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流式細胞凋亡實驗原理2016/03/30

其原理主要是根據(jù)細胞凋亡時在細胞、亞細胞和分子水平上所發(fā)生的特征性改變。這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態(tài)的改變等，其中細胞核的改變特征性，主要包括以下幾個方面：1.細胞核的改變由于凋亡細胞核的改變，造成各種染色體熒光染料對凋亡細胞DNA可染性發(fā)生改變。研究表明，用各種染色體熒光染料對經(jīng)固定的凋亡細胞進行染色，其DNA可染性降低。許多學者把這種DNA可染性的降低認為是凋亡細胞的標志之一。2.光散射特性凋亡細胞形態(tài)上的改變影響它們的光散射特性。在流式細胞儀上，前散射

細胞污染的檢測與排除2016/03/29

細胞污染主要是指細胞培養(yǎng)液中混入對細胞生存有害的成分或細胞成分不純。細胞培養(yǎng)時的污染主要包括3個方面：①微生物污染：如支原體、病毒、細菌和真菌。②化學污染：如重金屬或其他非培養(yǎng)必需化學試劑。③細胞交叉污染。一、細胞污染的檢測(一)真菌污染在微生物污染中，以真菌污染zui多。zui常見真菌：煙曲霉、黑曲霉、毛霉菌、白念珠菌、酵母菌等。真菌種類繁多，形態(tài)各異，但污染后很容易發(fā)現(xiàn)。肉眼可見，大多呈白色或zui黃色小點漂浮于培養(yǎng)液表面；鏡下觀察呈絲狀、管狀或樹枝狀菌絲，縱橫交錯穿行于細胞之間。但是念珠菌

單克隆與多克隆抗體的區(qū)別2016/03/25

這首先要從抗體的產(chǎn)生來探討。把某一抗原免疫某種動物而得到單抗或多抗。如果用經(jīng)免疫過的動物的脾細胞獲得雜交瘤細胞，則得到單克隆抗體，如果用動物的血清，則得到多克隆抗體。但從理論上說，這些抗體都應(yīng)針對抗原來自的動物，例如如果用抗原免疫小鼠，則這些為鼠抗人。由于一個大蛋白分子表面具有多種抗原決定簇，因此，免疫動物后，這些不同的決定簇分別誘導動物產(chǎn)生不同的抗體，每種抗體的特異性不同。單抗是有單個細胞起源的細胞克隆分泌的，所以只針對蛋白抗原的單一抗原決定簇，而多抗是有多個不同克隆的B細胞產(chǎn)生的，是多種細胞

污染的預(yù)防2016/03/25

細胞培養(yǎng)所用物品清洗、消毒要*，各種溶液滅菌除菌要仔細，并在無菌試驗陰性后才能使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔消毒滅菌?？股貙缂毦^有效。聯(lián)合用藥比單獨用藥效果好。預(yù)防用藥比污染后再用藥效果好。預(yù)防用藥一般用雙抗生素（青霉素100u/mL加鏈霉素100μg/mL），污染后清除用藥需采用大于常用量5～10倍的沖洗法，于加藥后作用24～48小時，再換常規(guī)培養(yǎng)液。此法在污染早期可能有效。所用抗生素品種除青霉素、鏈霉素外，還可用慶大霉素、卡那霉素、多粘菌素、四環(huán)素、制霉菌素等。常用400～8

細胞培養(yǎng)的訣竅2016/03/24

1.確保所有實驗室材料都無菌交叉污染是細胞培養(yǎng)的大敵。即使是zui輕微的污染，也可能毀了幾個星期的成果。因培養(yǎng)箱內(nèi)溫暖潮濕，真菌極易生長，因此必須注意定期清潔。此外，在將培養(yǎng)瓶、移液管及其他的相關(guān)物品放入超凈臺之前，應(yīng)用酒精擦拭干凈，以避免污染。2.小心處理您的培養(yǎng)物細胞培養(yǎng)的脆弱性怎么強調(diào)也不為過。劇烈搖晃，或連續(xù)的溫度波動可能會對生長產(chǎn)生不利的影響。確保培養(yǎng)箱是水平的，溫度均一，且遠離電動儀器。此外，盡量避免一次處理多個細胞系，因為它可能會影響細胞的基因型和表型。您還應(yīng)定期完成STR圖譜分析

地高辛檢測2016/03/24

地高辛標記技術(shù)源于一種從洋地黃類植物（毛地黃和毛花毛地黃）中提取的類固醇物質(zhì)—Digoxidenin（DIG）。由于洋地黃植物的花和葉片Digoxidenin在自然界中的*來源，因此抗DIG的抗體不會與其他的生物物質(zhì)結(jié)合，從而可以滿足特異性標記的需要。這一點，正式DIG勝于生物素的（Biotin）的地方—同樣是小分子標記物，生物素廣泛存在于各種組織中，對于靈敏度很高的標記檢測實驗來說，樣品自身含有的內(nèi)源生物素，就會對結(jié)果產(chǎn)生干擾。地高辛就能夠很好地避免這個問題。地高辛技術(shù)特點可用于標記核苷酸或蛋

學習凋亡試劑盒的檢測步驟2015/12/21

實驗方法該實驗采用的是經(jīng)過優(yōu)化的喜樹堿誘導Jurkat細胞系凋亡實驗條件。其他類型的細胞需做相應(yīng)調(diào)整。該試劑盒在傳統(tǒng)及Attune?聲波聚焦流式細胞儀上驗證過，使用Attune?聲波聚焦流式細胞儀時，各種流速（25μL/min到1,000μL/min）都可以。1.用有效方法誘導凋亡；設(shè)一不加誘導的陰性對照。2.孵育之后收集細胞并用冷的PBS洗滌。3.制備1×annexinV結(jié)合緩沖液：按10次分析的量計算，加1mL試劑C到4ml的去離子水中。4.制備100μg/mL的PI工作液：用45μl1×a

如何鑒別假冒偽劣ELISA試劑盒2015/12/21

在國內(nèi)生物研究蓬勃發(fā)展的現(xiàn)在，假冒無視科學研究的嚴謹性和嚴肅性，讓廣大的科研工作者被動造假，嚴重破壞了科研氛圍，擾亂了市場秩序，聯(lián)科生物整理了一些鑒別這些假冒偽劣ELISA試劑盒的方法，供廣大的科研工作者和用戶參考，讓希望對廣大科研工作者有所幫助。購買前【方法一】向廠家索要或從其下載說明書，查找ELISA的性能指標：準確度(加標回收率、稀釋線性)、精密度(板內(nèi)差、板間差)、靈敏度、樣本值、特異性、校準。一般來說，除了校準不一定每份說明書都有外，其余的指標一般都需要羅列(部分樣本需要高倍稀釋的，可

學習區(qū)分血清和血漿的不同2015/12/09

血液凝固析出的淡黃色透明液體。如將血液自血管內(nèi)抽出，放入試管中，不加抗凝劑，則凝血反應(yīng)被激活，血液迅速凝固，形成膠凍。凝血塊收縮，其周圍所析出之淡黃色透明液體即為血清，也可于凝血后經(jīng)離心取得。在凝血過程中，纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白塊，所以血清中無纖維蛋白原，這一點是與血漿zui大的區(qū)別。而在凝血反應(yīng)中，血小板釋放出許多物質(zhì)，各凝血因子也都發(fā)生了變化。這些成分都留在血清中并繼續(xù)發(fā)生變化，如凝血酶原變成凝血酶，并隨血清存放時間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區(qū)別之處。但大量未參加凝血反應(yīng)的物質(zhì)則與

ELISA常見樣本收集處理方法2015/12/09

ELISA檢測的目的是為實驗提供準確可靠定量分析實驗的依據(jù)。為了保證實驗數(shù)據(jù)的可靠性，在實驗過程中必須堅持全面質(zhì)量控制和全過程質(zhì)量控制。在收集標本前都必須有一個完整的計劃。以下是聯(lián)科生物整理的ELISAzui常見的幾種樣本收集處理方法：1．細胞培養(yǎng)上清細胞培養(yǎng)液在2500rpm/min離心20分鐘后，收集上清即刻檢測，或者分裝，-20℃貯存。避免反復凍融。2．血清樣本分離管分離血清。在1000g離心之前，使血樣凝集30分鐘。吸取血清樣本之后即刻檢測，或者分裝，-20℃貯存。避免反復凍融。3.血漿

為什么ELISA反應(yīng)總是需要一定時間的溫育？2015/11/18

在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標本和加酶結(jié)合物后?？乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為溫育(incubation)，有人稱之為孵育，在ELISA中似不恰當。ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機會，只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程，因此需經(jīng)擴散才能達到反應(yīng)的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。這

血清標本如何采取和保存2015/11/18

ELISA技術(shù)的-操作要點的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準確可靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異，國內(nèi)醫(yī)學檢驗一般均用板式點。標本的采取和保存可用作ELISA測定的標本十分廣泛，體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標本可直接進行測定(如血清、尿液)，有些則需經(jīng)預(yù)處理(如糞便和某些分泌物)。大部分ELISA檢測均以血清為標本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清。制

elisa試劑盒操作步驟2015/11/09

1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、

ELISA試劑盒測定方式4步驟2015/11/09

要使ELISA試劑盒測定得到準確的結(jié)果，不論是定性的還是定量的，必須嚴格按照規(guī)定的方法制備試劑和實施測定。主要試劑的制備要點已如前述，其他一般性試劑，如包被緩沖液、洗滌液、標本稀釋液、結(jié)合物稀釋液、底物工作液和酶反應(yīng)終止液等，配制時不可掉以輕心。(一)加樣在ELISA試劑盒中除了包被外，一般需進行45加樣。在定性測定中有時不強調(diào)加樣量的準確性，例如規(guī)定為加樣一滴。此時應(yīng)該使用相同口徑的滴管，保持準確的加樣姿勢，使每滴液體的體積基本相同。在定量測定中則加樣量應(yīng)力求準確。標本和結(jié)合物的稀釋液應(yīng)按規(guī)定

淺析影響胎牛血清質(zhì)量的幾大因素2015/10/22

市場上的胎牛血清種類繁多，魚龍混雜，很多科研工作者，特別是剛接觸細胞培養(yǎng)的人，難以分辨血清質(zhì)量的優(yōu)劣。本人根據(jù)十多年來血清生產(chǎn)銷售的經(jīng)驗，總結(jié)如下：一、外觀拿到血清，zui先接觸的是血清外觀，對于缺少細胞培養(yǎng)經(jīng)驗的人來說，外觀的判斷尤為重要1、顏色根據(jù)血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色，我國的細胞培養(yǎng)用血清標準是不高于20mg/dl，實際上，血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響，這個指標的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴謹規(guī)范程度，良好的操作能降低血清的溶血。國產(chǎn)血清的采血點很分散，大多

如何選購流式抗體？2015/10/22

由于在流式細胞實驗過程中，熒光抗體對單細胞懸液的標記效果直接影響實驗的數(shù)據(jù)質(zhì)量。因此，需要考慮各種影響流式抗體品質(zhì)及檢測效果的因素，例如抗體特異性、熒光素信號強弱、熒光素標記方式、同型對照等。流式抗體的選擇：1.流式抗體本身也是抗體，所以選擇流式抗體一定要滿足抗體選擇zui基本的條件：目標蛋白特異性，反應(yīng)種屬以及應(yīng)用實驗。2.流式抗體熒光標記的方式包括直接標記和間接標記兩種。在流式實驗過程中，盡量減少實驗工序和過程，以保證實驗的真實和準確性。因此在條件允許的范圍內(nèi)，建議盡量用直接標記的抗體進行實

凋亡試劑盒使用9大注意事項2015/10/13

凋亡試劑盒使用9大注意事項1.進行PBS清洗時，每次清洗5分鐘左右。2.PBS清洗后，為了各種反應(yīng)的有效進行，請盡量除去PBS溶液后再進行下一步反應(yīng)。3.在載玻片上的樣本上加上實驗用反應(yīng)液后，請蓋上蓋玻片或保鮮膜，或在濕盒中進行，這樣可以使反應(yīng)液均勻分布于樣本整體，又可以防止反應(yīng)液干燥造成實驗失敗。4.TUNEL反應(yīng)液臨用前配制，短時間在冰上保存。不宜長期保存，長期保存會導酶活性的失活。5.如果20×DAB溶液顏色變深成為紫色，則不可使用，需重新配制。6.用甲基綠（MethylGreen）染液（

胎牛血清是細胞培養(yǎng)中用量Z大的天然培養(yǎng)基2015/10/13

胎牛血清功能：胎牛血清是細胞培養(yǎng)中用量zui大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份，常用于動物細胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。1.提供對維持細胞指數(shù)生長的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。5.起酸堿度緩沖液作用。6.提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時使剩

ELISA試劑盒的測定方式2015/08/27

要使ELISA試劑盒測定得到準確的結(jié)果，不論是定性的還是定量的，必須嚴格按照規(guī)定的方法制備試劑和實施測定。主要試劑的制備要點已如前述，其他一般性試劑，如包被緩沖液、洗滌液、標本稀釋液、結(jié)合物稀釋液、底物工作液和酶反應(yīng)終止液等，配制時不可掉以輕心。(一)加樣在ELISA試劑盒中除了包被外，一般需進行45加樣。在定性測定中有時不強調(diào)加樣量的準確性，例如規(guī)定為加樣一滴。此時應(yīng)該使用相同口徑的滴管，保持準確的加樣姿勢，使每滴液體的體積基本相同。在定量測定中則加樣量應(yīng)力求準確。標本和結(jié)合物的稀釋液應(yīng)按規(guī)定

關(guān)于血清的一些問題2015/08/14

關(guān)于血清的一些問題血清是細胞培養(yǎng)中zui重要的元素之一。因此，我們特別整理了一些實驗室里常會遇到的問題，供大家參考：1．存放血清的方法？我們建議血清應(yīng)保存在－20℃以下。然而，若存放于4℃時，請勿超過半個月。若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。2．如何解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損？我們建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，溶解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。3．血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理？血清中