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2022
07-21

PCR原理及反應步驟
PCR的原理：多聚酶鏈式反應(polymerasechainreaction)簡稱PCR技術，是近30多年發(fā)展起來的一種體外擴增特異性DNA片段的技術，可在數(shù)小時之內(nèi)對僅有幾個拷貝的基因放大千萬倍。那么，PCR的原理是怎樣的呢？PCR技術實際上是在模板DNA、引物以及原料(四種脫氧核糖核苷酸)在適宜的反應條件下，通過DNA聚合酶的酶促反應完成DNA擴增的過程。PCR技術的特異性取決于引物和模板DNA結合的特異性。PCR反應分為三步：1)變性：通過加熱時DNA雙螺旋的氫鍵斷裂，雙鏈解離成單鏈DNA
2022
07-20

影響重組腸激酶活性的因素有哪些
腸激酶(Enterokinase，EK，EC3.4.21.9)是一種異源二聚體形式存在于哺乳動物十二指腸內(nèi)的絲氨酸蛋白酶。它能高效專一性的水解工程菌表達的融合蛋白（識別位點是Asp-Asp-Asp-Asp-Lys）釋放出目的蛋白，被廣泛用于生物工程制藥的開發(fā)。牛腸激酶由一條結構亞基（重鏈）和一條催化亞基（輕鏈）構成，二者以二硫鍵結合。據(jù)報道，重組腸激酶輕鏈體外具有全酶的酶切特異性，同時對基因工程融合蛋白底物的酶切活性較提純的牛腸激酶明顯增強。天然腸激酶來源有限，且從動物組織提取的腸激酶易污染其他
2022
06-30

一圖讀懂細胞轉染那些事-part1
簡析各類細胞轉染方法細胞轉染是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術。定義隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發(fā)展，轉染已經(jīng)成為研究和控制真核細胞基因功能的常規(guī)工具。下文中將從多個維度，介紹細胞轉染的各類小知識。一、瞬時轉染與穩(wěn)定轉染哺乳動物細胞表達系統(tǒng)能促使在其內(nèi)表達的蛋?正確折疊并進行復雜修飾，表達的蛋?更接近真實自然狀態(tài)，便于模擬真實細胞內(nèi)環(huán)境，進行蛋白功能研究。把目的基因轉入哺乳動物細胞，表達?產(chǎn)蛋?通常有兩種?式：瞬時轉染與穩(wěn)定轉染（構建穩(wěn)定細胞系），如圖1.所示。圖1：瞬時
2022
06-23

RNA提取方法總結
這篇文章主要講的是幾種常用的RNA提取方法。1、異硫氰酸胍氯化銫超速離心法原理：使用蛋白質變性劑異硫氰酸胍有效抑制RNA酶的活性，經(jīng)過起始密度為1.78g/ml的氯化銫介質，進行密度梯度超速離心，RNA沉淀于管底，而DNA與蛋白質在上清中。使用這種方法，不但能得到高質量的RNA，而且能同時分離出細胞染色體DNA.本法對于冷凍時間長、細胞質和細胞核不易分離的組織標本以及富含RNA酶的組織細胞(如胰腺)的RNA提取尤其適合。此法提取的RNA的質量好和成功率高，已成為提取哺乳動物細胞RNA的常規(guī)方法。
2022
05-27

如何選擇核酸染料
科研人員還在為如何選擇核酸染料而煩惱嗎？帶您認識幾款優(yōu)秀的核酸染料一、李記GelRed,李記GelGreen——李記生物研發(fā)的兩款核酸染料。據(jù)不*統(tǒng)計，有強烈致癌、致畸作用的EB染料仍以90%的優(yōu)勢占據(jù)核酸染料使用量多，在眾多的EB替代染料中，名氣最大的要數(shù)Life公司的SYBR系列、美國Biotium公司的GelRed,GelReen染料，其他替代染料要么是EB,吖啶橙改名，要么是國內(nèi)不成熟的仿品，安全性毫無保障。Life公司的SYBRGreen,SYBRGoad,SYBRSafe嚴格意義上來
2022
05-25

細胞增殖及細胞活力檢測方法
一、細胞增殖與細胞活性細胞增殖是活細胞的重要?理功能之?，細胞增殖與細胞活性檢測所用的方法相近，但實驗目的不同。細胞增殖是通過細胞增殖的物質基礎判斷細胞的數(shù)量變化，例如細胞計數(shù)法，反應的就是細胞真實的數(shù)量。而細胞活性檢測，則是通過檢測細胞受到藥物或其他措施處理后，標志物產(chǎn)量或濃度的變化，進而判斷藥物或處理措施的作用，細胞活性檢測所得結論，往往反映了實驗設計的目的。細胞增殖檢測，因檢測標志物的不同，目前大致分為四類：DNA合成檢測、代謝活性檢測、細胞增殖相關抗原檢測和ATP濃度檢測。細胞活性檢測通
2022
05-24

蛋白保存方法，你知道多少
生物大分子的貯藏保存可分為干態(tài)和液態(tài)貯藏兩種。蛋白質失活受多種理化因素的影響，主要有空氣、溫度、水分、光線、酸堿度、樣品狀態(tài)、微生物活動、保存時間和容器等。這些因素可單獨起作用，但更多情況是協(xié)同作用?？偟膩碚f，蛋白質的保存主要考慮其構型穩(wěn)定、活性中心的保護、避免輔助因子喪失等，以防止其變性、解聚或降解。由于溫度和水分對蛋白質的穩(wěn)定性影響很大，故蛋白質最好是低溫、冷凍或冷凍干燥后低溫干燥保存。1.液態(tài)保存(1).在低溫下保存蛋白質對熱敏感，溫度越高，穩(wěn)定性越差。因此，低溫保存蛋白質溶液在絕大多數(shù)情
2022
04-26

牛血清白蛋白BSA在生化實驗中有廣泛的應用
牛血清白蛋白（BovineSerumAlbumin,BSA）是牛血清中的一種球蛋白，又稱第五組分（需要注意的是，第五組分并不是BSA的一種組份，而是EdwinJ.Cohn教授早期從血液中通過特定的分離技術得到5種組份，其中第五種就是白蛋白），CAS號為9048-46-8，包含583個氨基酸殘基，分子量為66.430kDa，等電點為4.7。牛血清白蛋白在生化實驗中有廣泛的應用，無免疫球蛋白IgG牛血清白蛋白產(chǎn)品血液中的白蛋白主要起維持滲透壓作用、PH緩沖作用、載體作用和營養(yǎng)作用。在動物細胞無血清培
2022
04-24

細胞凍存液分類與選擇
細胞凍存是細胞生物學研究及藥物研發(fā)細胞實驗中需要經(jīng)常面對的常規(guī)操作。隨著細胞越來越嬌，人工越來越貴，各種細胞凍存液應運而生，如何從名目繁多的細胞凍存液中選擇變成一個問題。本文從細胞凍存液分類，應用場景，使用效果等多方面加以闡釋，希望能對如何選擇細胞凍存液有所助益。一、細胞凍存液的分類從成分劃分（1）滲透性和非滲透性滲透性保護劑分子量小可滲透到細胞內(nèi)，如甘油、DMSO、乙二醇等，其在細胞冷凍存*凝固之前，滲入細胞內(nèi)，降低細胞內(nèi)外溶液中的電解質濃度，阻止細胞內(nèi)水分外滲，避免細胞過分脫水皺縮，避免細胞
2022
04-22

細胞凍存液原理及配制方法
細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以最大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結晶對細胞造成損傷。細胞凍存是細胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實驗順利進行的重要技術手段。在細胞建株和建系中，及時凍存原始細胞是十分重要
2022
03-24

基因組DNA提取原理說明
DNA是遺傳信息的載體，是最重要的生物信息分子，是分子生物學研究的主要對象。所以基因組DNA提取實驗是分子生物學最基本實驗之一。今天若重介紹基因組DNA提取的原理。在接下來的時間了還會介紹動物基因組DNA的提取步驟。DNA.RNA和核苷酸都是極性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有機溶劑，它們的鈉鹽比游離酸易溶于水，RNA鈉鹽在水中溶解度可達40g/L.DNA在水中為10g/L,呈黏性膠體溶液。在酸性溶液中，DNA天然狀態(tài)的DNA是以脫氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于細胞核中。要從細胞中提
2018
11-13

EZ ECL Femto化學發(fā)光液（飛克級）
使用方法1)取出印記膜，加入合適的封閉液在溫室下孵育20-60分鐘，同時振蕩，以封閉膜上非特異性蛋白結合位點。2)將膜從封閉液中取出，與一抗工作液在溫室孵育1小時，同時振蕩；或在28℃孵育過夜，不振蕩。3)將足量的洗滌緩沖液加至膜上，保證緩沖液將膜*覆蓋。振蕩孵育≥5分鐘，更換洗滌緩沖液并重復該步驟4-6次。增加洗滌緩沖液體積，洗滌次數(shù)和洗滌時間有助于降低背景信號。注：1）孵育前，膜在洗滌緩沖液中的短暫淋洗會提高洗滌效率；2）按前文建議的HRP標記二抗稀釋度非常重要的。4)將HRP標記的二抗工作
2018
09-14

胎牛血清選擇及使用常見問題解析
1、實驗室如何選擇適合的血清?在國內(nèi)*的血清是GIBCO和HYCLONE，度和使用范圍非常普遍，但是價格普遍偏貴。life-ilab這個品牌是李記生物的自主品牌，國外直接貼牌，在20多個品牌中選擇質量、批間差異小的大量采購，很大程度降低批次間差異。研發(fā)小組及廣大的科研客戶使用反饋效果很好，價格實惠！對于特殊的細胞李記生物采購GIBCO或HYCLONE血源，同樣經(jīng)過檢測，用實在的實驗數(shù)據(jù)確定采購批次，而不是迷信品牌。2、胎牛血清和小牛血清的區(qū)別及注意事項？來源不同：新生牛(小牛)血清(Calfse
2018
08-29

EZ Protein any KD PAGE蛋白電泳試劑盒使用方法
產(chǎn)品描述在蛋白電泳過程中，配膠麻煩、電泳耗時長、需要反復調(diào)試凝膠濃度是我們面臨的三個棘手問題。李記生物研發(fā)的EZProtein系列蛋白電泳產(chǎn)品的克服了上述問題。2-5分鐘配膠，濃縮膠、分離膠一次成型；25分鐘恒壓完成電泳；10-250KD蛋白質一塊膠即可分離，免去了反復調(diào)整膠濃度的麻煩。*配方，本產(chǎn)品不添加TEMED，沒有刺激性氣味，丙烯酰胺用量低，是一款綠色安全的新產(chǎn)品。包裝規(guī)格試劑盒組份D3030L1252D3030L1250EZProteinanyKDPAGE濃縮膠A液25ml50mlEZ
2018
08-13

李記生物支原體檢測試劑盒可以檢測13種支原體
上海李記生物快速支原體檢測試劑盒以上13種支原體約占細胞支原體污染的99%以上，本試劑盒產(chǎn)品全部可以檢測。哺乳動物細胞的培養(yǎng)，支原體（Mycoplasma）污染是個世界性的問題。支原體污染幾乎可以改變細胞的所有參數(shù)，導致實驗結果的不準確、甚至*錯誤。從2013年開始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及細胞培養(yǎng)都要進行支原體檢測。本試劑盒可以檢測：（1）M.Hyorhinis、（2）M.Fermentans、（3）M.Arginini、（4）M.hominis、（5）M.orale、
2018
07-26

Quick Cell 外泌體提取試劑盒常見問題回答
1、本試劑盒貨號：D3030L1411如何保存？室溫保存，無需低溫保存。2、本試本劑盒貨號：D3030L1411能否分離純化200-1000nm直徑的囊泡嗎？不能，本試劑盒不能用于直徑大于200nm囊泡的分離。3、本試劑盒貨號：D3030L1411適用于哪些種類樣品中的外泌體提??？除細胞上清液外，本試劑盒還可用于尿液及其他低密度體液（如腦脊液、腹水、羊水、乳汁、唾液等）的外泌體提取。4、本試劑盒貨號：D3030L1411提取過程會用到哪些儀器和耗材？低溫高速離心機、渦旋振蕩器（Vortex）、水
2018
07-26

PEI轉染試劑常見問題
Q：C4058L1080和C4058L1090有什么區(qū)別？A：我們有兩種，80是針對線性的，90是支鏈轉染，比如慢性病包試劑用90比較好。Q：李記細胞轉染液和PEI固體自行配制溶液相比的優(yōu)勢在哪里？A：很多客戶買固體很難把握的，固體非常不容易溶解，包裝比較大，用的不多建議您選液體的，已做無菌處理，可以直接使用。Q：接種細胞，必須用膠原酶消化？胰酶不能用么？A：膠原酶從細菌中提取出來的酶，對膠原有很強的消化作用，適于消化纖維性組織、上皮組織以及癌組織，它對細胞間質有較好的消化作用，對細胞本身影響不
2018
07-26

CCK-8實驗方法
操作方法:1.在96孔板中配制100μl的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預培養(yǎng)24小時(在37℃，5%CO2的條件下)。2.向培養(yǎng)板加入10μl不同濃度的待測物質。如果測定細胞活性，則不需要2-3步驟，直接從第四步操作。3.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當?shù)臅r間(例如:6,12,24或48小時)。4.向每孔加入10μlCCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響O.D值的讀數(shù))。5.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。6.用酶標儀測定在450nm處的吸光度。注意事項:1）CCK-8試劑盒的檢測依賴于
2018
06-12

李記生物研發(fā)的EZ Protein系列蛋白電泳產(chǎn)品
李記生物研發(fā)的EZProtein系列蛋白電泳產(chǎn)品的克服了在蛋白電泳過程中，配膠麻煩、電泳耗時長、需要反復調(diào)試凝膠濃度是我們面臨的三個棘手問題。2-5分鐘配膠，濃縮膠、分離膠一次成型；25分鐘恒壓完成電泳；10-250KD蛋白質一塊膠即可分離，免去了反復調(diào)整膠濃度的麻煩。*配方，本產(chǎn)品不添加TEMED，沒有刺激性氣味，丙烯酰胺用量低，是一款綠色安全的新產(chǎn)品。使用方法1.取2支小燒杯（小試管亦可），在個小燒杯中加入試劑盒中的EZProteinanyKDPAGE濃縮膠A液1.0ml+EZProtein
2018
05-25

Pikogreen熒光染料使用方法
使用方法1.PikoGreen工作液的配制使用前將PikoGreendsDNA定量試劑回溫至室溫；PikoGreen是以100µL200×的濃縮液形式保存于無水DMSO中的（共10管），實驗當天，根據(jù)實驗需求用1×TE按1:200的比例稀釋適量定量試劑濃縮液。例如要準備足夠的操作溶液以2ml檢測體系測定20個樣品，可向19.9mL1×TE中加入100μLPikoGreendsDNA定量試劑。工作液見光易降解，盡量在配好后幾小時內(nèi)使用。2.配制標準品DNA溶液1)用1XTE溶液溶解dsDNA制備1

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