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組織細(xì)胞內(nèi)抗原的固定性2017/04/13: 組織細(xì)胞內(nèi)抗原的固定是免疫酶標(biāo)和非標(biāo)記免疫酶組織化學(xué)方法中的重要環(huán)節(jié)。經(jīng)過(guò)固定，可以達(dá)到如下目的：1.標(biāo)本在玻片上的吸著力增加；2.標(biāo)本所含的類(lèi)脂和蠟質(zhì)等成分可以除去，從而有利于抗原與酶標(biāo)記抗體的結(jié)合；3.標(biāo)本的保存時(shí)間可以增長(zhǎng)，組織切片固定后，在－20℃，可以存放一年以上而不改變免疫酶技術(shù)的染色；組織內(nèi)有關(guān)抗原不同，則所用固定劑與固定方法也隨之改變。丙酮和乙醇是常用的兩種固定劑。但對(duì)于許多病毒與細(xì)菌的定位研究，選擇丙酮和四氯化化碳作為固定劑是zui合適的；對(duì)于可溶性蛋白抗原的定位，常用乙醇；對(duì)

細(xì)胞膜的作用2017/04/13: 細(xì)胞膜的主要功能:細(xì)胞膜對(duì)于細(xì)胞整個(gè)結(jié)構(gòu)的完整性以及細(xì)胞的正常生命活動(dòng)都是至關(guān)重要的。其功能概括起來(lái)有以下幾個(gè)方面。(1)細(xì)胞的界膜，這是細(xì)胞膜zui重要的功能。無(wú)論是真核細(xì)胞還是原核細(xì)胞，都必定有一個(gè)由一定膜結(jié)構(gòu)形成的界膜，不然的話就不會(huì)有細(xì)胞存在。細(xì)胞膜的出現(xiàn)使生命起源到了細(xì)胞的形式，也保證了細(xì)胞生命活動(dòng)的正常進(jìn)行。細(xì)胞膜的出現(xiàn)使各種生物大分子集中到一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的微環(huán)境中，這樣有利于細(xì)胞的物質(zhì)和能量代謝，也有利于細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育。(2)物質(zhì)的跨膜運(yùn)輸膜的存在使細(xì)胞成為一個(gè)相對(duì)獨(dú)立的系統(tǒng)，但細(xì)胞

培養(yǎng)細(xì)胞污染的來(lái)源2017/03/23: 污染來(lái)源細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中污染的來(lái)源主要有以下幾條途徑：1、不潔的動(dòng)物組織標(biāo)本很多動(dòng)物組織本該是無(wú)菌的(直接與外界相通的呼吸道和消化道、泌尿系統(tǒng)除外)，但由于取材時(shí)不小心也會(huì)有污染的機(jī)會(huì)。組織本身含有細(xì)菌，如取材時(shí)不用濃的抗生素洗液洗滌浸泡，也會(huì)帶菌，造成細(xì)胞污染。2、空氣空氣中含有大量的微生物，如果操作室與外界隔離不嚴(yán)或消毒不充分下，很容易造成污染。另外，凈化工作臺(tái)使用過(guò)久，濾板未定期更換或長(zhǎng)久不更換，濾氣受塵埃堵塞，工作時(shí)不帶口罩或外界氣流過(guò)強(qiáng)，污染空氣進(jìn)入操作區(qū)，也會(huì)導(dǎo)致污染。春夏季南方地區(qū)多

免疫組化實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)2017/03/09: 免疫組化實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)1.蘇木素復(fù)染時(shí)間需要摸索，尤其陽(yáng)性染色也在細(xì)胞核上。2.DAB顯色時(shí)間需要達(dá)到*化，鏡下觀察達(dá)到陽(yáng)性染色明顯但背景不太深。3.抗體孵育時(shí)間和抗體濃度需要摸索。尤其一抗孵育溫度在4度。4.切片脫蠟和水化要充分；加反應(yīng)液時(shí)要覆蓋組織充分；每次加液前甩干洗滌液，但又防止干片；用組化筆畫(huà)圈時(shí)盡量畫(huà)大一點(diǎn)，否則墨水排斥液體，引起片周邊干片。5.片子著色不均勻的原因如下：（1）脫蠟不充分?？梢?0℃烤20min，立即放入新鮮的xylene1；（2）水化不全。應(yīng)經(jīng)常配制新鮮的梯度乙醇；（

流式細(xì)胞術(shù)——補(bǔ)償微球篇2017/02/23: —多色流式分析的福音由于熒光光譜的重疊現(xiàn)象，在進(jìn)行流式多色分析時(shí)，必須設(shè)置單染管進(jìn)行熒光補(bǔ)償。OneComp/UltraCompeBeads微球大小和淋巴細(xì)胞相當(dāng)，可連接各種熒光標(biāo)記的抗體來(lái)調(diào)節(jié)補(bǔ)償。每滴微球中都含有兩群：一群是可以結(jié)合抗體的陽(yáng)性群，一群是不會(huì)與抗體反應(yīng)的陰性群。優(yōu)點(diǎn)●使用方便，一滴即可。●與所有小鼠、大鼠和倉(cāng)鼠來(lái)源的抗體反應(yīng)，無(wú)論它們的輕鏈?zhǔn)莐appa還是lambda?！襁m用于各種激發(fā)光---適用于488nm藍(lán)光，532nm綠光，561nm黃光，633-635nm紅光，Ultr

細(xì)胞核的分離提取2017/01/05: 細(xì)胞核的分離提?。ㄒ唬┎僮鞑襟E1．用頸椎脫位的方法處死小白鼠后，迅速剖開(kāi)腹部取出肝臟，剪成小塊（去除結(jié)締組織）盡快置于盛有0.9％NaCl的燒杯中，反復(fù)洗滌，盡量除去血污，用濾紙吸去表面的液體。2．將濕重約1g的肝組織放在小平皿中，用量筒量取8ml預(yù)冷的0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化鈣溶液，先加少量該溶液于平皿中，盡量剪碎肝組織后，再全部加入。3．剪碎的肝組織倒入勻漿管中，使勻漿器下端浸入盛有冰塊的器皿中，左手持之，右手將勻漿搗桿垂直插入管中，上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨3～5次，用3層紗布過(guò)

培養(yǎng)基傳代細(xì)胞的制備操作方法2016/12/13: （一）原理體外培養(yǎng)基的原代細(xì)胞或細(xì)胞株要在體外持續(xù)地培養(yǎng)就必須傳代，以便獲得穩(wěn)定的細(xì)胞株或得到大量的同種細(xì)胞，并維持細(xì)胞種的延續(xù)。培養(yǎng)的細(xì)胞形成單層匯合以后，由于密度過(guò)大生存空間不足而引起營(yíng)養(yǎng)枯竭，將培養(yǎng)的細(xì)胞分散，從容器中取出，以1:2或l:3以上的比率轉(zhuǎn)移到另外的容器中進(jìn)行培養(yǎng)，即為傳代培養(yǎng)。細(xì)胞“一代”指從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間，與細(xì)胞世代或倍增不同。在一代中，細(xì)胞培增3～6次。細(xì)胞傳代后，一般經(jīng)過(guò)三個(gè)階段：游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細(xì)胞分裂指數(shù)表示細(xì)胞增殖的旺盛程度，即細(xì)胞

PVDF膜蛋白染色步驟2016/11/25: 一、所需試劑1.2%麗春紅S濃貯存液（3-羥基-4-[2-磺基-4-硫代-苯偶氮基]-2，7-萘二磺酸）：溶于30%三氯醋酸和30%磺基水楊酸中。貯存液可在室溫下穩(wěn)定存放1年以上。2.PBS。www.runwelltac.com二、操作步驟1.在染色之前，先配制麗春紅S的應(yīng)用液。即將2%的麗春紅S濃貯存液用1%醋酸1:10稀釋即成為應(yīng)用液（注意：如果使用硝酸纖維膜，須將麗春紅S應(yīng)用液更換為用水1:10稀釋?zhuān)?.用麗春紅S應(yīng)用液將PVDF膜洗1次；3.加入新鮮稀釋的麗春紅S應(yīng)用液，并在室溫下攪動(dòng)

免疫組化抗原修復(fù)注意事項(xiàng)2016/11/24: 免疫組化抗原修復(fù)注意事項(xiàng)1、pH的應(yīng)用范圍及選擇抗原修復(fù)液的pH非常重要，有效的抗原修復(fù)pH要比修復(fù)液的化學(xué)成分更重要，同樣的修復(fù)液隨著pH的升高染色的強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，但*pH范圍為6.0-10.0。目前大家*的的抗原修復(fù)液是pH6.0的檸檬酸鹽緩沖液和pH8.0的EDTA緩沖液。作為通用修復(fù)液堿性pH的修復(fù)液要比酸性的有效，而對(duì)固定很長(zhǎng)時(shí)間舊的存檔組織，酸性pH的修復(fù)液則優(yōu)于堿性的修復(fù)液。2、抗原修復(fù)時(shí)應(yīng)選擇*溫度70-90℃的溫度對(duì)未經(jīng)固定的蛋白質(zhì)可發(fā)生變性，但經(jīng)福爾馬林固定的蛋白質(zhì)，溫度必須

常用培養(yǎng)基的制備2016/11/16: 培養(yǎng)基（Medium）是供微生物、植物和動(dòng)物組織生長(zhǎng)和維持用的人工配制的養(yǎng)料，一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。以下介紹培養(yǎng)基的制備流程：一、配料按培養(yǎng)基處方準(zhǔn)確稱(chēng)取各種成分，先在三角燒瓶中加入少量蒸餾水，再加入各種成分，以防蛋白胨等粘附于瓶底，然后再以剩余的水沖洗瓶壁。二、溶化將各種成分混勻于水中，以流通蒸氣溶化半小時(shí)，如在電爐上溶化應(yīng)隨時(shí)攪拌，如有瓊脂成分時(shí)更應(yīng)注意防止外溢。溶化完畢，補(bǔ)足失去的水分。三、矯正pH1.pH測(cè)定取與標(biāo)準(zhǔn)管同口徑的試管（通常用

培養(yǎng)基分為哪些類(lèi)型2016/10/28: 由于各種所需要的營(yíng)養(yǎng)不同，所以培養(yǎng)基的種類(lèi)很多。據(jù)估計(jì)目前約有數(shù)千種不同的培養(yǎng)基，這些培養(yǎng)基可根據(jù)所含成分、物理狀態(tài)、以及不同的使用目的等而分成若干類(lèi)型。1.按照培養(yǎng)基的成分來(lái)分培養(yǎng)基按其所含成分，可分為合成培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基三類(lèi)。（1）合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基的各種成分*是已知的各種化學(xué)物質(zhì)。這種培養(yǎng)基的化學(xué)成分清楚，組成成分，重復(fù)性強(qiáng)，但價(jià)格較貴，而且微生物在這類(lèi)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)較慢。如高氏一號(hào)合成培養(yǎng)基、察氏（Czapek）培養(yǎng)基等。（2）天然培養(yǎng)基。由天然物質(zhì)制成，如蒸熟的馬鈴薯

預(yù)防細(xì)胞污染及污染后對(duì)策2016/10/18: 污染向來(lái)是在細(xì)胞培養(yǎng)中的大問(wèn)題。預(yù)防或治理污染是細(xì)胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵因素。我們?cè)诩?xì)胞培養(yǎng)時(shí)，在開(kāi)始階段就要十分重視污染問(wèn)題，否則會(huì)前功盡棄，這樣不僅浪費(fèi)時(shí)間，也會(huì)浪費(fèi)人力、物力。(一)有哪幾類(lèi)污染？在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的污染不只是指微生物，而且還包括所有混入培養(yǎng)環(huán)境中的、對(duì)細(xì)胞生存有害或造成細(xì)胞不純的物質(zhì)，包括生物和化學(xué)物質(zhì)。1、細(xì)菌污染細(xì)菌污染是實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的污染，即使在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入了抗菌素，也可能因?yàn)椴僮鞑簧鞫鹞廴?。zui常見(jiàn)的有革蘭氏陽(yáng)性菌，如枯草桿菌以及大腸桿菌、假單胞菌等革蘭

微生物培養(yǎng)基及其成分2016/10/09: 培養(yǎng)基通常指人工配制的適合微生物生長(zhǎng)繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。廣義上說(shuō)，凡是支持微生物生長(zhǎng)和繁殖的介質(zhì)或材料均可以作為微生物的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的種類(lèi)繁多，因考慮的角度不同，可將培養(yǎng)基分成以下一些類(lèi)型：天然培養(yǎng)基：利用生物組織、器官及其抽取物或制品配成；根據(jù)對(duì)培養(yǎng)基成分了解的程度合成培養(yǎng)基：使用成分*了解的化學(xué)藥品配制而成；半合成培養(yǎng)基：由部分天然材料和部分已知的純化學(xué)藥品組成液體培養(yǎng)基：各營(yíng)養(yǎng)成分按一定比例配制而成的水溶液或液體狀態(tài)的培養(yǎng)基；根據(jù)培養(yǎng)基物理狀態(tài)固體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基中加入一定量

細(xì)胞裂解方法及細(xì)胞裂解液的特點(diǎn)2016/10/09: 細(xì)胞裂解方法包括化學(xué)裂解、酶裂解和機(jī)械裂解?；瘜W(xué)裂解和酶裂解通常是比較溫和的方法，通常會(huì)很少使DNA斷裂。這兩種方法（包括SDS和溶菌酶處理等）提取純化DNA中常用的方法。機(jī)械裂解可以更均一的裂解細(xì)胞，同化學(xué)裂解相比，機(jī)械處理具有更高的裂解效率和更低的選擇性。機(jī)械處理可以更劇烈和全面的裂解細(xì)胞，但也會(huì)造成DNA的斷裂。常用的方法是裂解液處理法細(xì)胞裂解液的主要目的：1.利用去污劑破壞脂質(zhì)雙分子層，破裂細(xì)胞；2.溶解蛋白；3.蛋白變性使其穩(wěn)定；4.抑制蛋白酶活性含有多種細(xì)胞裂解成分和蛋白酶抑制成分，

如何選擇蛋白酶抑制劑以提高蛋白純化率2016/09/22: 當(dāng)細(xì)胞破碎的時(shí)候，蛋白水解酶就會(huì)被釋放出來(lái)或被激活，使電泳結(jié)果復(fù)雜化，影響zui終結(jié)果分析。為了避免這些情況的出現(xiàn)，建議在樣品制備時(shí)盡可能在低溫下進(jìn)行。此外，許多蛋白酶在PH9以上就失活了，因此Tris堿，碳酸鈉或堿性載體兩性電解質(zhì)往往能抑制蛋白水解。但是有些蛋白酶在上述條件下仍然保持著活性，此時(shí)應(yīng)當(dāng)使用蛋白酶抑制劑。因此對(duì)于我們想要研究的蛋白來(lái)說(shuō)，選擇性和有效的抑制這些蛋白酶對(duì)于蛋白純化路線設(shè)計(jì)來(lái)說(shuō)顯得尤為重要。蛋白酶抑制劑與蛋白酶一樣，都是紛繁復(fù)雜的，通常使用許多化學(xué)物質(zhì)作為蛋白酶抑制劑，如

培養(yǎng)基的濃度和理化2016/09/22: 培養(yǎng)基的濃度和理化在同等條件下經(jīng)多次使用無(wú)污染后，就沒(méi)必要再擺3d后才使用，而是冷卻凝固后就可使用了。(1)防塵已經(jīng)滅好菌的培養(yǎng)基要注意防塵。如果培養(yǎng)基在衛(wèi)生條件差的地方貯存，依附在塵埃中的細(xì)菌、真菌等會(huì)落在培養(yǎng)瓶表面，使用前若不進(jìn)行表面滅菌處理，培養(yǎng)基的濃度和理化在接種時(shí)就容易隨著氣流進(jìn)入容器，使其受到污染，影響組織培養(yǎng)工作的順利進(jìn)行，因此培養(yǎng)基必須放在干凈、衛(wèi)生的接種室內(nèi)。(2)避光備用培養(yǎng)基應(yīng)貯于光線較暗的房子里面，因?yàn)檫胚嵋宜岬饶承┪镔|(zhì)易見(jiàn)光分解。在光照下，一些培養(yǎng)基添加物的成分也會(huì)發(fā)生

細(xì)胞支原體污染的熒光檢測(cè)方法2016/09/22: DNA螢光染色法·原理︰利用螢光染劑（bisbenzimide,Hoechst33258）偵測(cè)支原體污染。此染劑會(huì)結(jié)合到DNA之Adenosine-Thymidine（A-T）rich區(qū)域，因?yàn)橹гw之DNA中A-T含量占多數(shù)（55～80%），所以可將其染色而偵測(cè)。被支原體污染之細(xì)胞經(jīng)染色后，在細(xì)胞核外與細(xì)胞周?chē)煽吹皆S多大小均一之螢光小點(diǎn)，即為支原體之DNA，證明有支原體之污染。·特點(diǎn)︰簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)與靈敏，廣泛使用，可作為例行之偵測(cè)步驟。可以偵測(cè)不易培養(yǎng)之支原體，例如M.hyorhinis，較直

怎么理解抗體的功能、規(guī)律？2016/09/21: 抗體(英語(yǔ):antibody)，(免疫球蛋白不僅僅只是抗體)是一種由漿細(xì)胞(效應(yīng)B細(xì)胞)分泌，被免疫系統(tǒng)用來(lái)鑒別與中和外來(lái)物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)，僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動(dòng)物的血液等體液中，及其B細(xì)胞的細(xì)胞膜表面?？贵w能識(shí)別特定外來(lái)物的一個(gè)*特征，該外來(lái)目標(biāo)被稱(chēng)為抗原。功能：抗體的主要功能是與抗原（包括外來(lái)的和自身的）相結(jié)合，從而有效地清除侵入機(jī)體內(nèi)的微生物、寄生蟲(chóng)等異物，抗體（antibody）是一種應(yīng)答抗原產(chǎn)生的、可與抗原特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)。每種抗體與特定的抗原決定基結(jié)合。這種結(jié)合可以

細(xì)胞分離技術(shù)2016/09/21: 離心是研究如細(xì)胞核、線粒體、高爾基體、溶酶體和微體，以及各種大分子基本手段。一般認(rèn)為，轉(zhuǎn)速為10~25Kr/min的離心機(jī)稱(chēng)為高速離心機(jī)；轉(zhuǎn)速超過(guò)25Kr/min，離心力大于89Kｇ者稱(chēng)為超速離心機(jī)。目前超速離心機(jī)的zui高轉(zhuǎn)速可達(dá)100Kr/min，離心力超過(guò)500Kg。在密度均一的介質(zhì)中由低速到高速逐級(jí)離心，用于分離不同大小的細(xì)胞和細(xì)胞器。在差速離心中細(xì)胞器沉降的順序依次為：核、線粒體、溶酶體與過(guò)氧化物酶體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高基體、zui后為核蛋白體。由于各種細(xì)胞器在大小和密度上相互重疊，而且某些慢

免疫組織染色注意事項(xiàng)2016/09/02: 免疫組織染色注意事項(xiàng)，1、概念和基本原理免疫組織化學(xué)又稱(chēng)免疫細(xì)胞化學(xué)，是指帶顯色劑標(biāo)記的特異性抗體在組織細(xì)胞原位通過(guò)抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，對(duì)相應(yīng)抗原進(jìn)行定位、定性、半定量測(cè)定的一項(xiàng)新技術(shù)。它把免疫反應(yīng)的特異性和組織化學(xué)的可見(jiàn)性巧妙地結(jié)合起來(lái)，借助顯微鏡的現(xiàn)像和放大作用，在細(xì)胞、亞細(xì)胞水平檢測(cè)各種抗原物質(zhì)，并可在原位顯示相應(yīng)的基因和基因表達(dá)產(chǎn)物。免疫組織化學(xué)方法種類(lèi)現(xiàn)已有：免疫熒光組織（細(xì)胞）化學(xué)技術(shù)、免疫酶組織（細(xì)胞）化學(xué)技術(shù)、親和組織化學(xué)技術(shù)、免疫金銀及鐵標(biāo)記免疫組織化學(xué)技術(shù)等。免

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