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在PCR反應(yīng)體系中添加劑DMSO的作用2024/05/16: DMSO主要用于高GC含量的模板擴(kuò)增，可能的機(jī)理是改善GC含量高的DNA的變形情況，降低其二級(jí)結(jié)構(gòu)，使得聚合酶在二級(jí)結(jié)構(gòu)處延伸。DMSO可以提高PCR的特異性,幫助擴(kuò)增一些難擴(kuò)的模板。當(dāng)體系中加入DMSO時(shí)，可適當(dāng)降低退火溫度。在實(shí)踐中，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)可能因各種原因而失敗，通常表現(xiàn)為兩個(gè)問(wèn)題，一是目的模板的擴(kuò)增量太少，二是非目的基因擴(kuò)增太多。這種情況研究人員通常會(huì)在反應(yīng)體系中加入合適的添加劑進(jìn)行解決。通常添加劑的作用主要是降低基因的二級(jí)結(jié)構(gòu)或者降低非特異性的啟動(dòng)。下面是幾種常用的添加劑以及它們的

凍存管的使用注意事項(xiàng)2024/03/14: 凍存管保存環(huán)境1、未經(jīng)使用的凍存管可在室溫或2-8℃保存12個(gè)月。2、已經(jīng)接種的凍存管在-20℃保存，12個(gè)月內(nèi)可有良好的菌株保存效果。3、已經(jīng)接種的凍存管在-80℃保存，24個(gè)月內(nèi)可有良好的菌株保存效果。凍存管保存時(shí)間1、未經(jīng)使用的凍存管可在室溫或2-8℃保存。2、已經(jīng)接種的凍存管在-20℃或-80℃保存。凍存管的使用步驟1、從細(xì)菌純培養(yǎng)物中挑取新鮮培養(yǎng)物配成大約為3-4麥?zhǔn)媳葷岫鹊木鷳乙航臃N與菌種保存管中。2、擰緊保存管，來(lái)回顛倒4-5次使細(xì)菌乳化，不能旋搖。3、把保存管放入冰箱保存-20℃

酶標(biāo)板分類與性能判斷2024/02/27: 酶標(biāo)板作為ELISA檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中的輔材，起著舉足輕重的作用并直接影響最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果，酶標(biāo)板的好壞主要取決于其對(duì)蛋白吸附的靈敏度、板孔間蛋白吸附能力差異以及所采購(gòu)酶標(biāo)板批次間的差異。因此，選擇一款蛋白吸附靈敏度高、對(duì)蛋白吸附能力孔間差異小、批次間差異小的酶標(biāo)板產(chǎn)品，是實(shí)驗(yàn)者獲得可靠、穩(wěn)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果的保障。酶標(biāo)板分類：根據(jù)不同的分類標(biāo)準(zhǔn)，酶標(biāo)板有著不同的分類。一、根據(jù)孔數(shù)，可分為96孔、48孔等，由于酶標(biāo)板主要是配合酶標(biāo)儀用，目前市面上的酶標(biāo)儀最多為96孔，因此酶標(biāo)板最為常用的也是96孔。二、根據(jù)其底部的

冰凍切片包埋劑的制備方法2024/02/19: 冰凍切片是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度，然后進(jìn)行切片的方法。因其制作過(guò)程較石蠟切片快捷、簡(jiǎn)便，而多應(yīng)用于手術(shù)中的快速病理診斷。制備步驟:將組織在恒溫冷凍機(jī)里面切片。冷凍腔內(nèi)的溫度一般設(shè)置為-18℃至-25℃，根據(jù)不同組織調(diào)節(jié)不同腔溫，平時(shí)應(yīng)將冷凍頭放置在冷凍臺(tái)上。冷凍切片機(jī)應(yīng)長(zhǎng)期處在冷凍恒溫狀態(tài)。1、當(dāng)冰凍組織提取好之后，在冷凍頭上放少量的OCT或羧田基纖維素(可用普通膠水代替)，放上組織，速凍。2、待組織凍結(jié)后，將冷凍頭裝刀切片機(jī)上。3、粗切，修出切面細(xì)切幾張，用毛筆刷去刀上組織片

夾心Elisa和競(jìng)爭(zhēng)性Elisa的區(qū)別2024/01/30: 什么是夾心ELISA？夾心ELISA是一種常用于檢測(cè)和定量免疫測(cè)定中抗原的ELISA。它是一種酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定，使用兩種抗體：捕獲抗體和檢測(cè)抗體。在這種技術(shù)中，樣品中的抗原在抗體之間結(jié)合。ELISA的目的是檢測(cè)樣品中靶抗原的存在。因此，在夾心ELISA的情況下，靶抗原在捕獲抗體和檢測(cè)抗體之間結(jié)合。在程序開(kāi)始時(shí)，捕獲抗體已經(jīng)固定在表面上。然而，檢測(cè)抗體是定量前的最后一步。夾心ELISA中的兩種抗體結(jié)合到靶抗原上的不同位置。此外，捕獲抗體和靶標(biāo)抗體不干擾彼此的結(jié)合能力非常重要。夾心ELISA中的步驟

ELISA試劑盒標(biāo)曲顯色過(guò)強(qiáng)無(wú)明顯梯度2024/01/23: 1、主要懷疑點(diǎn)：洗板不充分：1.1、機(jī)器洗版：確保機(jī)器設(shè)置的針頭能吸干孔中液體，并且加液針頭能加液大于350ul，加液針頭沒(méi)有被異物或者結(jié)晶鹽堵住。1.2、手動(dòng)洗板，嚴(yán)格按照步驟，使用干凈滅菌的槍頭和加樣槽，使用無(wú)氧化劑的吸水紙。加350ul洗液，靜置90秒，在吸水紙上拍干孔中液體后再加入下一步洗液或者試劑。1.3、特別注意，在加入TMB前的洗板步驟極其重要，殘留的HRP酶會(huì)直接導(dǎo)致TMB顯色。2、次要懷疑點(diǎn)：2.1、TMB已經(jīng)污染，檢測(cè)TMB是否透明無(wú)色，如果偏藍(lán)就是污染了。2.2、檢查配制洗

CCK-8 細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)2024/01/16: 實(shí)驗(yàn)步驟：1.種板數(shù)：根據(jù)你摸索的，或者查閱文獻(xiàn)確定你需要的種板濃度，根據(jù)種板濃度對(duì)細(xì)胞懸液進(jìn)行稀釋，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入約1000-2000個(gè)細(xì)胞100ul，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入約5000～10000個(gè)細(xì)胞100ul（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。2.種板：以96孔板為例，96孔板橫向是1-12的數(shù)字，縱向是A-H，可做多個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每組設(shè)置4-6個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)置空白組，最邊緣孔加入PBS緩沖液減少蒸發(fā)帶來(lái)的影響，然后將細(xì)胞置于37℃5%CO2細(xì)胞培

透析的原理和過(guò)程2024/01/09: 一、透析的原理透析只需要使用專用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀，將生物大分子樣品溶液置入袋內(nèi)，將此透析袋浸入水或緩沖液中，樣品溶液中大分子量的生物分子被截留在袋內(nèi)，而鹽和小分子物質(zhì)不斷擴(kuò)散透析到袋外，直到袋內(nèi)外兩邊的濃度達(dá)到平衡為止。保留在透析袋內(nèi)未透析出的樣品溶液稱為“保留液”，袋（膜）外的溶液稱為“滲出液”或“透析液”。透析的動(dòng)力是擴(kuò)散壓，擴(kuò)散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度，正比于欲透析的小分子溶質(zhì)在膜內(nèi)外兩邊的濃度梯度，還正比于膜的面積和溫度，通常是4

ELISA實(shí)驗(yàn)原理2024/01/03: ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）是一種常用的生物化學(xué)分析技術(shù)，可用于判斷受檢標(biāo)本中是否含有待檢測(cè)抗原或抗體，是免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法，也是許多科研人員的日常實(shí)驗(yàn)之一。原理酶標(biāo)儀的主要操作是使用光電比色計(jì)或分光光度計(jì)，測(cè)量光通過(guò)測(cè)試樣品前后的能量差。測(cè)試物質(zhì)吸收引起的光能差通常與測(cè)試物質(zhì)的濃度線性相關(guān)。酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)范圍通常為400nm至750nm，并受濾光片或衍射光柵（納米）限制。光學(xué)系統(tǒng)中通過(guò)光纖為含有樣品的微孔板孔提供光。穿過(guò)樣品的光束直徑范圍為1至3毫米，樣品發(fā)出的光由檢測(cè)裝置檢測(cè)，檢測(cè)

冰凍切片包埋劑的制備方法及注意事項(xiàng)2023/12/26: 制備步驟:將組織在恒溫冷凍機(jī)里面切片。冷凍腔內(nèi)的溫度一般設(shè)置為-18℃至-25℃，根據(jù)不同組織調(diào)節(jié)不同腔溫，平時(shí)應(yīng)將冷凍頭放置在冷凍臺(tái)上。冷凍切片機(jī)應(yīng)長(zhǎng)期處在冷凍恒溫狀態(tài)。1、當(dāng)冰凍組織提取好之后，在冷凍頭上放少量的OCT或羧田基纖維素(可用普通膠水代替)，放上組織，速凍。2、待組織凍結(jié)后，將冷凍頭裝刀切片機(jī)上。3、粗切，修出切面細(xì)切幾張，用毛筆刷去刀上組織片。4、放下抗卷板，開(kāi)始切片，切片速度一般為5-6微米，切出的片子用載玻片貼附后立即放入甲醇冰醋/酸液(97ml甲醇+3ml冰醋/酸)中固定

PCR常見(jiàn)問(wèn)題2023/12/21: 1.無(wú)擴(kuò)增條帶（1）酶失活或在反應(yīng)體系中未加入酶。TaqDNA聚合酶因保存或運(yùn)輸不當(dāng)而失活，往往通過(guò)更換新酶或用另一來(lái)源的酶以獲得滿意的結(jié)果。（2）模板含有雜質(zhì)。特別是對(duì)甲醛固定及石蠟包埋的組織常含甲酸，造成DNA脫嘌呤而影響PCR的結(jié)果。（3）變性溫度是否準(zhǔn)確：PCR儀指示溫度與實(shí)際溫度是否相符，過(guò)高酶在前幾個(gè)循環(huán)就迅速失活；過(guò)低則模板變性不好。（4）反應(yīng)系統(tǒng)中污染了蛋白酶及核酸酶，應(yīng)在未加Taq酶以前，將反應(yīng)體系95℃加熱5-10分鐘。（5）引物變質(zhì)失效。人工合成的引物是否正確。是否純化，或

ELISA 是如何工作的？2023/12/14: ELISA基于特異性抗原抗體反應(yīng)，通常用到的是固相酶聯(lián)免疫吸附方法，這里以*使用的夾心法為例，其基本步驟為：將包被抗體固定在微孔板表面從板上洗去未被結(jié)合抗體加入質(zhì)控抗原或含有目標(biāo)物的樣本洗去其他雜蛋白，加入標(biāo)記的檢抗添加酶特異性底物，產(chǎn)生有色產(chǎn)物，使用酶標(biāo)儀進(jìn)行比色測(cè)定即可辣根過(guò)氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶是ELISA中常用的酶，而底物包括四甲基聯(lián)苯胺(TMB)或2,2'-疊氮基-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)。通常選擇重復(fù)或三次采樣，并且使用不同濃度的樣品以確保生物學(xué)上可接受的

移液槍校準(zhǔn)步驟詳解2023/12/13: 需要用到的儀器：電子分析天平(檢測(cè)范圍200g，指示值為0mg)；一個(gè)量杯(50L)；一個(gè)量杯(100ml)；多個(gè)小塊定性濾紙；超純水系統(tǒng)80mL。步驟：1、打開(kāi)電子天平，電子天平調(diào)零；2、天平稱指示穩(wěn)定后，按住歸零鍵歸零。將移液管噴嘴安裝在移液管上，對(duì)移液器進(jìn)行清洗；3、將移液器的體積調(diào)整到檢查點(diǎn)。通常選擇具有最小、中等和較大容量值的檢查點(diǎn)?？梢允翘囟ǖ娜萘奎c(diǎn)；4、用移液管將檢測(cè)到容量的超純水系統(tǒng)轉(zhuǎn)移到天平的小量杯中；5、天平指示穩(wěn)定后，立即加載并記錄電子分析天平指示的標(biāo)準(zhǔn)值。記錄的結(jié)束會(huì)使電

CCK8試劑盒操作指南2023/12/08: 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線1、計(jì)數(shù)，按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度，一般要做5-7個(gè)細(xì)胞濃度梯度，每組4-6個(gè)復(fù)孔。2、接種后培養(yǎng)2-4小時(shí)使細(xì)胞貼壁，然后每100μL培養(yǎng)基加10uLCCK-8（注意不要在孔中生成氣泡，會(huì)影響OD值）試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測(cè)定OD值，在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培育1-4小時(shí)。用酶標(biāo)儀測(cè)定450nm處的吸光度。計(jì)算所需培養(yǎng)液可以先轉(zhuǎn)染再種板在10cm盤轉(zhuǎn)染，6h后消化，重懸細(xì)胞，技術(shù)，調(diào)細(xì)胞密度為20000個(gè)/ml，種在96孔板，每孔1000μL。種板時(shí)，槍頭吹吸細(xì)胞，重懸，

培養(yǎng)皿的使用方式和注意事項(xiàng)2023/11/27: 1、注意事項(xiàng):使用前經(jīng)過(guò)清潔消毒，,培養(yǎng)皿清潔與否對(duì)工作影響較大，可影響培養(yǎng)基的酸堿度，若有某些化學(xué)藥品的存在，會(huì)抑制細(xì)菌生長(zhǎng)。新購(gòu)的培養(yǎng)皿應(yīng)先用熱水沖洗，再置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%或2%的鹽酸溶液中浸泡數(shù)小時(shí)，使游離堿性物質(zhì)除去，再用蒸餾水沖洗2次。若要培養(yǎng)細(xì)菌,再用高壓蒸氣(一般6.8*10的5次方Pa高壓蒸氣)，120°C的溫度下30min滅菌,置室溫干燥，或用干熱滅菌，就是將培養(yǎng)皿置于烘箱內(nèi),度控制在120°C左右的情況下維持2h,殺死細(xì)菌的胞牙。經(jīng)過(guò)消毒的培養(yǎng)皿才能接種培養(yǎng)使用。2、使用方法

免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟2023/11/23: 基本實(shí)驗(yàn)步驟：（1）細(xì)胞準(zhǔn)備。對(duì)單層生長(zhǎng)細(xì)胞，在傳代培養(yǎng)時(shí)，將細(xì)胞接種到預(yù)先放置有處理過(guò)的蓋玻片的培養(yǎng)皿中，待細(xì)胞接近長(zhǎng)成單層后取出蓋玻片，PBS洗兩次；對(duì)懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)細(xì)胞，用PBS離心洗滌（1000rpm,5min）2次，用細(xì)胞離心甩片機(jī)制備細(xì)胞片或直接制備細(xì)胞涂片。（2）固定。根據(jù)需要選擇適當(dāng)?shù)墓潭▌┕潭?xì)胞。固定完畢后的細(xì)胞可置于含疊氮納的PBS中4℃保存3個(gè)月。PBS洗滌3×5min.（3）通透。使用交聯(lián)劑（如多聚甲醛）固定后的細(xì)胞，一般需要在加入抗體孵育前，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行通透處

ELISA中必要的三個(gè)試劑2023/11/21: 完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);(2)酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物);(3)酶的底物;(4)陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品(定性測(cè)定中)，參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測(cè)定中);(5)酶聯(lián)物(結(jié)合物)及標(biāo)本的稀釋液;(6)洗滌液;(7)酶反應(yīng)終止液。免疫吸附劑已包被抗原或抗體的固相載體在低溫(2~8℃)干燥的條件下一般可保存6個(gè)月以上。有些不完整的試盒，僅供應(yīng)包被用抗原或抗體，檢測(cè)人員需自行包被。以下簡(jiǎn)述固相載體和包被過(guò)程。固相載體固相載體在ELISA測(cè)定

如何提取、制備胎牛血清？2023/11/16: 胎牛血清（FetalBovineSerum，F(xiàn)BS）是在生物醫(yī)學(xué)研究和細(xì)胞培養(yǎng)中廣泛使用的重要生物制品，它含有豐富的生長(zhǎng)因子、蛋白質(zhì)和其他生物分子，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖起著至關(guān)重要的作用。制備胎牛血清是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，通常由專業(yè)的生物制品公司進(jìn)行，以確保其質(zhì)量和純度。在本文中，我們將介紹一般的胎牛血清制備過(guò)程的主要步驟。步驟1：采集胎牛血液制備胎牛血清的第一步是采集胎牛的血液。這需要在專業(yè)場(chǎng)所進(jìn)行，確保采集的胎牛來(lái)自健康且受監(jiān)控的牧場(chǎng)。采集血液需要遵循倫理和動(dòng)物福利的法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)。確保供體是5-8月齡

PCR管、EP管和八聯(lián)排管的區(qū)別2023/11/13: 一、PCR管PCR管是生物實(shí)驗(yàn)過(guò)程中常用的耗材，例如BBSP的PCR管，主要作用是為PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）實(shí)驗(yàn)提供容器，可以應(yīng)用于突變、測(cè)序、甲基化、分子克隆、基因表達(dá)、基因分型、醫(yī)學(xué)、法醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。常見(jiàn)的PCR管由管體、蓋體組成，管體和蓋體連接在一起。最早的PCR儀沒(méi)有熱蓋，PCR過(guò)程中管底的液體會(huì)蒸發(fā)到頂部，設(shè)計(jì)成凸蓋（即圓形頂）便于蒸發(fā)的液體凝集后流下。但目前的PCR儀基本為熱蓋式，PCR蓋頂部溫度高，底部溫度低，底部的液體不容易蒸發(fā)到頂部，所以大多使用平蓋。二、EP管因?yàn)殡x心管是由Ep

普通干型透析袋，使用前如何預(yù)處理？2023/11/07: 預(yù)處理：1、把透析袋剪成適當(dāng)長(zhǎng)度（10-20cm）的小段。2、在大體積（500mL）的2%（W/V）的碳酸氫鈉和1mmol/LEDTA(pH=8.0)中將透析袋煮沸10min。3、用蒸餾水清洗透析袋。4、放在500mL的1mmol/LEDTA(pH=8.0)中將之煮沸10min。5、冷卻后，用蒸餾水清洗透析袋。6、置于20％的酒精中，放于4℃冰箱，必須確保透析袋始終浸沒(méi)在溶液內(nèi)。從此時(shí)起取用透析袋必須戴手套。7、在使用前要用蒸餾水將透析袋里外加以清洗干凈。使用須知1、某些化學(xué)物質(zhì)會(huì)破壞透析袋微孔

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