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血清使用常見問題2023/05/25

血清使用常見問題1、血清保存的最好方法？我們建議血清最好保存在-20℃保存。若一次使用不完一瓶，建議無菌分裝于適當?shù)臏缇萜鲀?nèi)冷凍備用。2、如何解凍血清，才能保證其質量不會受損？我們建議將血清從冷凍箱取出后，置于2℃～8℃冰箱中解凍，然后在室溫下全融，解凍過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。3、為什么血清在解凍后會出現(xiàn)絮狀沉淀？應該怎樣處理？血清中絮狀沉淀產(chǎn)生的原因有很多，其中還是由于血清中脂蛋白的變性所致，而血纖維蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解凍后，也會存在于血清中，這也是造成沉淀的主要原因，但這些

無血清細胞培養(yǎng)基的分類2023/05/24

無血清培養(yǎng)基是繼天然培養(yǎng)基，合成培養(yǎng)基之后的第三類培養(yǎng)基。與傳統(tǒng)的培養(yǎng)基相比較，無血清培養(yǎng)基是不含動物血清或其他生物提取液，但仍可以維持細胞在體外較長時間生長、繁殖的一種培養(yǎng)基。無血清培養(yǎng)基由于其組成成分相對清楚，制備過程簡單，在現(xiàn)代生物技術學領域得到廣泛應用。無血清培養(yǎng)技術也是闡明細胞生長，增值，分化及基因表達調控的基礎研究問題的有力工具。目前，無血清培養(yǎng)基的研究有兩個方向：一是培養(yǎng)基中不含有任何動物來源的添加組分;二是培養(yǎng)基中不含有不明確的添加組分。依此可以將當前應用較多的無血清培養(yǎng)基歸納為

標準溶液如何配置2023/05/22

標準溶液配制過程標準溶液是指已知準確濃度的試劑溶液。標準溶液包括鐵、錳、鎳、銅、硅、釩等金屬、非金屬還有石油類、陰離子、標準樣品及標準溶液（單標及混標共100多種）。標準溶液有兩種配制方法：(1)直接配制法準確稱取一定量的基準試劑，溶解后定量轉入容量瓶中，加試劑水稀釋至刻度，充分搖勻，根據(jù)稱取基準物質的質量和容瓶體積，計算其準確濃度。(2)間接配制法間接配制法又稱標定法，是指將要配制的溶液先配制成近似于所需濃度的溶液，然后再用基準物或標準溶液標定出它的準確濃度。注意事項(1)稱樣時要準確稱量，且

胎牛血清運用中遇到的常見問題2023/05/18

1、怎樣貯存和凍結血清才不會使產(chǎn)質量量受損?將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須留意的是，融解過程中必須規(guī)矩地搖晃均勻。長時間貯存在2-8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)或許集合而形成沉積或可見的混濁。因而，推薦在-20℃以下貯存血清，并防止反復凍融。血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時，請勿超越一個月。若一次無法用完一瓶，主張無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。2、血清中包括絮狀沉積，它們是什么，怎樣處理?

細胞培養(yǎng)相關知識2023/05/17

何為細胞培養(yǎng)？細胞常規(guī)培養(yǎng)是在細胞房中進行，在超凈工作臺或生物安全柜中，把細胞處理好，根據(jù)需要加入細胞培養(yǎng)基，放入細胞培養(yǎng)瓶/皿或細胞培養(yǎng)板中，再放到帶有5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細胞就像花花草草，尤其是細胞株基本每天都要觀察、打理的哦！培養(yǎng)的細胞從哪里來？1.細胞株簡單說就是買的或送的。2.原代細胞組織或血液中提取的。一般細胞株可以連續(xù)傳代，而原代細胞養(yǎng)著養(yǎng)著就掛了。培養(yǎng)細胞的生長方式有哪些？1.貼壁生長必須貼附于支持物表面才能生長。見于各種腫瘤細胞等。（你把培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶底朝上，細

明膠的改性可通過哪三種途徑2023/05/16

明膠具有許多優(yōu)異的性質與性能，但也不可避免地具有一些不足之處，因而需要通過一定的手段來予以彌補和使之消除，或者使之具有新的性質與性能，這就是“明膠的改性”。明膠的改性大體上可通過三種途徑，即純物理改性、共混改性和化學改性。純物理改性純物理改性是指在不添加任何添加劑的情況下，通過明膠本身結構的改變來改變其某些性能。明膠在其制品中是以膠原狀的螺旋構象和卷曲構象的形式存在的，兩種構象比例的不同，對明膠制品性能的影響很大。例如，明膠溶液或涂布成膜冷凝后放置一定時間，使明膠分子構象轉變形成高度螺旋構象，此

生物實驗中剛果紅是怎么用的？2023/05/15

剛果紅染色法特指用剛果紅將纖維素染色的方法。剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復合物，常用的剛果紅染色法有兩種。在剛果紅中加入氯化鈉可以可以使結合不牢的剛果紅洗去。剛果紅的原理：剛果紅篩選主要是根據(jù)菌落降解纖維素,可以形成降解圈,氯化鈉沖洗再烘干后可以讓降解圈看的更清楚,更易觀察、它可以與像纖維素這樣的多糖物質形成紅色復合物,但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應.在含有纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅染色后,再Nacl用漂洗,Nacl可以使結合不牢的剛果紅洗去,這樣就留下大大小小的透明圈。剛果

parafilm封口膜使用中的注意事項及應用范圍2023/05/12

Parafilm封口膜（貨號：PM-996）使用中的注意事項：1、溫度特性：當溫度超過38℃時，Parafilm封口膜薄膜性能開始下降，變得難以展開。性能下降的標志是薄膜粘性提高，以至于不能在無破裂情況下延伸到我們需要的長度。Parafilm封口膜薄膜低溫使用范圍取決于其所受機械作用力的大小。如果Parafilm封口膜薄膜沒有任何伸縮、彎曲，其*可以放入液氮中而不會出現(xiàn)任何問題。像絕大多數(shù)塑料材料一樣，我們必須要研究材料在干冰和液氮環(huán)境中的脆性。暴露在液氮環(huán)境中的Parafilm封口膜，在回到室

弗氏完/Q佐劑和弗氏不完/Q佐劑的區(qū)別2023/05/11

弗氏體即弗氏佐劑是動物實驗中常用的佐劑，分為不完/Q弗氏佐劑和完/Q弗氏佐劑。不完/Q弗氏佐劑是液體石蠟與羊毛脂混合而成，組分比為1～5：1，可根據(jù)需要而定，通常為2：1.不完/Q佐劑中加卡介苗(最終濃度為2～20mg/ml)或死的結核分枝桿菌，即為完/Q弗氏佐劑（FCA）。一般注射時用1/2體積FCA加上1/2體積的抗原進行乳化，第二次或第三次注射時用不完/Q佐劑或不用佐劑。如不加佐劑，則抗原量增大10-20倍。弗氏完Q佐劑：Freund'sAdjuvantComplete弗氏完/Q佐劑是一種

常見七種細菌鑒定生化反應2023/05/10

各種細菌所具有的酶系統(tǒng)不盡相同,對營養(yǎng)基質的分解能力也不一樣,因而代謝產(chǎn)物或多或少地各有區(qū)別,可供鑒別細菌之用.用生化試驗的方法檢測細菌對各種基質的代謝作用及其代謝產(chǎn)物,從而鑒別細菌的種屬,稱之為細菌的生化反應。(1)、糖(醇)類發(fā)酵試驗不同的細菌含有發(fā)酵不同糖(醇)的酶,因而發(fā)酵糖(醇)的能力各不相同.其產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物亦不相同,如有的產(chǎn)酸產(chǎn)氣,有的產(chǎn)酸不產(chǎn)氣.酸的產(chǎn)生可利用指示劑來判定.在配制培養(yǎng)基時預先加入溟甲/酚紫［PHS.2(黃色)一6.8(紫色)],當發(fā)酵產(chǎn)酸時,可使培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S

過氧化氫酶是什么？2023/05/09

過氧化氫酶是一種普遍存在于幾乎所有生物體內(nèi)的一種抗氧化酶，主要分布于植物的葉綠體、線粒體、內(nèi)質網(wǎng)、動物的肝和紅細胞中。它是過氧化物酶體的標志酶,約占過氧化物酶體酶總量的40%。過氧化氫酶是由四個多肽鏈組成的同源四聚體，每一個亞基含有超過500個氨基酸殘基，且每個亞基的活性位點都含有一個卟啉血紅素基團，用于催化過氧化氫的反應。過氧化氫酶的最適pH接近7，最適溫度則因物種而異。過氧化氫酶的主要作用是催化過氧化氫分解為水和氧氣，清除體內(nèi)的過氧化氫，從而使細胞免于遭受H2O2的毒害，是生物防御體系的關鍵

常見細胞裂解液及其組分2023/05/08

在許多細胞內(nèi)蛋白表達、純化及蛋白-蛋白互作等免疫實驗（如WB、IP、Co-IP、ChIP）中，細胞裂解是關鍵一步。RIPA裂解液RIPA裂解液是一種傳統(tǒng)的細胞組織快速裂解液，獲得的蛋白樣品可用于常規(guī)WB、IP等實驗。組分：25mMTris-HCl,pH7.6、150mMNaCl、1%NP-40、1%去氧膽酸鈉、0.1%十二烷基硫酸鈉（SDS）。IP裂解液IP裂解液是一種改良后的RIPA裂解液，具中等強度效力，可高效溶解細胞蛋白，但不會像RIPA一樣釋放染色體組DNA或破壞蛋白復合物。適合下游免疫

什么是脯氨酸？他的作用是什么？2023/05/06

脯氨酸是一種環(huán)狀的亞氨基酸。α-亞氨基酸，中性，等電點為6.30，水中溶解度比任何氨基酸都大，25℃時100g水中可溶162g左右。易潮解不易得結晶，有甜味。與茚三酮溶液共熱，生成黃色化合物。一旦進入肽鏈后，可發(fā)生羥基化作用，從而形成4-羥脯氨酸，是組成動物膠原蛋白的重要成分。羥脯氨酸也存在于多種植物蛋白質中，尤其與細胞壁的形成有關。植物體在干旱、高溫、低溫、鹽漬等多種逆境下，常常有脯氨酸的明顯積累。我們知道脯氨酸有三種形式DL-脯氨酸，L-脯氨酸、D-脯氨酸，通常所說的脯氨酸就是L-脯氨酸，天

移液槍的原理是什么？2023/05/05

移液器其實就是一個加了彈簧和活塞位置調節(jié)機構的針筒。至于你問為什么那么精確，其實微量注射器（微量進樣器）也很準，只不過不能像移液器一樣標準化使用操作。移液器確保反復使用的要素，主要和密封性有關。任何廠牌的移液器，最后其實都是首先拼密封性，其次是調節(jié)機構的準確性。密封良好的移液器，只要調節(jié)機構經(jīng)過校準并且可以穩(wěn)定保持精度，就不必擔心有問題。移液器的密封性主要有幾個因素：1）活塞的品質活塞的材質很重要，要經(jīng)得起長期與套筒相互摩擦2）套筒的品質不能容易彎曲變形或熱脹冷縮3）O型彈性密封圈這個是耗材，一

PCR技術是什么？PCR的基本反應步驟有哪些？2023/04/27

一、PCR是什么聚合酶鏈式反應是一種用于放大擴增特定的DNA（或RNA）片段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊DNA復制，PCR的最大特點，是能將微量的DNA大幅增加。因此，無論是化石中的古生物、歷史人物的殘骸，還是幾十年前兇殺案中兇手所遺留的毛發(fā)、皮膚或血液，只要能分離出一丁點的DNA，就能用PCR加以放大，進行比對。這也是“微量證據(jù)”的威力之所在。PCR(聚合酶鏈式反應）是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經(jīng)常是60°C左右）時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合，

在細胞培養(yǎng)中，如何凍存細胞2023/04/25

操作步驟：1.用移液器吸走原培養(yǎng)基，加入適量PBS洗1-2遍；2.加入適量胰酶，置于培養(yǎng)箱中消化；3.待消化到位后加入適量血清或培養(yǎng)基終止消化，800-1000rpm離心3-5min；4.配制凍存液，待細胞離心后去上清，加入凍存液重懸，轉移到凍存管中；5.將凍存管放入程序降溫盒中，-80度過夜，然后轉移到液氮中保存。注意細節(jié)：1.凍存步驟中包含了消化的大部分步驟，注意細節(jié)相同2.凍存液常規(guī)配比為培養(yǎng)基：血清：DMSO=7:2:1，如果細胞比較珍貴，可以調整為血清：DMSO=9:1；3.如果沒有程

DMEM培養(yǎng)基的高糖與低糖有哪些區(qū)別？2023/04/24

DMEM是一種含各種氨基酸和葡萄糖的培養(yǎng)基，是在MEM培養(yǎng)基的基礎上研制的。與MEM比較增加了各種成分用量，同時又分為高糖型（高于4500mg/L）和低糖型（低于1000mg/L）。高糖型有利于細胞停泊于一個位置生長，適于生長較快、附著較困難腫瘤細胞等。DMEM培養(yǎng)基的高糖與低糖有哪些區(qū)別？1、用途不同：低糖DMEM用于養(yǎng)干細胞可防分化，高糖DMEM可以養(yǎng)大多數(shù)哺乳動物的細胞。2、適用性不同：高糖DMEM適于培養(yǎng)代謝旺盛的細胞，而低糖適于培養(yǎng)一般代謝水平的細胞。代謝活躍的細胞，如ES，低糖培養(yǎng)基

考馬斯藍染料的原理，及使用及步驟2023/04/23

考馬斯藍染料簡介：考馬斯藍廣泛用于瓊脂糖或丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質的可視化?？捡R斯亮藍R250（紅色染成藍色）電泳（更靈敏：可以檢測到0.1微克蛋白質），考馬斯藍G250（淺綠色藍色）用于溶液中的蛋白質分析（方便-可溶）。兩者都可以用于每種應用中，但是它們可以互換使用，因為它們可以將蛋白質染色成不同的強度和顏色?？捡R斯藍染料技術說明：考馬斯藍R-250和G-250染料是考馬斯染料的兩種最常見的化學形式，是二磺化的三苯基甲/烷化合物。R-250（紅色）缺少以G-250（綠色）形式存在的兩個甲基。

透析袋原理是什么？根據(jù)分子量篩選，使用方法的詳細介紹2023/04/20

一、透析的原理透析只需要使用專用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀，將生物大分子樣品溶液置入袋內(nèi)，將此透析袋浸入水或緩沖液中，樣品溶液中大分子量的生物分子被截留在袋內(nèi)，而鹽和小分子物質不斷擴散透析到袋外，直到袋內(nèi)外兩邊的濃度達到平衡為止。保留在透析袋內(nèi)未透析出的樣品溶液稱為“保留液”，袋（膜）外的溶液稱為“滲出液”或“透析液”。透析的動力是擴散壓，擴散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度，正比于欲透析的小分子溶質在膜內(nèi)外兩邊的濃度梯度，還正比于膜的面積和溫度，通常是4

培養(yǎng)基的種類那么多，怎么給細胞選擇合適的培養(yǎng)基？2023/04/18

培養(yǎng)細胞的重要環(huán)節(jié)有很多，其中很重要的一步就是為細胞選擇適合的生長環(huán)境，為其選擇成分適合又營養(yǎng)豐富的細胞培養(yǎng)基。細胞培養(yǎng)基是供給細胞營養(yǎng)、維持細胞生長和增殖的多種營養(yǎng)物質的混合物，種類一般包括基礎培養(yǎng)基、無血清培養(yǎng)基以及化學成分確定的培養(yǎng)基等。這其中又以基礎培養(yǎng)基最為常用。基礎培養(yǎng)基屬于合成培養(yǎng)基，是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分，用化學物質模擬合成、人工設計、配制的培養(yǎng)基，其主要成分有氨基酸、碳水化合物、無機鹽、維生素及其他輔助成分，比如DMEM、RPMI1640、MEM、DMEM/F12，這些都是應用