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細胞復(fù)蘇實驗操作步驟，你了解嗎？2022/06/17

細胞復(fù)蘇的原則：慢凍速融，必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結(jié)晶，對細胞造成損害。復(fù)蘇步驟一.實驗前準備：將水浴鍋預(yù)熱至37℃。細胞實驗室進行常規(guī)消毒，用75％酒精擦拭并且使用紫外線照射40min的超凈工作臺臺面。在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等。二．取出凍存管：根據(jù)細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。從液氮罐中取出細胞盒，取出所需的細胞，同時核對管外的編號。三．迅速解凍：迅速將凍存管投入到

貼壁細胞總有部分圓形或者漂浮的是正常情況嗎？2022/06/16

大部分貼壁細胞培養(yǎng)時都會有一些圓形透亮的細胞存在，也會有一些圓形細胞脫落懸浮的情況存在，這種主要是一些新增殖的細胞或由于局部空間不足被擠出的細胞，只要細胞持續(xù)增殖，都會有一些圓形細胞或脫落漂浮細胞，不影響細胞整體增殖和實驗，保持正常換液、傳代周期即可。細胞具體情況也可以參考細胞庫不同細胞照片比對，大部分貼壁細胞都會有圓形細胞、脫落細胞、細胞內(nèi)顆粒等情況。如何消除組織培養(yǎng)的污染？當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母，把污染細胞與其它細胞系隔離

細胞長得慢是什么情況？2022/06/15

細胞生長緩慢的常見原因:(1)培養(yǎng)基可能缺乏細胞生長所需的某種因子。通常情況下，當(dāng)小伙伴購買細胞，并沒有按照ATCC或國內(nèi)細胞庫推薦的方法制備培養(yǎng)基，使用實驗室兄弟姐妹使用的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。解決方法一般是按照推薦的方法制備培養(yǎng)基，或直接購買培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基。(2)細菌、支原體、真菌等污染:雖然培養(yǎng)基中通常添加雙抗體(青霉素和鏈霉素)，但如果無菌操作觀念不強，仍有可能造成污染。處理方法:如果有冷凍細胞，可以丟棄污染細胞。當(dāng)然，丟棄并不是隨意的，扔進垃圾桶。應(yīng)按照實驗室生物安全規(guī)定進行。然后復(fù)蘇培

關(guān)于巨噬細胞你了解多少？2022/06/14

巨噬細胞是先天免疫系統(tǒng)的一種特殊的、長壽命的吞噬細胞。巨噬細胞是三種吞噬細胞類型之一，還有粒細胞（中性粒細胞、嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞）和樹突狀細胞（DCs）。大多數(shù)病原體通過呼吸道、腸粘膜、皮膚病變或泌尿生殖道進入宿，NOI個遇到的就是在粘膜下組織中的巨噬細胞，它們通常是NOI個遇到病原體的防御細胞。一旦微生物進入宿主并開始復(fù)制，它就被其中一種吞噬細胞所識別，并被吞噬形成吞噬溶酶體，然后再經(jīng)過酸化和酶處理，產(chǎn)生高活性一氧化氮和超氧自由基來殺死病原體，這一過程稱為吞噬作用。一般來說，巨噬細胞可

細胞培養(yǎng)基常見成分及作用功能介紹2022/06/10

能量來源每一個生長培養(yǎng)基都需要碳源，以供細胞新陳代謝。碳源通常是葡萄糖，但也可以是其他糖類，如半乳糖、己糖、果糖或其他碳源(如丙酮酸，谷氨酰胺)。葡萄糖通常以終濃度為5.5mM的含量添加，大約等于人體血液中的葡萄糖水平。然而，你可以購買葡萄糖濃度變化范圍很廣的培養(yǎng)基來滿足你的具體需求。你甚至可以購買不含葡萄糖的培養(yǎng)基，然后自己定制濃度，模擬高糖的糖尿病狀況，或者研究低糖應(yīng)激反應(yīng)。緩沖液細胞需要一種特殊的pH值從7.2到7.4，否則它們無法最好地發(fā)揮細胞功能，以供生長和存活。在二氧化碳含量較高的培

細胞培養(yǎng)時培養(yǎng)液出現(xiàn)渾濁的原因2022/06/09

可能原因：1細胞崩解了；2培養(yǎng)基可能污染了，取部分培養(yǎng)基進行檢菌試驗細胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細菌污染、支原體污染、原蟲污染、黑膠蟲污染、真菌污染、病毒污染以及非細胞污染.他們在細胞培養(yǎng)中污染的特點如下：1、細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,根據(jù)感染細菌的不同,可有不同的外形,培養(yǎng)液一般會渾濁變黃,對細胞生長影響明顯.2、支原體：黑色的,好象多為多形,培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁,原體感染,國內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測,而支原體是牛血清中最常見的微生物之一.而且它不能

細胞培養(yǎng)中抗生素如何使用？2022/06/08

1.細胞庫之細胞培養(yǎng)基不加抗生素1.1.培養(yǎng)自ATCC引進之細胞株，培養(yǎng)基中不加抗生素1.2.培養(yǎng)自其它實驗室引進之細胞株，制作tokenfreeze前培養(yǎng)基須添加抗生素，待tokenfreeze通過污染測試后，大量培養(yǎng)時則不加抗生素。2.寄送活細胞時，須將培養(yǎng)液充滿整個flask時，則須添加抗生素(penicillin100units/ml+streptomycin100ug/ml)。3.若要檢測mycoplasma，則培養(yǎng)基內(nèi)不可添加gentamicin，因gentamicin會抑制myco

ELISA檢測血清的詳細事項2022/06/07

大部分elisa檢測均以血清為標本。血清標本可按慣例方法收集，應(yīng)留意防止溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為符號的ELISA測定中，溶血標本可能會添加非特異性顯色。血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會發(fā)生假陽性反應(yīng)。一般說來，在5天內(nèi)測定的血清標本可放置于4℃。超越一周測定的需-20℃保存。凍住血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，散布不均，應(yīng)充沛混勻并防止發(fā)生氣泡?；鞚峄蛴谐练e的血清標本應(yīng)先離心或過濾，弄清后再檢測。重復(fù)凍融會使抗體效價下跌，所

培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)基你選對了嗎？2022/06/06

干細胞治療也被稱為再生醫(yī)學(xué)，是指利用干細胞及其衍生物來促進受損、病變或功能喪失的組織進行修復(fù)。如今，許多白血病等患者已經(jīng)受益于干細胞治療。未來，骨關(guān)節(jié)炎、腦癱、心臟衰竭、多發(fā)性硬化癥、甚至是聽力損失等都有望受益。干細胞治療處在生命科學(xué)的前沿，將會引起一場新的醫(yī)學(xué)革命?！?0至20年后，干細胞將會成為一種基本的治療技術(shù)，幫助人們解決現(xiàn)在無法克服的疾病”，很多患者認為10年至20年太長，希望干細胞能夠早日幫助人類克服疾病帶來的痛苦。干細胞研究發(fā)展勢頭猛，間充質(zhì)干細胞成主流如今，全球干細胞治療市場已經(jīng)

PBS清洗的注意事項2022/06/02

（1）單獨沖洗，防止交叉反應(yīng)造成污染。臨床上每天檢測的病例很多，所用的抗體種類及項目也多，如果在加入一抗孵育完后，將它們在一個缸內(nèi)洗，這樣就會造成交叉污染，影響最后的結(jié)果。正確的做法是單獨地進行沖洗，沖洗的PBS為一次性，保證切片沒有相互交叉污染的機會。（2）溫柔沖洗，防止切片的脫落。沖洗切片，取出切片，將PBS從上輕輕地沖洗，讓PBS自上而下流下來，不要拿起切片將PBS對準切片沖洗，這樣由于沖出的PBS有一定的沖擊力，很容易使切片周邊引起松動，導(dǎo)致切片的脫落。（3）沖洗的時間要足夠，才能*洗去

細胞復(fù)蘇的小常識2022/03/28

必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結(jié)晶，對細胞造成損害。細胞復(fù)蘇步驟一.實驗前準備：將水浴鍋預(yù)熱至37℃。細胞實驗室進行常規(guī)消毒，用75％酒精擦拭并且使用紫外線照射40min的超凈工作臺臺面。在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等。二．取出凍存管：根據(jù)細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。從液氮罐中取出細胞盒，取出所需的細胞，同時核對管外的編號。三．迅速解凍：迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中解凍

牛血清白蛋白(BSA)在生化實驗中的用處！2022/03/25

牛血清白蛋白（BSA），是牛血清中的一種球蛋白，包含607個氨基酸殘基，分子量為66.446KDa，等電點為4.7。牛血清白蛋白在生化實驗中有廣泛的應(yīng)用。主要成分：1.蛋白質(zhì)——是牛血清中主要成份。除包括可攜帶金屬離子、脂肪酸和自身是激素類蛋白外主要還有白蛋白，球蛋白。2.多肽——血小板促生長因子能促細胞分裂，是多肽家庭的主要成員之一，是主要的促細胞增殖因子；成纖維細胞生長因子、表皮細胞生長因子、神經(jīng)細胞生長因子等，血清中含量雖很少，但對細胞生長也有一定作用。3.激素——胰島素：促進細胞攝取葡萄

原代細胞的提取方法詳細步驟2022/03/24

原代細胞是通過一定的方法如酶法或機械法或生長法使細胞從人體和動物的母體器官、組織或液體中分離出來，并在受控環(huán)境條件下分離的細胞在體外或其他人體和動物體內(nèi)生長。原代細胞的提取方法詳細步驟：1)整個操作要在潔凈通風(fēng)的超凈臺下進行，所有的器材要高壓消毒。2)根據(jù)BALB/c小鼠的體重，用10ml/kg3%濃度的戊ba比妥鈉麻醉；將小鼠置于盛有75%乙醇的燒杯內(nèi)，這一步不僅可以消毒，也可以讓小鼠體毛浸濕，后續(xù)剃去皮毛的時候不會沾到剪刀或組織上。3)用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟，裝有PBS的注射器插入心尖，同

細胞不貼壁、生長緩慢甚至死亡分析與解決！2022/03/18

在細胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題，這些問題從細胞生長角度來說，針對細胞不貼壁、生長緩慢、生長不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應(yīng)的解決方法。一、培養(yǎng)細胞不貼壁可能原因：胰蛋白酶消化過度；支原體污染；培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）；細胞老化；接種細胞起始濃度太低或太高。解決方法：縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度；分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2；啟用新的保種細胞；調(diào)節(jié)最佳接種細胞濃度。二

細胞培養(yǎng)實驗為啥血清這么重要？2022/03/17

血清被廣泛應(yīng)用于細胞培養(yǎng)達幾十年之久。動物血清主要包括胎牛血清、小牛血清、成牛血清、馬血清、羊血清、雞血清、兔血清等，其中以胎牛血清的使用z為普遍。動物血清在細胞培養(yǎng)中提供細胞增殖所需的生長因子、激素、轉(zhuǎn)移蛋白、貼壁和鋪展在培養(yǎng)基質(zhì)上的因子、蛋白酶抑制劑和其他營養(yǎng)物質(zhì)。使用血清的優(yōu)點是血清含有促進細胞增殖和維持的大部分因子，它幾乎是通用的生長添加物，適用于動物、人和昆蟲細胞等的細胞培養(yǎng)。因而使用血清不需要為每一個細胞系優(yōu)化培養(yǎng)基，節(jié)省了大量時間和精力。牛血清是細胞培養(yǎng)中用量大的天然培養(yǎng)基，含有豐

凍存細胞時，有必要緩凍嗎？2022/03/11

一、我們先來說說何為緩凍：緩凍即為凍存細胞時，要程序降溫——4℃30min，-20℃1h，-80℃過夜，次日投入液氮內(nèi)。二、那為什么要進行緩凍呢？其實所謂的緩凍是一般使用傳統(tǒng)凍存液凍存過程中需要程序降溫。傳統(tǒng)的凍存液，一般由胎牛血清、DMSO及基礎(chǔ)培養(yǎng)基等組分組成。凍存保護的DMSO組分，在進入細胞后結(jié)合細胞內(nèi)部的水份，降低冰點，防止細胞在冷凍過程中形成冰晶對細胞造成損害。但是DMSO只能在細胞內(nèi)部保護細胞，細胞外部沒有保護，水結(jié)冰晶會在細胞膜外部受到損傷，為了防止冰晶過大，使用時必須采用程序降

血清的用途與分類2022/03/10

1、透析血清分子量小于10,000的分子如氨基酸、葡萄糖、鹽離子和未結(jié)合的蛋白均被移除。透析血清主要用在進行營養(yǎng)成分優(yōu)化和標定特定成分進行研究的實驗中。2、碳吸附血清使用活性和右旋糖苷去除血清中的親脂類(lipophilic)物質(zhì)，如某些激素、細胞因子、生長因子等，去除作用對分子量大小并無區(qū)分。碳吸附胎牛血清常用于體外培養(yǎng)研究驗證激素的作用效果。3、去外泌體血清適用于收集細胞分泌的外泌體時使用。4、低IgG血清用于研究抗體、病毒和病毒反應(yīng)、細胞表面抗原表位。5、四環(huán)素血清應(yīng)用于使用敏感四環(huán)素誘導(dǎo)

牛血清實驗中常見的問題解析！2022/03/09

胎牛血清通常在細胞培養(yǎng)中作為基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基的添加劑，在細胞培養(yǎng)中，血清供應(yīng)了豐富的高分子蛋白，低分子量營養(yǎng)物，疏水載體蛋白和其他體外細胞生長必要的成分如激素和粘附因子。同時，胎牛血清可以增加培養(yǎng)基的緩沖能力或中和有毒成分，起到保護細胞的作用。在細胞培養(yǎng)過程中是否選擇添加血清，主要根據(jù)基礎(chǔ)培養(yǎng)基化學(xué)成分，培養(yǎng)細胞的類型和培養(yǎng)體系而定。血清實驗中常見的問題解析：一、如何儲存和解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損？將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程

血清的這些常識你知道嗎？2022/03/08

牛血清是細胞培養(yǎng)中用量大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份，常用于動物細胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。一、血清的成分血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等，這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。二、血清的功能1.提供對維持細胞指數(shù)生長的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少

細胞培養(yǎng)基的種類與基本成分2022/03/07

細胞培養(yǎng)基是人工模擬細胞在體內(nèi)生長的營養(yǎng)環(huán)境，是提供細胞營養(yǎng)和促進細胞生長增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。培養(yǎng)液或培養(yǎng)基的含義幾乎相同，英文都是medium。當(dāng)它是粉劑時，傾向性地稱為培養(yǎng)基，而將粉劑配成液體后，多稱為培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中常常補加血清、抗生素等成分。由于各類微生物對營養(yǎng)的要求不同，培養(yǎng)目的和檢測需要不同，因而培養(yǎng)基的種類很多。我們可根據(jù)某種標準，將種類繁多的培養(yǎng)基劃分為若干類型。一、根據(jù)對培養(yǎng)基組成物質(zhì)的化學(xué)成分是否*了解來區(qū)分，可以將培養(yǎng)基分為：天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基。1、天然培養(yǎng)基