習(xí)慣。離體培養(yǎng)常用玻璃,高速冷凍離心機(jī),塑料等作為支持物。⑶氣體交換:二氧化碳和氧氣的比例要在細(xì)胞培養(yǎng)過程中不斷進(jìn)行調(diào)節(jié),不斷維持所需要的氣體
對于血清的研究2017/08/29
血清對于在傳統(tǒng)培養(yǎng)基配方中生長和增殖的大多數(shù)細(xì)胞系來說是需要的,因為大多數(shù)單獨的培養(yǎng)基并不能提供細(xì)胞生長所需要的全部營養(yǎng),如MEM培養(yǎng)基,較為常用的量為8%~10%的比例,原代培養(yǎng)使用量為15%~20%,而特殊的低血清培養(yǎng)基血清量可降至3%左右,細(xì)胞的形態(tài)和功能不受影響。血清是非常復(fù)雜的混合物,成分多樣,對細(xì)胞生長具有促進(jìn)作用:1)提供基本營養(yǎng)物質(zhì),如氨基酸、維生素、無機(jī)物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等,是細(xì)胞生長必須的物質(zhì);2)提供激素和各種生長因子,如胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素(、地塞米松)、類固醇激
淋巴細(xì)胞分離液的原理及應(yīng)用2017/08/24
淋巴細(xì)胞分離液是一種根據(jù)細(xì)胞密度差異,借助離心產(chǎn)生的重力加速度,進(jìn)行細(xì)胞的分離純化的常用試劑。常用的淋巴細(xì)胞分離液有Ficoll淋巴細(xì)胞分離液、Percoll淋巴細(xì)胞分離液。Ficoll與Percoll分離單個核細(xì)胞的方法均為密度梯度離心法。淋巴細(xì)胞分離液的原理:外周血中單個核細(xì)胞和單核細(xì)胞,其體積、形態(tài)和密度與其他細(xì)胞不同.淋巴細(xì)胞分離液是一種密度介于1.075∽1.090之間而近似于等滲的溶液,用它做密度梯度離心,使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布,從而將各種血細(xì)胞加以分離?;緫?yīng)用:可用于
無血清培養(yǎng)基的使用方法2017/08/23
無血清培養(yǎng)基的使用方法目前,血清仍是動物細(xì)胞培養(yǎng)中zui基本的的添加物,尤其是在原代培養(yǎng)或者細(xì)胞生長狀況不良時,常常會先使用有血清的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng),待細(xì)胞生長旺盛以后,再換成無血清培養(yǎng)液。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)要有一個適應(yīng)過程,一般要逐步降低血清濃度,從10%減少到5%,3%,1%,直至無血清培養(yǎng)。在降低過程中要注意觀察細(xì)胞形態(tài)是否發(fā)生變化,是否有部分細(xì)胞死亡,存活細(xì)胞是否還保持原有的功能和生物學(xué)特性等。在實驗后這些細(xì)胞一般不再繼續(xù)保留,很少有細(xì)胞能夠長期培養(yǎng)于無血清培養(yǎng)基而不發(fā)生改變的。細(xì)胞
白細(xì)胞介素的基本介紹及重要性2017/07/25
白細(xì)胞介素是由多種細(xì)胞產(chǎn)生并作用于多種細(xì)胞。由于zui初是由白細(xì)胞產(chǎn)生又在白細(xì)胞間發(fā)揮作用,所以由此得名,現(xiàn)仍一直沿用。白細(xì)胞介素interleukin縮寫為IL。有來源于淋巴細(xì)胞或巨噬細(xì)胞等許多因子參與。來源于淋巴細(xì)胞的有淋巴細(xì)胞活素,來源于巨噬細(xì)胞的總稱為monokine,其中的各個因子的生物活性各有不同(例如巨噬細(xì)胞活化,促進(jìn)T細(xì)胞繁殖等),因子自身的物理化學(xué)性質(zhì)多不清楚。研究團(tuán)體提出了在淋巴細(xì)胞活素及巨噬細(xì)胞因子(monoki-ne)中,已作為一種提純并弄清了性質(zhì)的稱為白細(xì)胞間[殺菌]素
細(xì)胞培養(yǎng):細(xì)胞生長緩慢怎么辦?2017/06/16
在細(xì)胞培養(yǎng)的實驗中,難免會遇到這樣那樣的問題,比如細(xì)胞不貼壁、HP值變化迅速、細(xì)胞凋亡、等等。細(xì)胞生長緩慢1.培養(yǎng)基或血清改變:比較不同培養(yǎng)基配方中葡萄糖、氨基酸及其他成分有無差異;通過生長實驗比較新老批次血清有無差異;增大細(xì)胞初始接種密度;使細(xì)胞逐步適應(yīng)新的培養(yǎng)基。2.必需生長促進(jìn)成分(如L-谷氨酰胺或生長因子)耗竭、缺乏或分解:去除原培養(yǎng)基,加入新鮮培養(yǎng)基;向培養(yǎng)基中添加生長促進(jìn)成分(如L-谷氨酰胺)。3.輕度細(xì)菌或真菌污染:在不添加抗生素的條件下進(jìn)行培養(yǎng),如細(xì)胞被污染,滅菌處理后丟棄。4.
轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)的基本過程2017/05/22
一、準(zhǔn)備工作準(zhǔn)備工作對開展細(xì)胞培養(yǎng)異常重要,工作量也較大,應(yīng)給予足夠的重視,準(zhǔn)備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導(dǎo)致實驗失敗或無法進(jìn)行.準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒,培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌,無菌室或超凈臺的清潔與消毒,培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試,具體內(nèi)容可參閱有關(guān)文獻(xiàn).二、取材在無菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞,經(jīng)過一定的處理(如消化分散細(xì)胞、分離等)后接入培養(yǎng)皿中,這一過程稱為取材.如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無取材這一過程.機(jī)體取出的組織細(xì)胞的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。三、培養(yǎng)將取得的組織
RNA純化方法及沉淀2017/05/18
RNA純化要求---RNA樣品中不應(yīng)存在對酶(如逆轉(zhuǎn)錄酶)有抑制作用的有機(jī)溶劑和過高濃度的金屬離子,避免其他生物大分子如蛋白質(zhì),多糖和脂類分子的污染,排除DNA分子的污染。一、RNA純化方法及沉淀---有機(jī)溶劑抽提法1、抽提在使用RNA提取試劑進(jìn)行RNA提取時,常使用進(jìn)行抽提,以去除蔗糖、蛋白質(zhì)等雜質(zhì),并促進(jìn)水相與有機(jī)相的分離,從而達(dá)到純化RNA的目的。抽提RNA后,一般采用異丙醇或乙醇來沉淀水相RNA。加入0.6倍水相體積的異丙醇或與水相等體積的異丙醇,室溫沉淀20-30min,高速離心,可獲
影響細(xì)胞生長的幾點因素2017/04/13
影響細(xì)胞生長的幾點因素,摘要:細(xì)胞在體外進(jìn)行培養(yǎng),失去了機(jī)體的調(diào)節(jié)和控制,因此,除滿足營養(yǎng)的要求外,還必須使細(xì)胞生存環(huán)境晝接近活體的環(huán)境.外環(huán)境的培養(yǎng)條件如溫度、滲透壓、酸堿度等均能影響細(xì)胞的生長.一、溫度:一般哺乳類及禽類細(xì)胞體外培養(yǎng)的適宜溫度是37~38℃.溫度過高或過低都會影響到細(xì)胞的生長.細(xì)胞耐受低溫的能力比抗熱的能力強(qiáng),在低溫下,細(xì)胞的代謝活力及核分裂降低.溫度低于0℃時,雖影響細(xì)胞代謝,但并無傷害作用.把細(xì)胞置于23~25℃時,細(xì)胞仍能生存和生長,但速度減緩,不過,魚類細(xì)胞的適宜培養(yǎng)
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