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聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)影響因素介紹2025/02/18

PCR(PolymeraseChainReaction)-聚合酶鏈式反應(yīng)，可以選擇性擴增一段DNA序列。其基本步驟是，首先將待擴增的模板DNA變性使之成為單鏈，DNA樣品中，特異性的引物能夠與其互補的序列雜交，在dNTPs和Taq酶存在時，就可以合成模板DNA的互補鏈，反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物加熱使DNA雙鏈變性，溫度下降后，過量的引物又可以開始第二輪的合成反應(yīng)。這種延伸-變性-退火-延伸的循環(huán)可以重復多次，使所需要的DNA片段得到特異性的擴增。1.變性：加熱使模板DNA在高溫下（94℃）變性，

PCR產(chǎn)物常用的直接純化技術(shù)方法2025/02/14

PCR產(chǎn)物一般都含有過量的引物、TaqDNA酶及dNTP，這些成分的存在將直接影響到后續(xù)的酶切、雙脫氧PCR測序反應(yīng)等過程,因此有必要除去。目前核酸純化的方法有很多,商用化試劑盒的出現(xiàn)使得DNA的純化過程變得更加簡便快捷。PCR擴增完成后需要進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，在條帶單一無其他雜帶的情況下，可以直接對產(chǎn)物進行純化，常見的純化方法有：一、產(chǎn)物直接純化：1、硅膠層析柱法原理：大多數(shù)離心柱中吸附DNA的是一層硅膠膜，實際上就是一層玻璃纖維，其表面有大量修飾的硅羥基（Si-OH），硅羥基在溶液中解離

ELISA實驗是否需重做判斷指南2025/02/06

ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。在檢測時，受檢標本（測定其中的抗原）與固相載體表面的抗體反應(yīng)。洗滌后加入酶標記的抗體，通過反應(yīng)結(jié)合在固相載體上。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。ELISA實驗過程中時常發(fā)生重做的情況，實驗是否需要重新進行，判斷可以根據(jù)評估標準曲線、檢測限、對照反

關(guān)于蛋白質(zhì)沉淀鹽析方法探究2025/01/21

蛋白質(zhì)通過鹽析的辦法沉淀的原理是降低蛋白質(zhì)的溶解度，使蛋白質(zhì)凝聚而從溶液中析出。蛋白質(zhì)的沉淀（proteinprecipitation），沉淀是溶液中的溶質(zhì)由液相變成固相析出的過程。蛋白質(zhì)從溶液中析出的現(xiàn)象，稱為蛋白質(zhì)的沉淀。蛋白質(zhì)沉淀常用的方法有鹽析、等電點沉淀、有機溶劑沉淀、生物堿試劑與某些酸沉淀等。在生化制備中，沉淀主要用于濃縮目的，或用于除去留在液相或沉淀在固相中的非必要成分。在生化制備中常用的鹽析法多用于各種蛋白質(zhì)和酶的分離純化。一般來說，所有固體溶質(zhì)都可以在溶液中加入中性鹽而沉淀析出

實時熒光定量PCR 方法原理簡述2025/01/14

目前主流的實時熒光定量PCR（QuantitativeReal-timePCR）方法分為染料法和探針法，染料法以SYBRGreen法為代表，SYBRGreen染料游離時熒光微弱，但一旦與雙鏈DNA結(jié)合后，熒光大大增強，反應(yīng)管中的熒光強度與反應(yīng)管中雙鏈DNA的數(shù)量成正比例關(guān)系，因此可以通過檢測熒光計算反應(yīng)管中產(chǎn)生的雙鏈DNA（PCR產(chǎn)物）的量，但該方法沒有特異性，非特異性擴增的產(chǎn)物也會被計入。對于探針法來說，反應(yīng)管中的熒光強度也是檢測PCR產(chǎn)物量的依據(jù)。但其發(fā)光機制卻與染料法全不同。根據(jù)所使用的技

微生物培養(yǎng)基配置指南2025/01/07

培養(yǎng)基(culturemedium)是人工配制的，適合微生物生長、分離鑒別的營養(yǎng)基礎(chǔ)。一般基礎(chǔ)培養(yǎng)基中古有蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉、氯化鈉、瓊脂等基本營養(yǎng)物質(zhì)。微生物培養(yǎng)基應(yīng)用范圍很廣。例如，無菌試驗培養(yǎng)基可檢查藥品、生物制品是否污染細菌，它直接關(guān)系到人民用藥安全；在臨床及食品衛(wèi)生檢驗中常用選擇、鑒別培養(yǎng)基，此類培養(yǎng)基中根據(jù)用途不同，需要加入抑菌劑、指示劑、血液、糖等試劑，以利于特定細菌的分離與鑒別，需要使細菌大量生長、繁殖的各類培養(yǎng)基；病毒培養(yǎng)及疫苗中則需用組織細胞培養(yǎng)液，主要成分為多種氨基

抗體的作用功能及局限性介紹2024/12/24

抗體是一種被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)，是一種免疫球蛋白。它的產(chǎn)生是由于抗原侵入人體后引起各種免疫細胞相互作用，使淋巴細胞中的B細胞增殖分化而形成漿細胞（效應(yīng)B細胞），漿細胞可產(chǎn)生分泌抗體?？贵w的分類：按作用對象，可將其分為抗毒素、抗菌抗體、抗病毒抗體和親細胞抗體?？贵w的作用機理：(1)、抗體在抗原顆粒和吞噬細胞之間“搭橋”，從而加強了吞噬細胞的吞噬作用。(2)、抗體與相應(yīng)顆粒性抗原結(jié)合后，改變抗原表面電荷，降低吞噬細胞與抗原之間的靜電斥力。(3)、抗體可中和某

ELISA酶標儀的檢測單位和檢測值計算2024/12/17

ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗方法簡稱酶標法，是標記技術(shù)中的一種，是從熒光抗體技術(shù)，同位素免疫技術(shù)發(fā)展而來的一種敏感，特異，快速并且能自動化的現(xiàn)代技術(shù)。酶標法的基本原理是將抗原或抗體與酶用膠聯(lián)劑結(jié)合為酶標抗原或抗體，此酶標抗原或抗體可與固相載體上或組織內(nèi)相應(yīng)抗原或抗體發(fā)生特異反應(yīng)，并牢固地結(jié)合形成仍保持活性的免疫復合物。當加入相應(yīng)底物時，底物被酶催化而呈現(xiàn)出相應(yīng)反應(yīng)顏色。顏色深淺與相應(yīng)抗原或抗體含量成正比。由于此技術(shù)是建立在抗原-抗體反應(yīng)和酶的高效催化作用的基礎(chǔ)上，因此，具有高度的靈敏性和特異性，是

活性氧 (ROS) 含量檢測試劑盒實驗詳細說明2024/12/09

活性氧含量檢測試劑盒通過使用特異性探針或底物與ROS發(fā)生化學反應(yīng)，從而實現(xiàn)對ROS含量的測定。這種檢測方法基于探針或底物與ROS的特異性反應(yīng)，通常使用熒光分光光度計或流式細胞術(shù)進行測量?；钚匝鹾繖z測試劑盒具有以下幾個優(yōu)勢：1.高選擇性：活性氧含量檢測試劑盒能夠特異性地檢測ROS，避免了其他化學物質(zhì)的干擾，確保測量結(jié)果的準確性。2.高靈敏度：活性氧含量檢測試劑盒能夠檢測到極低濃度的ROS，使研究人員能夠?qū)OS含量進行準確測量，揭示微小變化對細胞功能和疾病發(fā)展的影響。3.快速和簡便：活性氧含量檢

PCR基因擴增儀應(yīng)用詳細說明2024/12/03

一、原理PCR技術(shù)的本質(zhì)是體外核酸擴增，加熱使雙鏈DNA解開螺旋，在退火溫度條件下引物同模板DNA雜交，在TaqDNA聚合酶，dNTPs，Mg2+和合適pH緩沖液存在條件下延伸引物，重復“變性→退火→引物延伸”過程至25～40個循環(huán)，呈指數(shù)級擴大待測樣本中的核酸拷貝數(shù)。二、分類1.普通的PCR儀一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀，又叫傳統(tǒng)的PCR儀。用途：主要是做一些簡單的、對單一退火溫度的目的基因進行擴增。（1）梯度PCR儀：一次PCR擴增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯

酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）實驗各封閉劑優(yōu)缺點2024/11/25

酶聯(lián)免疫吸附測定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay，ELISA）是免疫學和分子生物學中廣泛使用的實驗室技術(shù)，是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識別和結(jié)合原理，對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法。封閉（blocking）是繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程?？乖蚩贵w包被時所用的濃度較低，吸收后固相載體表面尚有未被占據(jù)的空隙，封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙，從而排斥在ELISA試劑盒其后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。在免疫學實

PCR實驗DNA復制酶系作用順序2024/11/18

DNA的半保留復制：DNA復制時，以親代DNA的兩條鏈分別作為模板，在DNA聚合酶的催化下，按堿基互補的原則合成兩條與模板鏈互補的新鏈，組成新的DNA分子，新形成的兩個子代DNA與親代DNA的堿基順序全一樣。由于子代DNA分子中一條鏈來自親代，而另一條鏈是新合成的，因此這種復制方式稱為半保留復制(semi-conservativereplication)。DNA的復制過程：DNA復制酶系作用順序：1.拓撲異構(gòu)酶使DNA超螺旋結(jié)構(gòu)解開，形成其基本的雙螺旋結(jié)構(gòu)。2.解鏈酶使DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)解開，堿基

PCR血液標本保存方法及注意事項2024/11/13

最好是用淋巴細胞分離液把單個核細胞分離出來，然后-80℃保存。外周血單個核細胞（Peripheralbloodmononuclearcell,PBMC）的分離是免疫學研究中的一項基本技術(shù)。目前國內(nèi)外分離PBMC的常用方法是葡聚糖-泛影葡胺密度梯度離心法（ficoll-hypaquedensitygradientcentrifugation），用此方法分離PBMC純度可達95％，淋巴細胞約占90％，其中T淋巴細胞占80％，B淋巴細胞占4～10％。ficoll-hypaque混合溶液，又稱淋巴細胞分

培養(yǎng)基的配置基本原則匯集2024/10/28

培養(yǎng)基是指供給微生物、植物或動物（或組織）生長繁殖的，由不同營養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機鹽（包括微量元素）、維生素和水等幾大類物質(zhì)。培養(yǎng)基既是提供細胞營養(yǎng)和促使細胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是細胞生長和繁殖的生存環(huán)境。培養(yǎng)基的配置基本原則：1、選擇適宜的營養(yǎng)物質(zhì)總體而言，所有微生物生長繁殖均需要培養(yǎng)基含有碳源、氮源、無機鹽、生長因子、水及能源，但由于微生物營養(yǎng)類型復雜，不同微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的需求是不一樣的，因此首先要根據(jù)不同微生物的營養(yǎng)需求配制針對性強的培養(yǎng)基。自

?免疫PCR實驗主要程序及步驟2024/10/21

PCR（聚合酶鏈式反應(yīng)）是一種分子生物學技術(shù)，現(xiàn)在已經(jīng)被廣泛運用于臨床和實驗室，用于擴增特定的DNA片段。它的基本原理就是在體外模擬細胞內(nèi)DNA復制的條件，最終完成特定基因的體外復制。主要程序：（1）抗原+生物素化抗體→抗原-生物素化抗體復合物；（2）加親合素→抗原-生物素化抗體-親合素復合物；（3）加生物素化DNA→抗原-生物素化抗體-親合素-生物素化DNA；（4）PCR擴增生物素化DNA部分。實驗步驟：（1）制備生物素化DNA將噬粒BLuescriptskt,用生物素標記的M13引物進行PC

實時熒光定量 PCR (RT-qPCR)原理及熒光技術(shù)方法2024/10/14

實時熒光定量PCR(RT-qPCR)是一種用于實時擴增和檢測特定DNA或RNA序列的分子生物學技術(shù)。該方法利用熒光染料或探針，當與擴增的DNA或RNA分子結(jié)合時會發(fā)出信號，從而可以對目標序列進行量化。RT-qPCR通常用于基因表達分析、病毒載量定量和基因突變檢測等應(yīng)用。RT-qPCR原理的三個主要步驟：1、反轉(zhuǎn)錄：1）、使用逆轉(zhuǎn)錄酶和特定引物將RNA樣品反轉(zhuǎn)錄成cDNA。2）、該步驟將RNA模板轉(zhuǎn)化為更穩(wěn)定且可擴增的DNA形式。3）、反轉(zhuǎn)錄過程中使用特定引物。2、PCR擴增：1）、使用特定引物對

影響培養(yǎng)基滅菌效果因素有什么？2024/10/08

滅菌的方法很多，在實驗室可以使用干熱滅菌、對于環(huán)境可以使用化學試劑滅菌，但化學試劑的滅菌方法有很大的限制。在工業(yè)生產(chǎn)中，對于培養(yǎng)基、管道、設(shè)備的滅菌，通常采用蒸汽加熱到一定的溫度，并保溫一段時間的滅菌方法，稱之為濕熱滅菌。濕熱滅菌的顯著優(yōu)點是：使用方便，無污染，而且其冷凝水可以直接冷凝在培養(yǎng)基中，也可以通過管道排出。培養(yǎng)基滅菌的效果，影響因素很多，除了培養(yǎng)基內(nèi)雜菌的種類和數(shù)量，滅菌溫度的高低，時間長短外，還取決于：1.營養(yǎng)成分的保持濕熱滅菌時，微生物被殺死的同時，培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分也遭到了一定的破

微生物培養(yǎng)基相關(guān)資料匯總2024/09/29

培養(yǎng)基是液體、半固體或固體形式的，含天然或合成成分，用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質(zhì)。培養(yǎng)基的制備和使用是微生物實驗室檢測工作的重要環(huán)節(jié)，培養(yǎng)基自身質(zhì)量的優(yōu)劣、保存是否得當、配制使用是否正確等都直接影響到檢測結(jié)果的準確性。一、培養(yǎng)基的購置與驗收1.購置從培養(yǎng)基自身的質(zhì)量來看，不同生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品，甚至同一廠家不同批號的產(chǎn)品都會存在差異。依據(jù)ISO/IEC17025《檢測和校準實驗室能力的通用要求》，對培養(yǎng)基的供應(yīng)企業(yè)進行評價后選擇合格的供應(yīng)商，這是培養(yǎng)基購買過程中重要的步驟。應(yīng)選擇產(chǎn)品市場信譽

驗證生化試劑盒適用方式分述2024/09/23

通常生化試劑盒可分為液體單試劑和液體雙試劑，前者特別適用于半自動生化分析儀和小型自動生化分析儀，使用方便，缺點是穩(wěn)定性較差。與單試劑相比，雙試劑提高了抗干擾能力，具有穩(wěn)定性能較好，可消除樣品自身空白等特點。此外還有多項同測組合試劑、濃縮試劑等。對新的試劑盒，我們首先要查看其資質(zhì)是否齊全，是否為合法有效試劑，是否有相關(guān)的臨床試驗驗證等。其次，在本實驗室，可做以下工作來進行驗證是否適合使用。一、試劑空白吸光度用蒸餾水做空白，用zhi定的空白液加入試劑作為樣品測試，在測試主波長下，記錄測試啟動時的吸光

ELISA專用酶標儀故障解決排除大全2024/09/19

酶標儀即酶聯(lián)免疫檢測儀，是酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）的專用儀器又稱微孔板檢測器，酶標儀檢測技術(shù)是一種高通量微孔板檢測技術(shù)，其核心是一個比色計，利用比色法來進行分析。因其高靈敏度、高效率及操作簡便，被廣泛應(yīng)用于生命科學、生物制藥、體外診斷、食品安全、環(huán)境科學等多個領(lǐng)域。任何儀器在使用時往往都會出現(xiàn)一些小故障，酶標儀儀器也一樣，下面將與大家分享酶標儀的一些常見故障及處理方法：1、打印機不工作⑴、酶標儀后部DIL開關(guān)設(shè)置不正確。DIL標準設(shè)置:左下下下下下下上下上上下下上下上上右(人站在儀器后部，