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上海一基實業(yè)有限公司
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如何從脂肪組織中提取總蛋白?2024/06/03
從培養(yǎng)的細(xì)胞和組織中提取總蛋白是實驗室非常常見的實驗步驟,從大多數(shù)類型的細(xì)胞和組織中提取總蛋白比較容易,但是從脂肪組織中提取高質(zhì)量和高濃度蛋白質(zhì)是非常困難的。脂肪組織有白色和棕色脂肪兩種類型,被稱為白色脂肪組織(WAT)和棕色脂肪組織(BAT)。脂肪組織中含有許多脂滴,蛋白質(zhì)含量小于細(xì)胞總數(shù)的2%。低蛋白含量使得從脂肪中分離高濃度蛋白挑戰(zhàn)性。以下是幾種從脂肪組織中提取蛋白的方法:A.RIPA緩沖液提取法:脂肪組織通過含有表面活性劑的緩沖液(例如RIPA緩沖液)勻漿,離心后,收集脂肪層下的液體組分
抗血清制備必須注意的問題2024/06/03
抗血清為含有某一類具有特異免疫功能的抗體分子的血清,一般為動物被人工注射某類抗原后制備的動物血清。價的抗血清用于研究工作以及疾病的診斷和治療。一種抗原能否引起抗體反應(yīng),一方面取決于抗原分子表面有無抗原決定簇(Antigenicdeterminant),另一方面取決于機(jī)體的免疫狀態(tài),當(dāng)具備以上兩個條件后,抗體將遵循抗體的一般規(guī)律——初次反應(yīng)和再次反應(yīng)??乖姆N類繁多,包括天然的蛋白質(zhì)抗原和細(xì)胞性抗原、合成性抗原以及基因工程抗原等,不同的抗原免疫動物具有不同的特殊性。一般*抗原免疫動物需加用佐劑,尤
單抗和多抗的優(yōu)缺點2024/06/03
一、單克隆抗體1.優(yōu)點:①雜交瘤制得后,就成為了恒定的再生源,所有批次都將相同–對確保實驗步驟和結(jié)果的一致性和標(biāo)準(zhǔn)化非常有幫助。②單克隆抗體通常在切片和細(xì)胞染色造成的背景較低。因為它們以更強(qiáng)特異性檢測一個靶表位,所以不太可能與其它蛋白質(zhì)發(fā)生交叉反應(yīng)。③由于具有特異性,單克隆抗體非常適于用作分析測定中的一抗,或者用于檢測組織中的抗原,并且通常所產(chǎn)生的背景染色顯著低于多克隆抗體。④與多克隆抗體相比,單克隆抗體的同質(zhì)性非常高。如果實驗條件保持不變,單克隆抗體的各實驗結(jié)果重現(xiàn)性很高。⑤單克隆抗體的特異性
細(xì)胞培養(yǎng)的基本條件,你知道嗎?2024/05/31
把細(xì)胞養(yǎng)好的三個關(guān)鍵要素是:良好的細(xì)胞來源,正確的實驗操作,以及合適的培養(yǎng)體系。其中“合適的培養(yǎng)體系”就是要創(chuàng)造適合細(xì)胞生長的環(huán)境,給細(xì)胞建立一個滿意的“家”。細(xì)胞培養(yǎng)基本條件:1.合適的細(xì)胞培養(yǎng)基合適的細(xì)胞培養(yǎng)基是體外細(xì)胞生長增殖的重要的條件之一,培養(yǎng)基不僅提供細(xì)胞營養(yǎng)和促使細(xì)胞生長增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),而且還提供培養(yǎng)細(xì)胞生長和繁殖的生存環(huán)境。2.優(yōu)質(zhì)血清目前,大多數(shù)合成培養(yǎng)基都需要添加血清。血清是細(xì)胞培養(yǎng)液中重要的成分之一,含有細(xì)胞生長所需的多種生長因子及其它營養(yǎng)成分。3.無菌無毒細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境無菌
做實驗時細(xì)胞長的太慢怎么辦?2024/05/31
做實驗時,細(xì)胞長的太慢是什么情況?很多小伙伴可能都會遇到,當(dāng)自己做實驗時,自己培養(yǎng)的細(xì)胞昏昏欲睡,就是不長,讓人很是著急啊。這個時候我們該怎么辦呢?為了讓我們的細(xì)胞茁壯成長,我們自然要找到問題,想個辦法!下面就讓小編來給大家分析下吧!細(xì)胞生長緩慢的常見原因:1.培養(yǎng)基可能缺乏細(xì)胞生長所需的某種因子通常情況下,當(dāng)小伙伴購買細(xì)胞,并沒有按照ATCC或國內(nèi)細(xì)胞庫推薦的方法制備培養(yǎng)基,使用實驗室兄弟姐妹使用的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。解決方法一般是按照推薦的方法制備培養(yǎng)基,或直接購買培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基。2.許多細(xì)
培養(yǎng)真菌的方法你知道幾種?2024/05/31
真菌的培養(yǎng)方法一、小塊瓊脂玻片培養(yǎng)法用無菌操作法將制好的待用瓊脂平板用無菌接種針或接種環(huán)切成大約1cm2的方塊,將其放置于滅菌的載玻片上。將標(biāo)本或待檢菌接種于瓊脂塊四周邊緣靠上方部位,然后用無菌鑷子取一無菌的蓋玻片蓋在瓊脂上。在無菌平皿內(nèi)放入少量無菌水和一個無菌U形(或V形)玻璃棒。將此載玻片置于玻璃棒上,蓋上平皿蓋培養(yǎng)。每日用肉眼和顯微鏡觀察孢子和菌絲的特點。二、鋼環(huán)法:1.材料:白假絲酵母菌、沙保弱培養(yǎng)基、無菌玻片、蓋玻片、鋼環(huán)(帶有缺口)、石蠟。2.方法:①用無菌鑷子取無菌小培養(yǎng)鋼環(huán),環(huán)的
酶法試劑盒操作步驟2024/05/31
一、實驗原理酶法試劑盒(ELISA)實驗原理是使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性;使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體,這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。二、操作步驟1.ELISA在操作前試劑和組分都先恢復(fù)到室溫,標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品,建議做復(fù)孔。按前面試劑準(zhǔn)備中描述的方法,配制好試劑盒各種組分的工作液。從鋁箔袋中取出所需板條,剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,樣本孔加待測樣本50μL,
ELISA實驗操作秘籍2024/05/31
如何利用ELISA篩選以及ELISA方法操作的注意事項有哪些呢?相信很多做實驗的小伙伴都有這樣的疑問,今天小編就給大家總結(jié)一下,注意聽講哦!ELISA,全稱酶聯(lián)免疫吸附實驗,主要利用的是抗原抗體特異性結(jié)合的特點,可分為直接法、間接法、雙抗體夾心法、競爭法等。下面以間接法為例進(jìn)行介紹:1、方陣ELISA。用途:①融合前后確定鼠血清中抗體效價;②拿到單抗腹水后,需要建立ELISA方法時首先要確定包被原及抗體的優(yōu)質(zhì)工作濃度。經(jīng)典的方陣ELISA:將抗原和抗體各自稀釋成不同梯度濃度,結(jié)果OD值P/N2的
ELISA試劑盒反應(yīng)五要素2024/05/29
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:①引物長度:15-30bp,常用為20bp左右。②引物擴(kuò)增跨度:以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易
ELISA試劑盒的存放與運(yùn)輸要注意哪些?2024/05/29
在買試劑盒的時候大家可能都會擔(dān)心是怎么存放還有運(yùn)輸?shù)?,下面小編來告訴你們ELISA試劑盒的存放與運(yùn)輸要注意哪些?1.干冰是固體二氧化碳,溫度為零下78℃,濕冰就是冰的溫度,一般為冷凍條件的溫度,如在零下20℃冷凍的冰的溫度為零下20℃。對于一些酶類等蛋白產(chǎn)品,需要干冰運(yùn)輸,其他大多數(shù)生化試劑采用濕冰即可;2.運(yùn)輸常溫試劑的時候,不需要冰。對于需要冷藏的試劑,在用冰運(yùn)輸?shù)臅r候,要把試劑同冰之間有隔離物,不能直接接觸試劑包裝,如試劑外面加裝盒子,在盒子外面加冰,基本都采用冰塊,不能直接用水結(jié)成的冰,
培養(yǎng)基的分類有哪些?2024/05/29
培養(yǎng)基一般分類為物理分類、化學(xué)分類、微生物分類。一、物理分類。1、液體培養(yǎng)基:其80%-90%是水,是配有可溶性的或不溶性的營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基。2、固體培養(yǎng)基:配制成的固體狀態(tài)的基質(zhì),根據(jù)性質(zhì)又分為固化培養(yǎng)基、非可逆性固化培養(yǎng)基、天然固態(tài)培養(yǎng)基、濾膜。3、半固體培養(yǎng)基:指在液體培養(yǎng)基中加入少量的凝固劑而配制成的半固體狀態(tài)的培養(yǎng)基。4、脫水培養(yǎng)基:又稱預(yù)制干燥培養(yǎng)基,指含有除水分外的一切成分的商品培養(yǎng)基。二、化學(xué)分類。1、天然培養(yǎng)基:是指一類利用動物、植物或微生物體包括其提取物制成的培養(yǎng)基。2、組合
ELISA試劑盒的保存方法2024/05/29
1、底物A會揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。2、不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。3、使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。4、洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。5、加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。6、按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。7、實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。8、使
關(guān)于ELISA試劑盒的實驗操作,這些細(xì)節(jié)很重要2024/05/29
人ELISA試劑盒實驗操作中,須特別注意細(xì)節(jié)問題,細(xì)節(jié)往往決定著試驗的成功與否。關(guān)于ELISA試劑盒的實驗操作,這些細(xì)節(jié)很重要:1、吸取液體時速度不易太快,以免產(chǎn)生氣泡,人ELISA試劑盒吸取的量不夠準(zhǔn)確。2、吸取液體時要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸,減少誤差。3、加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。4、合理安排檢測量,以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。5、吸取液體時,要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。6、未使用完的酶標(biāo)板或者試劑,請于2-8℃保存。辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人IgG工
正確操作固相萃取柱可以有效地分離和提純目標(biāo)化合物2024/05/28
固相萃取柱是一種化學(xué)分離技術(shù),常用于提取和純化化合物。該柱內(nèi)填充有固定相材料,根據(jù)化合物間的親疏水性差異實現(xiàn)分離。操作時,樣品通過柱底注入,隨后溶劑逐漸通過柱體沖洗,使目標(biāo)化合物與固定相發(fā)生吸附、解吸過程,得到純化的化合物。正確操作固相萃取柱至關(guān)重要,以下是詳細(xì)的操作步驟:1、準(zhǔn)備工作:確保實驗室臺面整潔,準(zhǔn)備好所需的試劑、溶劑和儀器。戴上實驗手套和安全眼鏡,確保操作安全。2、樣品預(yù)處理:將待處理的樣品溶解在適當(dāng)?shù)娜軇┲校⑦^濾以去除雜質(zhì)。確保樣品溶液的濃度適中,不要太濃或太稀。3、裝填:將其垂
通用型反相色譜柱工藝條件對通用型柱色譜分離性能的影響2024/05/28
通用型反相色譜柱是色譜分析中常用的一種色譜柱,其固定相為疏水性物質(zhì),流動相為親水性溶劑。通用型柱色譜作為一種常用的色譜分離技術(shù),其分離性能受到多種工藝條件的影響。一、流動相的選擇流動相的選擇對分離性能具有重要影響。常用的流動相有水、甲醇、乙腈等,以及它們的不同比例混合。流動相的極性、粘度、pH值等都會影響溶質(zhì)分子與固定相之間的相互作用,從而影響分離效果。選擇合適的流動相可以提高分離效率,縮短分析時間。二、柱溫的控制柱溫是影響分離性能的重要因素。柱溫的變化會影響溶質(zhì)分子與固定相之間的相互作用力,從
PH標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液性狀特點與制備2024/05/15
配置方法PH標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液配制:將配制溶液用到的藥品CaCl2、NaCl、KCl、Na2SO4放置到烘箱中,在110℃下烘干1h,取出置于干燥器中冷卻至室溫;將TRIS置于干燥箱中,在室溫條件下用五氧化二磷做脫水劑烘干。采用十萬分之一精度的電子天平準(zhǔn)確稱取配制標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液所需的MgCl2、CaCl2、NaCl、KCl、Na2SO4、TRIS藥品。稱取MgCl243.8955g,用少量除氧水溶解,轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中,用除氧水定容至100mL;稱取CaCl211.0990g,用少量除氧水溶解,轉(zhuǎn)
ELISA分析優(yōu)缺點2024/05/15
ELISA實驗所有方法的缺點很明顯:1、重復(fù)性不好;2、收自身抗體、嗜異性抗體等干擾,易出現(xiàn)假陽性;3、不論儀器和手工操作,干擾因素較多。影響最大的是溫度和時間。直接法(directELISA)將抗原直接固定在固相載體上,參加酶符號的一級抗體,即可測定抗原總量,此一級抗體的特異性非常重要。優(yōu)勢:操作手續(xù)簡略,因無須運(yùn)用二抗可防止交互反響。缺陷:實驗中的一抗都得用酶符號,但不是每種抗體都適合做符號,費(fèi)用相對進(jìn)步。間接法(indirectELISA)此測定辦法與直接法相似,不一樣在于一級抗體沒有酶符
帶你看看 重組腸激酶,帶his標(biāo)簽2024/05/15
≥5.0U/µl(12.8U/ul),規(guī)格:100u/1ku/100ku,價格;260/1500元。一、產(chǎn)品簡介:腸激酶(Enterokinase,lightchain)是一種高度專一性識別Asp-Asp-Asp-Asp-Lys序列的蛋白酶,在Lys的C端水解多肽。它可以將胰蛋白酶原轉(zhuǎn)變?yōu)橐让?,也可以將帶有這個識別序列的融合蛋白切開。本產(chǎn)品為采用重組酵母分泌表達(dá)系統(tǒng)制備的高純度、高活性的牛腸激酶,適用范圍廣(4-45℃,pH4.5-9.5),并且在各種去垢劑和變性劑存在的條件下仍具有部分活性。二
了解細(xì)胞松弛素D2024/05/15
純度:98%,規(guī)格:1mg5mg,價格:1295/5845元,中文名稱細(xì)胞松馳素D中文同義詞松胞菌素D;松胞菌素C;松胞素C;細(xì)胞分裂抑素C;細(xì)胞松馳素D;細(xì)胞松馳素C;胞松弛素D;胞松弛素英文名稱CYTOCHALASIND,CAS號22144-77-0分子式C30H37NO6分子量507.62,細(xì)胞松馳素D性質(zhì)熔點255-260°C沸點595.84°C(roughestimate)密度1.1764(roughestimate)折射率1.6310(estimate)閃點Chemicalbook8
帶你了解細(xì)胞松弛素E2024/05/15
純度:98%,規(guī)格:1mg5mg,價格:970/2780元,中文名稱細(xì)胞松馳素E中文同義詞細(xì)胞松弛素E;細(xì)胞松馳素E;松胞菌素E;松胞菌素E來源于棒曲霉;細(xì)胞松弛素E來源于棒曲霉;細(xì)胞松弛素;細(xì)胞松弛素E(98%,BR)英文名稱CYTOCHALASINE,CAS號36011-19-5分子式C28H33NO7分子量495.56,細(xì)胞松馳素E性質(zhì)熔點206°C沸點587.59°C(roughestimate)密度1.2415(roughestimate)折射率1.6290(estimate)儲存條件
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