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如何進(jìn)行CCK-8實(shí)驗(yàn)，操作步驟有哪些？2023/07/06: 1）制備細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)。2）在96孔板中接種細(xì)胞懸液，每孔約100μl，同樣的樣本可做3個(gè)重復(fù)。3）將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)一段時(shí)間（37℃,5%CO2），細(xì)胞貼壁需要大約2-4h，如果是懸浮細(xì)胞，該步驟可以省去。4）每孔各加入10μlCCK-8溶液，由于加入的CCK-8量比較少，可能會(huì)因試劑沾在孔壁上而帶來誤差，建議在加完試劑后輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板以幫助混勻，或者直接配置含10%CCK-8的培養(yǎng)基，以換液的形式加入。另外注意，加樣的過程中盡量不要產(chǎn)生氣泡。5）將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中孵育1-4h。因?yàn)?

離心管對(duì)于細(xì)胞復(fù)蘇的作用2023/07/05: 細(xì)胞復(fù)蘇和凍存講究“慢凍快溶”，復(fù)蘇時(shí)一定要將凍存在液氮或-80℃中凝固的細(xì)胞凍存液快速融化至37℃，使胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對(duì)細(xì)胞造成損害?！翊蜷_水浴鍋加熱至37℃?！癯瑑襞_(tái)上放好離心管（離心管規(guī)格選用15ml的），細(xì)胞培養(yǎng)瓶，移液管，紫外滅菌至少20至30分鐘，吹風(fēng)5至10分鐘除去臭氧。●37℃預(yù)熱好要復(fù)蘇細(xì)胞的培養(yǎng)液，也可以不用預(yù)熱培養(yǎng)液，根據(jù)細(xì)胞情況選擇。●向離心管中加約5至10ml培養(yǎng)液，從液氮罐或-80℃中取出凍存細(xì)胞，立即將凍存管放入37℃

細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)2023/07/04: 一:細(xì)胞培養(yǎng)熒光顯微鏡對(duì)于直接用培養(yǎng)皿拍攝都沒有什么壓力，不過依然更建議做爬片，不僅效果更好而且更適合拍共聚焦，不想拍了也可以冷凍保存。爬片的預(yù)處理需要用多聚賴氨酸增加細(xì)胞粘附性1，用多聚賴氨酸涂在爬片上放置30-120分鐘。2，然后用滅菌的超純水清洗和浸泡,。3，自然干燥了之后放在紫外下照射至少1個(gè)小時(shí)以上。爬片之前經(jīng)過高溫滅菌的可以不需要這么久。4，如果用普通蓋玻片而不是專用細(xì)胞爬片的話，一般還需要用0.1%Tween-20的PBS洗一下，因?yàn)楦鶕?jù)我的經(jīng)驗(yàn)，幾個(gè)牌子的普通蓋玻片都比較臟，不能

瓊脂糖微球的制備2023/07/03: 1.制備瓊脂糖微球按照一定的瓊脂糖濃度通過加熱進(jìn)行溶解（一般為4%或6%，相對(duì)較小的濃度制備的微球孔徑較大），攪拌后得到均勻的水相溶液。溫度越高，瓊脂糖的粘度就越低。不同濃度的瓊脂糖黏度不一樣，一般來說濃度越大粘度越高，需要溶解的時(shí)間越長；在相同的加熱時(shí)間上，一般來說濃度越大所形成的微粒粒徑也越大。加熱時(shí)間的長短也會(huì)對(duì)后續(xù)成球造成一定影響，如果時(shí)間過短，那么瓊脂糖并未溶解或者是黏度較大，則會(huì)形成較大顆粒，且分散系數(shù)也不理想；如果時(shí)間過長，則因在高溫下瓊脂糖可能會(huì)發(fā)生一定程度的水解，分子量下降，黏

如何用PBS緩沖液清洗細(xì)胞？2023/06/30: 一：取材撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮2～3mm2置于載玻片上，用吸管加6mmoI的PBS緩沖液兩滴，使材料充分浸入到液體中，處理約5分鐘。二：去垢處理用吸水紙吸凈浸泡材料的PBS緩沖液，加2～3滴37°C預(yù)溫的去垢劑1%TritonX-100，使液體充分浸泡材料，并立即放入37C水浴鍋中處理15分鐘。三：沖洗吸去1%Triton，用6mmol的PBS緩沖液輕輕沖洗，反復(fù)兩至三次。四：固定用吸水紙吸盡PBS緩沖液，加2滴3%戊/二/q固定約20分鐘。五：沖洗吸去3%戊二/醛固定液，用6mmol的PBS緩沖液

酶活力測(cè)定的注意事項(xiàng)2023/06/29: （1）酶促反應(yīng)過程中，只有最初一段時(shí)間內(nèi)反應(yīng)速度與酶活性成正比，隨著反應(yīng)時(shí)間的延長，反應(yīng)速度即逐漸降低。（2）要規(guī)定一定的反應(yīng)條件，如時(shí)間、溫度、pH等，并在醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)整理酶測(cè)定過程中保持這些反應(yīng)條件的恒定，如溫度不得超過規(guī)定溫度的士1℃，pH應(yīng)恒定。（3）配制的底物濃度應(yīng)準(zhǔn)確且足夠大，底物液中應(yīng)加入不抑制該酶活力的防腐劑并保存于冰箱中，以防止底物被分解。（4）標(biāo)本要新鮮，由于絕大多數(shù)酶可因久置而活力降低，標(biāo)本如無法及時(shí)測(cè)定，應(yīng)保存于冰箱中。用血漿時(shí)，應(yīng)考慮到抗凝劑對(duì)酶反應(yīng)的影響。有些酶在血細(xì)胞

移液器的操作2023/06/28: 第一步，安裝吸頭對(duì)于單道移液器來說，移液器末端垂直插入吸頭，輕壓左右微微轉(zhuǎn)動(dòng)即可上緊；對(duì)于多道移液器來說，將第一通道與最后一個(gè)通道的吸嘴與吸頭對(duì)齊后，垂直向下安裝吸頭，并左右小幅度搖擺。重點(diǎn)來了，不能反復(fù)撞擊移液器來確保吸頭氣密性，長期用這種方式裝配吸頭，會(huì)導(dǎo)致吸頭變形，移液器零部件因撞擊而松散，從而影響移液準(zhǔn)確性。第二、容量設(shè)定正確的容量設(shè)定分為兩個(gè)步驟，第一個(gè)步驟是粗調(diào)——通過排放按鈕將容量值迅速調(diào)整至接近自己的預(yù)想值；第二個(gè)步驟是細(xì)調(diào)——當(dāng)容量值接近自己的預(yù)想值以后，應(yīng)將移液器橫置，水平放

聚合酶鏈反應(yīng)2023/06/26: PCR由變性–退火–延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備;②模板DNA與引物的退火(復(fù)性)：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合;③引物的延伸：DNA模板–引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留

細(xì)胞培養(yǎng)的原理和步驟2023/06/25: 細(xì)胞培養(yǎng):體外模擬體內(nèi)需要的生長條件（溫度，營養(yǎng)等），然后加上一些處理?xiàng)l件，比如做藥物篩選，就可以做抗性基因的表達(dá)的篩選，比如還可以測(cè)定某個(gè)基因敲低或是過表達(dá)的產(chǎn)物，這個(gè)當(dāng)然要結(jié)合WB來看最后基因的表達(dá)產(chǎn)物是否升高哦，細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用還有很多，歡迎大家在后臺(tái)留言。細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理：細(xì)胞傳代（生存空間和營養(yǎng)不足，長得太密，代謝廢物太多，要洗洗，同時(shí)也要分離出一部分細(xì)胞，要加入新的培養(yǎng)液），換液（生存空間和營養(yǎng)剩余，但是代謝廢物太多，要洗洗，要吃飯，才能長好，所以要洗和加入新鮮培養(yǎng)基），凍存（太多了

RNA提取實(shí)驗(yàn)的步驟2023/06/21: RNA提取是指從樣品中純化RNA的過程。RNA提取的常規(guī)方法稱為硫氰酸胍-苯/酚-氯/仿提取。Guanidiniumthiocyanate使蛋白質(zhì)變性。此外，它破壞水分子的氫鍵并用作離液劑。RNA提取中使用一種特殊試劑，稱為三試劑。它含有硫氰酸胍、苯/酚和乙酸鈉。RNA提取的基本步驟的目的與DNA提取的目的相似。RNA提取的方案如下所述。1.用冰冷的PBS洗滌細(xì)胞以維持細(xì)胞的滲透壓。2.吸出細(xì)胞并用Tri-reagent勻漿樣品。3.加入氯/仿并搖勻。4.離心可能會(huì)出現(xiàn)三層。頂層是透明的水層。中

磷酸緩沖鹽的配置方法及作用2023/06/20: PBS緩沖液，是生物化學(xué)研究中使用最為廣泛的一種緩沖液，主要成分為Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl，一般作為溶劑，起溶解保護(hù)試劑的作用。由于Na2HPO4和KH2PO4有二級(jí)解離，緩沖的pH值范圍很廣，而NaCl和KCl主要作用為增加鹽離子濃度。如有需要PBS還可以補(bǔ)加1mmol/LCaCl2和0.5mmol/LMgCl2，以提供二價(jià)陽離子。配制方法稱取8.0gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4、0.24gKH2PO4溶于800mL蒸餾水中，用HCl調(diào)節(jié)溶液至7.4

離心管作用細(xì)胞復(fù)蘇轉(zhuǎn)移2023/06/19: 細(xì)胞復(fù)蘇和凍存講究“慢凍快溶”，復(fù)蘇時(shí)一定要將凍存在液氮或-80℃中凝固的細(xì)胞凍存液快速融化至37℃，使胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對(duì)細(xì)胞造成損害。實(shí)驗(yàn)材料：離心管、細(xì)胞培養(yǎng)瓶、移液管實(shí)驗(yàn)步驟：●打開水浴鍋加熱至37℃?！癯瑑襞_(tái)上放好離心管（離心管規(guī)格選用15ml的），細(xì)胞培養(yǎng)瓶，移液管，紫外滅菌至少20至30分鐘，吹風(fēng)5至10分鐘除去臭氧。●37℃預(yù)熱好要復(fù)蘇細(xì)胞的培養(yǎng)液，也可以不用預(yù)熱培養(yǎng)液，根據(jù)細(xì)胞情況選擇?！裣螂x心管中加約5至10ml培養(yǎng)液，從液氮罐或

細(xì)胞培養(yǎng)基的類型2023/06/15: 經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種，其中DMEM、RPMI1640、MEM、DMEM/F12都是應(yīng)用廣泛的培養(yǎng)基。其他如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于某些細(xì)胞的培養(yǎng)。其具體的特征及應(yīng)用如下：1、BME細(xì)胞培養(yǎng)基基礎(chǔ)Eagle培養(yǎng)基(BME)是一種廣泛使用的合成基礎(chǔ)培養(yǎng)基，可支持很多種類的哺乳動(dòng)物細(xì)胞生長。BME最初1955年由HarryEagle針對(duì)HeLa細(xì)胞和小鼠成纖維細(xì)胞開發(fā)，其發(fā)現(xiàn)了體外細(xì)胞生長的要求。此后BME已用于其他人細(xì)胞系，包括WI-38和MRC-5。BME含有八種B族維生素、十種必

ELISA實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)2023/06/14: 1、固相載體選擇聚苯乙/烯：具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學(xué)活性。聚氯乙/烯：聚氯乙/烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙/烯高，但空白值也略高。良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間、同一板各孔之間性能相近。2、包被①板孔的選擇：ELIS級(jí)別的微孔板②抗體選擇：選擇支持ELISA實(shí)驗(yàn)的抗體，根據(jù)推薦濃度稀釋或摸索最適濃度③包被緩沖液：pH9.6碳酸鹽緩沖液或pH7.2磷酸鹽緩沖液④包被溫度：2-8℃過夜包被或室溫（37℃）包被2h⑤包被濃

養(yǎng)好的細(xì)胞如何凍存？2023/06/12: 在不附加任何保護(hù)劑下直接凍存細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會(huì)形成冰晶，能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機(jī)械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等，能引起細(xì)胞死亡。如向培養(yǎng)液加入保護(hù)劑，可使冰點(diǎn)降低。在緩慢的凍結(jié)條件下，能使細(xì)胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細(xì)胞。貯存在﹣130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。細(xì)胞凍存時(shí)脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來，待復(fù)蘇時(shí)重新進(jìn)入生長分裂周期。實(shí)驗(yàn)開始前，將凍存管、15毫升離心管、移液管、移液槍、槍頭等放入無菌超凈工作臺(tái)，以紫外線照射30分鐘。采用通風(fēng)機(jī)通風(fēng)3分鐘。以

培養(yǎng)微生物時(shí)為何培養(yǎng)皿要倒置？2023/06/07: 1．減緩蒸發(fā)：倒置培養(yǎng)皿可以減緩培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)基水分的蒸發(fā)；2．方便取用：培養(yǎng)皿蓋子大而底小，如果正著放，取用時(shí)容易只拿到蓋子，從而造成平皿內(nèi)培養(yǎng)基的暴露，可能會(huì)因此導(dǎo)致培養(yǎng)基產(chǎn)生污染或者出現(xiàn)平皿掉落等情況。3．便于觀察：培養(yǎng)皿倒置，可控制培養(yǎng)皿內(nèi)的菌落蔓延，有利于形成單菌落，便于實(shí)驗(yàn)觀察；4．避免污染：倒置可以防止在實(shí)驗(yàn)過程中，培養(yǎng)皿內(nèi)的水汽在皿蓋上冷凝成水珠滴落到培養(yǎng)基上，將雜菌引入培養(yǎng)基，造成污染，從而影響到培養(yǎng)基中微生物的生長。5．方便收集：有時(shí)候培養(yǎng)的目標(biāo)是收集細(xì)菌的代謝物，然而代謝物有

如何選擇適合的細(xì)胞凋亡試劑盒？2023/06/06: 細(xì)胞調(diào)亡是細(xì)胞主動(dòng)死亡的過程，并出現(xiàn)一系列特征變化。包括核固縮、核碎裂、凋亡小體形成，以及DNA特征性片段化、新的基因表達(dá)和特定的生物大分子合成等。流式細(xì)胞儀可以對(duì)不同細(xì)胞凋亡的過程進(jìn)行定性和定量檢測(cè)，通過檢測(cè)細(xì)胞膜完整性來反應(yīng)細(xì)胞凋亡是常用的流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡常用方法之一。其原理是：①用AnnexinV檢測(cè)早期凋亡細(xì)胞：AnnexinV可以結(jié)合細(xì)胞膜上的磷酯酰絲氨酸，磷酯酰絲氨酸位于正常細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，不會(huì)被檢測(cè)到，凋亡時(shí)外翻到細(xì)胞膜外表面，可以被檢測(cè)到。②用PI或者7AAD檢測(cè)晚期凋亡細(xì)胞：早期凋

酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)怎么做？2023/06/01: 1.原理：免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識(shí)別和結(jié)合原理，對(duì)待測(cè)抗體或者抗原進(jìn)行分析測(cè)定的方法，酶聯(lián)免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個(gè)部分組成：免疫識(shí)別，信號(hào)輸出和數(shù)據(jù)處理。2.步驟：免疫識(shí)別是在聚苯乙/烯制成的96孔板上包被抗體，而后利用抗體識(shí)別待測(cè)的抗原（通常是疾病的蛋白質(zhì)生物標(biāo)記物，病毒，細(xì)菌等等，從復(fù)雜待測(cè)液中將抗原吸附到96孔板表面。接著用帶有辣根過氧化酶（HorseradishPeroxidase,HRP）、熒光或放射性標(biāo)記的抗體通過

離心管與EP管的區(qū)別是什么？2023/05/30: 1.EP管是一種小型的離心管，主要是1.5毫升容量的離心管，可與微型離心機(jī)一起使用，主要用于微量試劑的分離。EP管為離心管，而離心管不一定是EP管，所含離心管范圍較大，有較多的規(guī)格。EP管覆蓋范圍更大，規(guī)格也更多。按大小可分為大量離心管、普通離心管和微量離心管。2.塑料離心管通常是一次性實(shí)驗(yàn)用具，不建議多次重復(fù)使用。為了節(jié)約成本，可以根據(jù)需要對(duì)離心管進(jìn)行再利用，但要保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的科學(xué)性，需要通過高溫高壓消毒。PE材料離心管，不能高溫高壓消毒。3.離心式管道，英文名稱：centrifugaltub

脂質(zhì)體包裹技術(shù)是什么？2023/05/29: 1.脂質(zhì)體包裹技術(shù)的起源起初，它是一種運(yùn)用于醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域的載藥手段，主要用于增強(qiáng)藥物的透皮吸收能力。但隨著消費(fèi)者對(duì)化妝品功效性要求的提高，這項(xiàng)技術(shù)也逐漸應(yīng)用到化妝品領(lǐng)域。2.脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)及作用機(jī)理脂質(zhì)體是由磷脂為膜材包合而成，磷脂是形成脂質(zhì)體雙分子層的基礎(chǔ)物質(zhì)，具有良好的生物相容性。脂質(zhì)體與細(xì)胞膜（生物膜）結(jié)構(gòu)相似，主要成份磷脂等類脂物是細(xì)胞膜的主要成份，所以脂質(zhì)體與細(xì)胞膜之間有很強(qiáng)的親合力。脂質(zhì)體的膜與生物膜融合，脂質(zhì)體所包含的活性成份被釋放而進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，或者整個(gè)脂質(zhì)體被細(xì)胞吞噬，活性成份在細(xì)胞

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