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質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)說(shuō)明2017/11/11: 質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)說(shuō)明·客戶(hù)自帶的載體需提供詳細(xì)的酶切圖譜及相關(guān)信息?！び捎谀承┗虮磉_(dá)產(chǎn)物會(huì)抑制宿主菌生長(zhǎng)。因此，我們不保證所有的基因都能夠表達(dá)?！た蛻?hù)請(qǐng)?zhí)峁┹d體改造的具體要求，預(yù)進(jìn)行改造的質(zhì)粒（序列經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證正確）及其圖譜和序列，能夠獲得所需元件或基因的模板（質(zhì)?；蚱渌┘捌湎嚓P(guān)圖譜和序列?！?duì)于載體改造和基因片段克隆，客戶(hù)需要提供載體、PCR產(chǎn)物或酶切產(chǎn)物、以及載體來(lái)源及基因背景資料等。載體構(gòu)建樣品要求帶有目的基因的克隆載體（≥1ug），含有目的質(zhì)粒的菌種。載體構(gòu)建服務(wù)價(jià)格服務(wù)編號(hào)內(nèi)容說(shuō)明價(jià)

DNA抽提時(shí)樣本抽提的范圍2017/11/11: 純化柱對(duì)于DNA的zui大容量約為30微克。通常每200萬(wàn)Hela細(xì)胞或500萬(wàn)淋巴細(xì)胞可以抽提得到15-25微克總DNA，每25mg肝、腦、腎組織可以抽提得到10-30微克總DNA，每25毫克心、肺組織可以抽提得到5-10微克總DNA，每10mg脾組織可以抽提得到5-30微克總DNA，每1.2cm小鼠尾尖或0.3cm大鼠尾尖可以獲得10-25微克總DNA。DNA抽提小量試劑盒包裝清單：產(chǎn)品編號(hào)產(chǎn)品名稱(chēng)包裝D-1樣品裂解液A10mlD-2樣品裂解液B11mlD-3洗滌液I21ml（*次使用前加入

DNA抽提注意事項(xiàng)2017/11/11: DNA抽提注意事項(xiàng)：1.抽提細(xì)菌、酵母樣品時(shí)還需要一些特定的試劑，詳情請(qǐng)參考相關(guān)實(shí)驗(yàn)步驟。2.如需制備不含RNA的高純度總DNA，需自備RNaseA。3.溫度較低時(shí)樣品裂解液A或樣品裂解液B中可能會(huì)有沉淀產(chǎn)生，屬正?，F(xiàn)象。使用前必須檢查一遍。如有沉淀，55℃水浴孵育使沉淀溶解，混勻后使用。4.*次使用前洗滌液I需添加7ml無(wú)水乙醇，洗滌液II需添加24ml無(wú)水乙醇，混勻，并在瓶上做好標(biāo)記。5.試劑盒需使用55℃水浴，請(qǐng)?zhí)崆白骱脺?zhǔn)備。6.除特別說(shuō)明外，每次Vortex應(yīng)控制在5-10秒左右。7.試

DNA抽提和純化方法2017/11/11: DNA抽提和純化方法介紹：一、酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎細(xì)胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯DNA大小為100-150kb二、甲酰胺解聚法：破碎細(xì)胞同上，然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合，再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。三、玻璃棒纏繞法：用鹽酸胍裂解細(xì)胞，將裂解物鋪于乙醇上，然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪，DAN沉淀液繞于玻棒。生成DNA約80kb。四、異丙醇沉淀法：基本同1法，僅用二倍容積異丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在異丙醇中可溶狀態(tài)）五、表面活性劑快速制備法：

RNAi的應(yīng)用前景2017/04/14: RNAi的應(yīng)用前景RNAi技術(shù)中的相關(guān)問(wèn)題主要涉及以下幾點(diǎn)：（1）dsRNA序列的選擇dsRNA主要選自已知的cDNA的開(kāi)放閱讀框架（ORF）中的基因區(qū)域。為防止mRNA調(diào)控蛋白對(duì)RISC與靶RNA結(jié)合的干擾,應(yīng)避免選擇包括:1）起始密碼子下游或終止密碼的50～100核苷酸位置以?xún)?nèi)的區(qū)域;2）5′或3′端的非翻譯區(qū)域;3）內(nèi)含子區(qū)域。此外,序列選擇時(shí)也應(yīng)避開(kāi)多聚鳥(niǎo)苷酸序列區(qū)（≥3個(gè)）,因?yàn)檫@樣容易形成四聚體結(jié)構(gòu),抑制RNAi作用。選擇與靶mRNA上序列互補(bǔ)的21～23個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的片段,以AA開(kāi)

離心機(jī)防腐基本措施2015/10/13: 工業(yè)使用的離心機(jī)zui頭疼的就是一件事，就是離心機(jī)在化工原料里長(zhǎng)時(shí)間使用，遇到的離心機(jī)腐蝕問(wèn)題，現(xiàn)在給大家推薦4中防止或者可以減緩離心機(jī)腐蝕的四個(gè)措施。*、選對(duì)材質(zhì)的離心機(jī)很重要因?yàn)椴煌奈锪霞胺蛛x要求，需要選用不同的機(jī)型。機(jī)型及主參數(shù)確定后，根據(jù)不同材料在不同環(huán)境中的耐腐蝕性能，綜合其理化特J生，性?xún)r(jià)比等諸多因素，從基本面上確定強(qiáng)度零件材料。從材料本身來(lái)看，它針對(duì)的目標(biāo)物料是安全的。第二、離心機(jī)的機(jī)構(gòu)設(shè)計(jì)，一個(gè)的設(shè)計(jì)能延長(zhǎng)設(shè)備使用壽命，確保設(shè)備的安全性，對(duì)于結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)，zui容易加速腐蝕的設(shè)計(jì)缺

*章 Western Blot 簡(jiǎn)介2015/07/21: *章WesternBlot簡(jiǎn)介1.1WesternBlot原理與Southern或Northern雜交方法類(lèi)似，但WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測(cè)物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過(guò)PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類(lèi)型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過(guò)底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳

FDbio-Dura ECL（CCD掃描儀ECL）2015/07/21: 隨著Cooled-CCD技術(shù)的發(fā)展，成像系統(tǒng)成本越來(lái)越低，因而在現(xiàn)在的實(shí)驗(yàn)室里這些設(shè)備越來(lái)越普遍。Cooled-CCD照相機(jī)與X膠片相比具有瞬時(shí)影像處理、立即輸出、不需要膠片處理裝置及暗室等成本花費(fèi)、可用軟件半定量分析等優(yōu)點(diǎn)，然而，這項(xiàng)技術(shù)應(yīng)用于WB化學(xué)發(fā)光法顯影還要求底物能產(chǎn)生高強(qiáng)度、長(zhǎng)持續(xù)時(shí)間的信號(hào)，以被照相機(jī)捕獲到。經(jīng)過(guò)FD生物的不斷開(kāi)發(fā)，現(xiàn)在的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑從以前的發(fā)光時(shí)間持續(xù)幾十分鐘，到現(xiàn)在可持續(xù)長(zhǎng)達(dá)幾個(gè)小時(shí)到一天，新的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒很多兼容CCD成像檢測(cè)，如果是實(shí)驗(yàn)室有CCD成

第六章蛋白轉(zhuǎn)膜2015/07/14: 第六章蛋白轉(zhuǎn)膜6.1轉(zhuǎn)膜的定義將電泳后分離的蛋白質(zhì)從凝膠中轉(zhuǎn)移到固相載體（例如NC膜）上，通常有兩種方法：毛細(xì)管印跡法和電泳印跡法。常用的電泳轉(zhuǎn)移方法有濕轉(zhuǎn)和半干轉(zhuǎn)。兩者的原理*相同，只是用于固定膠/膜疊層和施加電場(chǎng)的機(jī)械裝置不同。前者操作容易，轉(zhuǎn)移效率高；而后者適用于大膠的蛋白轉(zhuǎn)移，所用緩沖液少。6.2轉(zhuǎn)移膜的選擇雜交膜的選擇是決定Westernblot成敗的重要環(huán)節(jié)。應(yīng)根據(jù)雜交方案、被轉(zhuǎn)移蛋白的特性以及分子大小等因素，選擇合適材質(zhì)、孔徑和規(guī)格的雜交膜。用于Westernblot的膜主要有兩種

第九章蛋白顯色2015/07/14: 第九章蛋白顯色酶促反應(yīng)比同位素安全且快速，已經(jīng)成為WesternBlot的主流檢測(cè)方法。酶促反應(yīng)可以搭配不同的底物從而實(shí)現(xiàn)不同的顯色方法：化學(xué)發(fā)光和底物顯色，前者靈敏度很高，已經(jīng)達(dá)到皮克級(jí)別，甚至還有飛克級(jí)別的，靈敏度超過(guò)了同位素；而后者由于直接顯色而操作簡(jiǎn)便且成本低。大家zui為熟悉熟悉當(dāng)數(shù)辣根過(guò)氧化物酶HRP（HorseradishPeroxidase）和堿性磷酸酶AP（AlkalinePhosphatase），此外還有比較少見(jiàn)的葡萄糖氧化酶（GlucoseOxidase）和β半乳糖苷酶（β

第五章蛋白電泳2015/07/14: 第五章蛋白電泳5.1SDS-PAGE基本原理1.SDS-PAGE是在蛋白質(zhì)樣品中加入SDS和含有巰基乙醇的樣品處理液，SDS是一種很強(qiáng)的陰離子表面活性劑，它可以斷開(kāi)分子內(nèi)和分子間的氫鍵，破壞蛋白質(zhì)分子的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)。2.強(qiáng)還原劑巰基乙醇（或二硫蘇糖醇，DTT）可以斷開(kāi)二硫鍵破壞蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu)。使蛋白質(zhì)分子被解聚成肽鏈形成單鏈分子。解聚后的側(cè)鏈與SDS充分結(jié)合形成帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物。3.蛋白質(zhì)分子結(jié)合SDS陰離子后，所帶負(fù)電荷的量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)了它原有的凈電荷，從而消除了不同種蛋白質(zhì)之間

第四章蛋白變性2015/07/14: 第四章蛋白變性SDS：陰離子去污劑、變性劑；氨基酸側(cè)鏈與SDS充分結(jié)合形成帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)-SDS膠束；蛋白質(zhì)-SDS膠束所帶的負(fù)電荷大大超過(guò)了蛋白質(zhì)分子原有的電荷量，消除了不同分子之間原有的電荷差異；與強(qiáng)還原劑一起使蛋白分子氫鍵、疏水鍵打開(kāi)，使蛋白質(zhì)分子線(xiàn)性化。蛋白質(zhì)-SDS膠束的特點(diǎn)：具有相同的形狀，形狀像一個(gè)長(zhǎng)橢圓棒；平均1g蛋白質(zhì)結(jié)合1.4gSDS；短軸對(duì)不同的蛋白質(zhì)亞基-SDS膠束基本上是相同的；長(zhǎng)軸的長(zhǎng)度則與亞基分子量的大小成正比。

第三章蛋白定量2015/07/14: 第三章蛋白定量目前常用比色法測(cè)定樣品蛋白的含量：Bradford法（考馬斯亮藍(lán)法）、Lowry法（Folin-酚試劑法）、BCA法等。但各有優(yōu)缺點(diǎn)，大家可以根據(jù)具體情況選取。按相應(yīng)蛋白質(zhì)定量試劑盒操作說(shuō)明操作，測(cè)定樣品濃度。收集完蛋白樣品后，為確保每個(gè)蛋白樣品的上樣量一致，需要測(cè)定每個(gè)蛋白樣品的蛋白濃度。根據(jù)所使用的裂解液的不同，需要采用適當(dāng)?shù)牡鞍诐舛葴y(cè)定方法。因?yàn)椴煌牡鞍诐舛葴y(cè)定方法對(duì)于一些去垢劑和還原劑等的兼容性差別很大，大家可以根據(jù)具體情況選取。Bradford法（考馬斯亮藍(lán)法）:考馬斯

第二章蛋白樣品的提取2015/07/14: 第二章蛋白樣品的提WesternBlot基本流程2.1.1通過(guò)有機(jī)溶劑或水溶法制備總蛋白水溶液提取法：針對(duì)水、稀鹽、稀酸或堿溶液中的蛋白質(zhì)。稀鹽和緩沖系統(tǒng)的水溶液對(duì)蛋白質(zhì)穩(wěn)定性好、溶解度大、是提取蛋白質(zhì)zui常用的溶劑。有機(jī)溶劑提取法：對(duì)于分子中非極性側(cè)鏈較多的蛋白質(zhì)可用有機(jī)溶劑提取，包括乙醇、丙酮和丁醇等。2.1.2通過(guò)層析或電洗脫法制備目的蛋白2.1.3裂解液的選擇

第八章抗體孵育2015/07/14: 第八章抗體孵育一抗孵育(Primaryantibodyincubation)參考一抗的說(shuō)明書(shū)，按照適當(dāng)比例用封閉液稀釋一抗。吸盡封閉液后，立即加入稀釋好的一抗，室溫或4℃在搖床上緩慢搖動(dòng)孵育1～2小時(shí)。如果一抗孵育一小時(shí)效果不佳，可以在4℃緩慢搖動(dòng)孵育一夜。（注意：抗體濃度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致背景較深，過(guò)低會(huì)導(dǎo)致和抗原結(jié)合不充分，出現(xiàn)假陰性）。回收一抗。然后加入Western洗滌液，在搖床上緩慢搖動(dòng)洗滌5-10分鐘。吸盡洗滌液后，再加入洗滌液，洗滌5-10分鐘。共洗滌3次。如果結(jié)果背景較高可以適當(dāng)延長(zhǎng)洗滌

第七章封閉（Blocking）2015/07/14: 第七章封閉（Blocking）雜交膜上有很多非特異性的蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)，為防止這些位點(diǎn)與抗體結(jié)合引起非特異的染色和背景，一般用惰性蛋白質(zhì)或非離子去污劑封閉膜上的未結(jié)合位點(diǎn)來(lái)降低抗體的非特異性結(jié)合。封閉劑應(yīng)該封閉所有未結(jié)合位點(diǎn)而不替換膜上的靶蛋白、不結(jié)合靶蛋白的表位，也不與抗體或檢測(cè)試劑有交叉反應(yīng)。zui常見(jiàn)的封閉劑是BSA、脫脂奶粉、酪蛋白、明膠和Tween-20（0.05-0.1%）稀溶液PBST或者TBST。5%脫脂奶粉或BSA（室溫孵育1h）WesternBlot膜封閉液Tween-20的作

siRNA干擾載體構(gòu)建與引物設(shè)計(jì)2014/08/08: siRNA干擾載體構(gòu)建與引物設(shè)計(jì)siRNA干擾載體構(gòu)建過(guò)程中，針對(duì)siRNA設(shè)計(jì)的引物是怎么設(shè)計(jì)的?一般是合成一對(duì)引物，然后退火，再與線(xiàn)性化的載體做連接。由于引物比較長(zhǎng)，所以合成時(shí)一般都會(huì)有比較多的堿基突變，因此，做shRNA表達(dá)載體構(gòu)建的主要難度，在于篩選出正確的克隆，有時(shí)候可能要選很多個(gè)克隆測(cè)序才能篩到想要的。具體的序列組成，一般是sense-loop-antisense。不同的公司會(huì)有不同的設(shè)計(jì)原則的。經(jīng)驗(yàn)：我們一般不去考慮構(gòu)建載體來(lái)得到siRNA！載體表達(dá)siRNA方法主要存在以下缺點(diǎn)：

簡(jiǎn)述DNA甲基化檢測(cè)2013/11/22: DNA甲基化是哺乳類(lèi)動(dòng)物一個(gè)重要的基因外遺傳信號(hào)。有研究表明,DNA甲基化與大多數(shù)腫瘤的發(fā)生相關(guān),抑癌基因啟動(dòng)子CpG島的高度甲基化可引起抑癌基因表達(dá)沉默，細(xì)胞出現(xiàn)無(wú)節(jié)制生長(zhǎng),導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。目前，基因的甲基化研究主要結(jié)合亞硫酸氫鈉處理和PCR技術(shù)，分為甲基化特異性PCR（MethylationspecificPCR,MSP）和硫化測(cè)序PCR（BisulfitesequencingPCR,BSP）。甲基化特異性的PCR（MSP）原理：雙鏈DNA變性解鏈后，在HSO3-作用下發(fā)生C→U轉(zhuǎn)化，C若已

細(xì)胞培養(yǎng)基類(lèi)型及其特性2013/11/21: 培養(yǎng)基是既是培養(yǎng)細(xì)胞中供給細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞生殖增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。培養(yǎng)基的種類(lèi)很多，按其物質(zhì)狀態(tài)分為半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基兩類(lèi)；按其來(lái)源分為合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基。（1）合成培養(yǎng)基：合成培養(yǎng)基是根據(jù)細(xì)胞所需物質(zhì)的種類(lèi)和數(shù)量嚴(yán)格配制而成的。內(nèi)含碳水化合物、氨基酸、脂類(lèi)、無(wú)機(jī)鹽、維生素、微量無(wú)素和細(xì)胞生長(zhǎng)因子等。單獨(dú)使用細(xì)胞雖有生存但不能很好的生長(zhǎng)增殖。（2）天然培養(yǎng)基：使用zui普遍的天然培養(yǎng)基是血清，基本以小牛血清zui普遍。血清由于含有多種細(xì)胞生長(zhǎng)因子、促貼附

簡(jiǎn)述腺病毒包裝2013/11/20: 腺病毒概述腺病毒（Adenovirus，AdV）是一種無(wú)包膜的線(xiàn)性雙鏈DNA病毒，基因組長(zhǎng)約35000bp，理論上可編碼22~40個(gè)基因，兩端各有長(zhǎng)約100~150bp的末端反向重復(fù)序列（ITR），在其左端ITR3，端為長(zhǎng)約300bp的包裝信號(hào)（Ψ）。病毒顆粒直徑約80~110nm，病毒衣殼有252個(gè)殼粒，呈規(guī)則的正二十面體面體結(jié)構(gòu)，其中包括240個(gè)六聯(lián)體和12個(gè)位于正二十面體頂部的五聯(lián)體構(gòu)成。腺病毒是一種非整合型雙鏈DNA病毒，在自然界中廣泛分布。盡管一些類(lèi)型的腺病毒會(huì)引起人胃腸道、呼吸系統(tǒng)或

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