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上海鹿森生物工程有限公司
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PCR技術(shù)的常規(guī)實(shí)驗(yàn)流程步驟2023/12/19
PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）是一種分子生物學(xué)技術(shù)，現(xiàn)在已經(jīng)被廣泛運(yùn)用于臨床和實(shí)驗(yàn)室，用于擴(kuò)增特定的DNA片段。它的基本原理就是在體外模擬細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制的條件，最終完成特定基因的體外復(fù)制。PCR實(shí)驗(yàn)基本由變性、退火、延伸三個步驟完成。1.變性。變性的目的是使模板DNA雙鏈解旋成為單鏈以便與引物結(jié)合，通常給它加溫至95℃（這是Taq酶進(jìn)行30個左右的循環(huán)后活力不致受到過多損失時能耐受的最高溫度）。模板的變性對PCR成功與否至關(guān)重要，第一輪循環(huán)中變性時間往往為10min，然而根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，在其他各次的循環(huán)中
胎牛血清的功能有哪些?2023/12/12
胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成份，常用于動物細(xì)胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。1.提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。5.起酸堿度緩沖液作用。6.提供蛋白酶抑制劑，使在細(xì)胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，保
細(xì)胞爬片（玻片）的用前準(zhǔn)備2023/12/06
細(xì)胞爬片又名玻片，是指讓玻片浸在細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)，細(xì)胞在玻片上生長，主要用于組織學(xué)，冰凍切片，細(xì)胞涂片，原位雜交等。除了在實(shí)驗(yàn)中的使用，實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備也十分重要，讓我們一起來看看使用前需要做哪些準(zhǔn)備吧！用前準(zhǔn)備：1、蓋玻片的選擇爬片可用一般的蓋玻片，也可用專用細(xì)胞爬片，價格比較昂貴但是細(xì)胞貼壁牢固，拍出照片效果好；2、爬片的剪裁可根據(jù)自己的需要，到染色時再將之切開，這樣既保證了細(xì)胞均一性，又可同時做幾個指標(biāo)的染色剪裁成合適大小，置于6孔板、12孔板或24孔板；3、爬片的使用前處理將剪裁好的爬片，置于濃
如何鋪出均勻的細(xì)胞培養(yǎng)板？2023/11/20
細(xì)胞居中和細(xì)胞邊緣化從經(jīng)濟(jì)和高效的角度來說，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇不同規(guī)格的培養(yǎng)板。如在進(jìn)行藥物對待測細(xì)胞半抑制率（IC50）測試時，通常使用96孔板，一方面可以設(shè)置濃度梯度；另外還可一次性測多個藥物，減少實(shí)驗(yàn)誤差。收集細(xì)胞要混勻消化后的細(xì)胞一定要充分混勻，要把聚在一起的細(xì)胞團(tuán)充分地吹打開，最好是單個的狀態(tài)，但同時又不能損傷細(xì)胞，可以用玻璃吸管的移液器操作。離心也很有講究，一般用1000rpm/min即可。離心力太大細(xì)胞容易抱團(tuán)，然后懸浮離心后的細(xì)胞團(tuán)時，先不要把所有液體都加進(jìn)，一般先加2mL液體
PVDF膜的主要用途及功能2023/11/14
PVDF膜這種說法很籠統(tǒng)，因?yàn)镻VDF膜有很多種，這邊簡單介紹幾種：1、水處理用PVDF膜，分為超濾膜和微濾膜兩種，主要用于污水、海水淡化等的前處理，清除大分子、細(xì)菌、泥沙等雜質(zhì)2、戶外建筑用PVDF膜，主要用戶戶外建筑的玻璃、外墻、戶外廣告牌等的保護(hù)，主要是耐老化和耐磨功能3、電池用PVDF膜，包括在燃料電池和鋰離子聚合物電池中的隔膜應(yīng)用PVDF的主要性能：?機(jī)械強(qiáng)度與堅韌度高?防霉菌性?高耐磨性?對氣體和液體的高耐滲透性?耐熱穩(wěn)定性好?阻燃，低煙?溫度提升過程中抗蠕變性好?純度高?容易進(jìn)行熔
細(xì)胞培養(yǎng)皿的用途、注意事項(xiàng)有哪些？2023/11/09
定義：培養(yǎng)皿是一種用于微生物或細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)室器皿，由一個平面圓盤狀的底和一個蓋組成，一般用玻璃或塑料制成。培養(yǎng)皿材質(zhì)基本上分為兩類，主要為塑料和玻璃的，玻璃的可以用于植物材料、微生物培養(yǎng)和動物細(xì)胞的貼壁培養(yǎng)也可能用到。塑料的可能是聚乙xi材料的，有一次性的和多次使用的，適合實(shí)驗(yàn)室接種、劃線、分離細(xì)菌的操作，可以用于植物材料的培養(yǎng)。用途：適用于防疫站、醫(yī)院、生物制品、食品工業(yè)、制藥工業(yè)等單位，用于細(xì)菌的分離培養(yǎng)、抗菌素效價檢驗(yàn)和定性檢驗(yàn)分析。在農(nóng)業(yè)、水產(chǎn)等科學(xué)研究用于對種子發(fā)牙、植物、昆蟲、魚種
新手如何培養(yǎng)細(xì)胞？2023/11/06
細(xì)胞培養(yǎng)基本概念：細(xì)胞培養(yǎng)將活細(xì)胞（尤其是分散的細(xì)胞）在體外進(jìn)行培養(yǎng)的方法稱為細(xì)胞體外培養(yǎng)。狹義的主要是指分離（散）細(xì)胞培養(yǎng)，廣義的還包括單（個）細(xì)胞培養(yǎng)又稱克隆，是指單個細(xì)胞通過有絲分裂形成的細(xì)胞群體。原代細(xì)胞初次培養(yǎng)。即培養(yǎng)物一經(jīng)接種到培養(yǎng)皿中就不再分割，任其生長繁殖而不更換生長器皿。傳代培養(yǎng)隨著培養(yǎng)時間的延長、細(xì)胞不斷分裂繁殖，細(xì)胞之間相互接觸會發(fā)生接觸性抑制，生長速度逐漸減慢甚至停止。培養(yǎng)皿中營養(yǎng)物逐漸不足，代謝產(chǎn)物不斷累積，不利于細(xì)胞繼續(xù)生長。在這種情況下，需要將培養(yǎng)物分割成小的部分，
ELISA測定應(yīng)該如何正確操作2023/10/30
ELISA測定現(xiàn)在通常為采用手工操作的以微孔板條為固相的測定模式，測定操作非常簡單，一般涉及到標(biāo)本的收集保存、試劑準(zhǔn)備、加樣、溫育、洗板、顯色、比色、結(jié)果判斷和結(jié)果報告及解釋等方面，其中任一步驟的不當(dāng)都會影響測定結(jié)果，且尤以加樣、溫育和洗板等步驟為甚?，F(xiàn)分述如下。一、臨床標(biāo)本的收集和保存用于ELISA測定的臨床標(biāo)本最為常用的是血清（漿），有時因?yàn)樘囟ǖ臋z測目的，也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標(biāo)本。目前臨床上使用血清標(biāo)本測定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、激素、特種蛋白、細(xì)胞
影響ELISA試劑盒試驗(yàn)成果的要素2023/10/26
ELISA試劑盒，即酶聯(lián)免疫法。ELISA法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的特點(diǎn)，并具有操作簡潔、無放射性危害的優(yōu)點(diǎn)，因此多年來廣泛應(yīng)用于各高校、醫(yī)院、血站和科研機(jī)構(gòu)的試驗(yàn)室中。影響ELISA試驗(yàn)的要素有如下三方面：一、試劑盒1、抗原、抗體活性對效價的影響：主要是試劑中抗體（或抗原）的效價下降或失活，成果不易判別。再有ELISA試劑盒靈敏度高，對雜質(zhì)的反響靈敏度也高，試驗(yàn)中空白對照OD值偏高或假陽性；2、酶結(jié)合物濃度過高，也會導(dǎo)致OD值假性增高。二、試驗(yàn)儀器1、加樣器是否通過校正，酶免測定血清
什么是牛血清白蛋白？2023/10/23
牛血清白蛋白（BSA）是牛血清中的一種球蛋白，包含607個氨基酸殘基，分子量為66.446KDa，等電點(diǎn)為4.7。應(yīng)用：牛血清白蛋白（BSA）在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用，例如在WB實(shí)驗(yàn)中加入BSA，通過提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度，對酶起保護(hù)作用。防止酶的分解和非特異性吸附，能減輕有些酶的變性減輕不利環(huán)境因素，如加熱、表面張力及化學(xué)因素引起的變性。測定蛋白濃度按50：1配置BCA工作液。10ulC液（蛋白標(biāo)準(zhǔn)）+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)液。再分別以0、1、2、4、8、12、16、
離心管的作用及注意事項(xiàng)，有哪些？2023/10/19
一、種類：大量離心管（500mL、250mL）普通離心管（50mL、15mL）微量離心管（2mL、1.5mL、0.65mL、0.2mL）離心管按照底部形狀：錐形離心管，底部為錐形，是使用最多的離心管類型，平底離心管、圓底離心管離心管按照蓋子閉合方式：壓蓋離心管，以按壓方式密封的離心管，常見于微型離心管、螺旋蓋離心管，又可分為平蓋（蓋子頂部是平的）和塞蓋（蓋子頂部有塞子形狀）離心管按材料分：1、玻璃離心管：使用玻璃管時離心力不宜過大，需要墊橡膠墊，防止管子破碎，高速離心機(jī)一般不選用玻璃管。離心管蓋
ELISA（酶聯(lián)免疫吸附）原理及步驟詳解2023/10/13
1.原理：免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識別和結(jié)合原理，對待測抗體或者抗原進(jìn)行分析測定的方法，酶聯(lián)免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個部分組成：免疫識別，信號輸出和數(shù)據(jù)處理。2.步驟：免疫識別是在聚苯乙烯制成的96孔板上包被抗體，而后利用抗體識別待測的抗原（通常是疾病的蛋白質(zhì)生物標(biāo)記物，病毒，細(xì)菌等等，從復(fù)雜待測液中將抗原吸附到96孔板表面。接著用帶有辣根過氧化酶（HorseradishPeroxidase,HRP）、熒光或放射性標(biāo)記的抗體通過直
PCR 成功的四大要素及注意事項(xiàng)2023/10/08
一、模板1.模板降解1）盡量選擇新鮮提取的模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過凝膠電泳檢測模板的完整性，若降解嚴(yán)重需要重新制備模板；2）模板避免反復(fù)凍融。2.模板中含有抑制DNA聚合酶活性的抑制劑1）采用離心柱法提取核酸，純化模板，消除抑制劑的干擾；2）適當(dāng)減少模板量，采用梯度稀釋摸索最佳模板量；3）選用抗逆性強(qiáng)的DNA聚合酶。3.模板量太低1）適當(dāng)增加模板量；2）模板為cDNA時，選用目的基因表達(dá)量高的組織提取高質(zhì)量RNA并選用基因克隆專用的反轉(zhuǎn)錄試劑盒得到的cDNA作為模板；3）選用靈敏度高的DNA聚合
如何正確的使用封板膜？2023/09/27
1.將封板膜貼在板子上從自封袋中取出單張封板膜，然后重新封好自封袋，以保持其中的無酶環(huán)境。保持底襯面朝上，握住封板膜，沿著切線處慢慢撕下底襯。隨后，將封板膜粘性面的一端貼在板子上，掌握好距離和角度，避免后續(xù)貼歪。貼的過程中一端貼，另一端拉住。注意：一定要戴手套●如果使用單端標(biāo)簽的封板膜，則將襯紙部分除去、然后將封板膜錨固到板上，使其密封在整個板上，然后繼續(xù)除去襯紙。這種方法可以消除封板膜產(chǎn)生的卷曲和回滾?！袢绻褂脙蓚€末端標(biāo)簽的產(chǎn)品，請以連續(xù)平滑的方式剝離中心襯紙。緩慢剝離內(nèi)襯可以減少卷曲。注意
細(xì)胞篩網(wǎng)的使用方法2023/09/19
細(xì)胞篩網(wǎng)（產(chǎn)品別名：細(xì)胞過濾網(wǎng)）常用于器官培養(yǎng)、組織轉(zhuǎn)運(yùn)或移植，尤其適用于干細(xì)胞和原代細(xì)胞過濾，常與流式細(xì)胞儀配套使用，是流式細(xì)胞分選實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞過濾器使用堅固的尼龍網(wǎng)制作，主要分為三個篩孔型號：100um，70um，40um，可滿足不同細(xì)胞大小的過濾操作。那么怎樣才是正確的細(xì)胞篩網(wǎng)使用方法？讓我們一起來看看！使用方法：1.準(zhǔn)備濾器：選擇一個合適的細(xì)胞篩網(wǎng)，并根據(jù)需要在濾器上加上濾紙，使其更容易使用。2.準(zhǔn)備細(xì)胞懸液或培養(yǎng)基：將細(xì)胞懸液或培養(yǎng)基倒入容器中，并加入需要的藥物、酶、抗生素等。3.過濾細(xì)
ELISA試劑盒操作的5個方面2023/09/13
ELISA試劑盒操作較繁雜,在操作中應(yīng)留神以下5個方面。1.跟著病況的進(jìn)展或由其他因素影響，某些抗體在機(jī)體內(nèi)的含量發(fā)作大幅動搖，因此有必要對標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理。間接法測定中，標(biāo)本恰當(dāng)稀釋還可下降非特異性反響。2.加樣一般運(yùn)用加液器，在ELISA試劑盒中一般有4次加樣：加標(biāo)本、加酶結(jié)合物、加底物和加間斷液。加標(biāo)本時有必要每份標(biāo)本運(yùn)用一支移液器吸嘴，避免交叉污染。加酶結(jié)合物、底物和間斷液時則不需更換吸嘴。3.在成批手藝檢測中，還應(yīng)留神操作時差的影響。加樣及混勻時間的差異，使抗原抗體反響和酶促反響時間不一
胰蛋白胨國產(chǎn)與進(jìn)口的區(qū)別及特點(diǎn)？2023/09/11
國產(chǎn)的的胰蛋白胨是以新鮮牛肉和牛骨經(jīng)胰酶消化，濃縮干燥而成的淺黃色粉末。具有色淺、易溶、透明、無沉淀等良好的物理性狀。含有豐富的氮源、氨基酸等，可配制各種微生物培養(yǎng)基，生化制品及微生物學(xué)科研等領(lǐng)域中。進(jìn)口的胰蛋白胨與國產(chǎn)的酪蛋白胨相同，也叫胰酪蛋白胨，都是采用酪蛋白為原料，經(jīng)過消化、脫色、過濾、濃縮、噴霧干燥而得到的一種淺黃色至類白色的干燥粉末。易溶于水，水溶液呈淡黃色。酪蛋白又稱干酪素是從牛奶中提取的一種營養(yǎng)價值很高的磷蛋白，是生產(chǎn)蛋白胨常用的原料。用此原料生產(chǎn)的蛋白胨，其氨基酸比較齊全，特別
使用培養(yǎng)皿的注意事項(xiàng)2023/09/01
培養(yǎng)皿是一種用于微生物或細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)室器皿，由一個平面圓盤狀的底和一個蓋組成，是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中常見的一種耗材。那么使用培養(yǎng)皿有哪些注意事項(xiàng)呢？一起來看看吧！注意事項(xiàng)1、培養(yǎng)皿質(zhì)地脆弱、易碎，故在清洗及拿放時應(yīng)小心謹(jǐn)慎、輕拿輕放。2、使用完畢的培養(yǎng)皿及時清洗干凈，存放在安全、固定的位置，防止損壞、摔壞。3、使用培養(yǎng)皿的時候倒置的原因：1）防止培養(yǎng)基的水分蒸發(fā)，特別是培養(yǎng)基倒的時候如果倒的比較少的時候更容易干掉,影響微生物生長。2）防止形成的冷凝水滴落在培養(yǎng)基上造成染菌。3）倒放可以在某種程度上防止菌
超濾管的使用和注意事項(xiàng)2023/08/30
超濾是大分子脫鹽、濃縮的方法，重復(fù)性好，得率有保障，已經(jīng)在蛋白、抗體、病毒、核酸、囊泡等樣品制備中建立標(biāo)準(zhǔn)操作；在目前大熱的外泌體制備中也已經(jīng)成為主流方法。超濾管該如何使用？注意事項(xiàng)有哪些？讓我們一起來看看吧！使用方法1、預(yù)處理：新超濾管：使用前用純水浸泡，冰箱預(yù)冷10min。然后將水倒出，置于冰上預(yù)冷2-5min，加樣。舊超濾管：倒出管內(nèi)的乙醇浸泡液，用純水沖洗干凈10遍（注意水流速盡量平緩，防止沖破濾膜），置于冰上預(yù)冷2-5min，加樣。2、加樣：如超濾管中有少許殘留水可將超濾管內(nèi)管倒置10
PBS磷酸鹽緩沖液的配置方法及作用2023/08/25
PBS緩沖液，是生物化學(xué)研究中使用最為廣泛的一種緩沖液，主要成分為Na2HPO4、KH2PO4、NaC和KCI，一般作為溶劑，起溶解保護(hù)試劑的作用。由于Na2HPO和KH2PO4有二級解離，緩沖的PH值范圍很廣，而NaCI和KCI主要作用為增加鹽離子濃度。如有需要PBS還可以補(bǔ)加1mmoI/LCaCI2和0.5mmoI/LMgCI2，以提供二價陽離子。配置方法：稱取8.0gNaCI、0.2gKCI、1.44gNa2HPO4、0.24gKH2PO4溶于800ml蒸餾水中，用HCI調(diào)節(jié)溶液至7.4，
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