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ELISA技術(shù)綜述（四）2023/05/29

2.4結(jié)合物的保存酶標抗體中的酶和抗體均為生物活性物質(zhì)，保存不當，極易失活。高濃度的結(jié)合物較為穩(wěn)定，冰凍干燥后可在普通冰箱中保存一年左右，但凍干過程中引起活力的減低，而且使用時需經(jīng)復(fù)溶，頗為不便。結(jié)合物溶液中加入等體積的甘油可在低溫冰箱或普通冰箱的冰格中較長時間保存。早期的ELISA試劑盒中的結(jié)合物一般均按以上兩種形式供應(yīng)，配以稀釋液（見3.2.5）臨用時按標明的稀釋度稀釋成工作液。現(xiàn)在較先進的ELISA試劑盒均已用合適的緩沖液配成工作液，使用時不需再行稀釋，在4-8℃保存期可達6個月。由于蛋白

ELISA技術(shù)綜述（三）2023/05/22

以下簡述固相載體和包被過程。1.2包被的方式將抗原或抗體固定在過程稱為包被(coating)。換言之，包被即是抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過程。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用力。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點、濃度等的影響。載體對不同蛋白質(zhì)的吸附能力是不相同的，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附力，其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段

ELISA技術(shù)綜述（二）2023/05/15

ELISA的商品化試劑盒成分和分類：在臨床檢驗或者科研檢測中，ELISA實驗通常有商品試劑盒提供。ELISA試劑盒中有三個必要的試劑：免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物等。完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：（1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；（2）酶標記的抗原或抗體（結(jié)合物）；（3）酶的底物；（4）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），參考標準品和控制血清（定量測定中）；（5）酶聯(lián)物（結(jié)合物）及標本的稀釋液；（6）洗滌液；（7）酶反應(yīng)終止液。1、免疫吸附劑已包被抗原或抗體的固相載體在低

ELISA技術(shù)綜述（一）2023/05/08

ELISA原理ELISA利用抗原抗體之間專一性結(jié)合之特性，對標本進行檢測；由于結(jié)合與固體承載物（一般為塑膠孔盤）上之抗原或抗體仍可具有免疫活性，因此設(shè)計其結(jié)合機制後，配合酵素顯色反應(yīng)，即可顯示特定抗原或抗體是否存在，并可利用顯色之深淺進行定量分析。根據(jù)待測樣品與結(jié)合機制的不同，ELISA可設(shè)計出各種不同類型的檢測方式，主要以"三明治法"(sandwich)、"間接法"(indirect)、以及"競爭法"(Competitive)三種為主，以下為各種方法之介紹。ELISA分類見ELISA的雙抗夾心

ELISA試劑盒中的抗體2023/05/04

在ELISA試劑盒中運用的抗體可分為多克隆抗體（多抗）和單克隆抗體（單抗）。多抗取白免疫動物的抗血清，制備較簡略，但抗血清成分凌亂，除含針對抗原（多個表位）的抗體外，還含有多種其他抗體，親和力和特異性相對要低于單抗，且制備周期長，批間差異較大。而單抗僅針對抗體的單一表位，ELISA試劑盒親和力和特異性均較多抗高，且制備技能老練，產(chǎn)量大，批間差異小，但結(jié)合位點的單一也正是其缺陷之地址，在雙抗體夾心法中，如包被和指示抗體運用同一單抗，則由于結(jié)合位點的短少，簡略構(gòu)成假陰．性成果。在運用雙單抗一步法時，

植物微囊藻毒素LR(MC-LR)elisa試劑盒使用說明書2023/04/24

本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍：96T1.2pg/mL-40pg/mL使用目的：本試劑盒用于測定植物組織，細胞及其它相關(guān)樣本中微囊藻毒素LR(MC-LR)含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中植物微囊藻毒素LR(MC-LR)水平。用純化的植物微囊藻毒素LR(MC-LR)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入植物微囊藻毒素LR(MC-LR)，再與HRP標記的微囊藻毒素LR(MC-LR)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在

ELISA中分析非特異性顯色2023/04/19

酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)自1971年自問世以來，以其敏感性高，特異性強，操作簡便、安全，而廣泛應(yīng)用于臨床診斷，開創(chuàng)了免疫學診斷的新紀元。但同其它免疫診斷方法一樣酶免試劑在它的研究、生產(chǎn)及使用中常常會碰到非特異性問題。1、試劑盒特異性因素1、1固相載體的選擇。ELISA中常用的固相載體有微量滴定板、小珠和小試管三種，以微量滴定板最為常見[1]。它具有良好的吸附性能，孔底透明度高，空白值低，各板之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別，各產(chǎn)品的質(zhì)量差異很

ELISA試劑盒變質(zhì)原因詳解2023/04/10

ELISA試劑盒為什么會變質(zhì)？是什么影響了ELISA試劑盒質(zhì)保？一旦變質(zhì)會有什么影響呢？一、辦法學的影響ELISA測定形式包含以下幾種：雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法，其間競爭抑制法(HBeAb,HBcAb等選用)因受操作時差所引起的競爭等要素的影響，成果重復(fù)性較差，質(zhì)量較難操控。二、試劑要素不同批次的ELISA試劑在制作進程中很難保證質(zhì)量wan全一致，即使是通過批批檢的項目其檢測成果也存在差異，因而必須挑選和訂購長批號的試劑，并保證保存條件。嚴格執(zhí)行這一規(guī)范可

人組蛋白H3賴氨酸27(H3K27me3)ELSIA試劑盒使用說明書2023/04/03

本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍：96T6pg/ml-220pg/ml使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中組蛋白H3賴氨酸27(H3K27me3)含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人組蛋白H3賴氨酸27(H3K27me3)水平。用純化的人組蛋白H3賴氨酸27(H3K27me3)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入組蛋白H3賴氨酸27(H3K27me3)，再與HRP標記的組蛋白H3賴氨酸27(H3K27me3)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合

ELISA試劑盒實驗靈敏度高的原因2023/03/27

ELISA試劑盒試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。ELISA試劑盒試驗操作中可能影響結(jié)果的原因及解決辦法分析：1選擇試劑選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。2加樣可能原因：1）血清或血漿標本分離不好即進行加樣；2）手工操作中，加樣板過多造成

ELISA實驗出現(xiàn)異常的原因分析2023/03/20

ELISA實驗是我們大家最常見的實驗,也是比較容易出問題的實驗,可能你一不小心,你的整個實驗便是無功能重來那!所以小編給您講解在使用ELISA試劑盒做實驗的時候，有些細節(jié)若是做不好會出現(xiàn)實驗異常，或者效果不佳，那么你有想過是什么原因嗎？一、白板異常：顯色步驟結(jié)束后，酶標板所有孔均無顏色。陽性對照不顯色。1.試劑已過效期，或不同試劑盒組分混用（解決方式：檢查試劑的組分及批號，確認未過期以及所有組分均屬對應(yīng)的試劑盒。不同試劑盒或不同批號的試劑不能混用）。2.錯加、漏加試劑底物、顯色劑A或B（解決方式

綿羊I型膠原α1鏈(COL1A1)ELISA試劑盒使用說明書2023/03/13

本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍：96T0.2μg/L-9μg/L使用目的：本試劑盒用于測定綿羊血清、血漿及相關(guān)液體樣本中I型膠原α1鏈(COL1A1)含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中綿羊I型膠原α1鏈(COL1A1)水平。用純化的綿羊I型膠原α1鏈(COL1A1)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入I型膠原α1鏈(COL1A1)，再與HRP標記的I型膠原α1鏈(COL1A1)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在

ELISA實驗結(jié)果為什么有時候會復(fù)測？2023/03/06

在ELISA實驗過程中時常會出現(xiàn)復(fù)測現(xiàn)象即我們時常說的"花板"現(xiàn)象，這種現(xiàn)象影響檢驗結(jié)果的正確判讀，對工作造成一定的不利影響，一旦出現(xiàn)“花板”，實驗結(jié)果必須放棄，重新進行，不僅浪費物料和時間，而且還會出現(xiàn)樣本量缺少、交叉污染、報告延遲等一系列問題。影響因素分析如下：一、標本因素正確處理標本，防止大規(guī)模溶血、血漿層異物、使用一次性加樣槍頭，防止交叉污染。血清和血漿均可以用于檢測，但血清的分離應(yīng)在抽血后等血液wan全凝固后再離心。二、試劑因素正確保存及使用有效試劑。使用過期試劑及底物接觸金屬容器、底

競爭法ELISA中，主要兩種計算方法2023/02/27

在競爭法ELISA中，陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強度取決于反應(yīng)中酶結(jié)合物的濃度和加入競爭抑制物的量，一般調(diào)節(jié)陰性對照的吸光度在1.0-1.5之間，此時反應(yīng)最為敏感。競爭法ELISA不易用自視判斷結(jié)果，因肉眼很難辨別弱陽性反應(yīng)與陰性對照的顯色差異，一般均用比色計測定，讀出S、P和N的吸光值。計算方法主要也有兩種，即陽性判定值法和抑制率法。a.陽性判定值法與間接法和夾心法中的陽性判定值法基本相同，ELISA試劑盒但在計算公式中引入陽性對照A值，現(xiàn)舉某種檢測抗HBc的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對

ELISA測定的常用模式--競爭法測抗原2023/02/13

大分子抗原因其具有兩個以上的抗原決定簇，而可用雙抗體夾心法測定，小分子半抗原如di高辛、茶堿等藥物以及T3，T4及睪酮等激素因其只有一個抗原決定簇，從而無法使用雙抗夾心方法測定，只能采用競爭抑制法測定。具體步驟如下：1．先用抗小分子的特異抗體如雙抗體夾心法一樣包被固相并封閉。2．同時加入待測樣本和酶標的小分子，溫育一定時間后洗板；此步中，待測樣本的小分子將與酶標小分子競爭與固相上特異抗體結(jié)合。3．加入酶底物，溫育顯色測定，顯色的強弱與待測樣本中的小分子含量成反比。這種測定模式中，需要得到小分子與

雙抗夾心 ELISA試劑盒的反應(yīng)時間2023/02/06

在保證ELISA有效檢測病原菌的前提下，快速、方便也是雙抗夾心ELISA的必要條件。雙抗夾心ELISA從加入待測抗原到得出結(jié)果，檢測大腸桿菌O157:H7共需要5h左右，而間接ELISA則需要7h(包被37℃，2h)或者17h(包被4℃guo夜)。本論文篩選出的雙抗夾心ELISA檢測大腸桿菌O157:H7省去封閉這一步驟。在間接ELISA測定抗原中，封閉一般是bi不可少的，因為包被不同濃度抗原不一定可以wan全覆蓋固相載體表面，如果不封閉，很可能使隨后加入的特異性抗體和酶標二抗直接被吸附到固相載

人鐵調(diào)素Hepcidin ELISA試劑盒使用說明書2023/01/30

本試劑盒僅供研究使用。使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中鐵調(diào)素Hepcidin含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人鐵調(diào)素Hepcidin水平。用純化的人鐵調(diào)素Hepcidin抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入鐵調(diào)素Hepcidin，再與HRP標記的鐵調(diào)素Hepcidin抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的鐵調(diào)素H

人CXC趨化因子配體10（CXCL10）elisa試劑盒說明書2023/01/09

本試劑盒僅供研究使用。使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中CXC趨化因子配體10（CXCL10）含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人CXC趨化因子配體10（CXCL10）水平。用純化的人CXC趨化因子配體10（CXCL10）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入CXC趨化因子配體10（CXCL10），再與HRP標記的CXC趨化因子配體10（CXCL10）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶

小鼠超氧化物歧化酶（SOD）elisa試劑盒使用說明書2023/01/03

使用目的：本試劑盒用于測定小鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中超氧化物歧化酶（SOD）含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中小鼠超氧化物歧化酶（SOD）水平。用純化的小鼠超氧化物歧化酶（SOD）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入超氧化物歧化酶（SOD），再與HRP標記的超氧化物歧化酶（SOD）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的超氧化物歧化酶

培養(yǎng)箱的使用方法2022/12/26

培養(yǎng)箱是實驗室bi不可少的實驗設(shè)置，那應(yīng)該如何使用呢？使用過程中有哪些注意事項呢？您都知道嗎？恒遠生物帶您了解了解培養(yǎng)箱，一起來看看吧！培養(yǎng)箱，具有制冷和加熱雙向調(diào)溫系統(tǒng)，溫度可控的功能，是植物、生物、微生物、遺傳、病毒、醫(yī)學、環(huán)保等科研，教研，教育部門bu可缺少的實驗室設(shè)備，廣泛應(yīng)用于低溫恒溫試驗、培養(yǎng)試驗、環(huán)境試驗等，適用于環(huán)境保護、衛(wèi)生防疫、藥檢、農(nóng)畜、水產(chǎn)等研究、院校、生產(chǎn)部門、是水體分析和800測定，細菌、霉菌、微生物的培養(yǎng)、保存、植物栽培、育種實驗的專用恒溫設(shè)備。培養(yǎng)箱使用步驟：1.