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上海鹿森生物工程有限公司
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胰蛋白酶在細(xì)胞培養(yǎng)中發(fā)揮的作用及操作步驟2023/08/24
胰蛋白酶是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗中常見的一種試劑，他在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗中怎樣才能發(fā)揮該有的作用呢？又該如何進(jìn)行實(shí)驗?zāi)兀孔屛覀円黄饋砜纯?！作用?.胰蛋白酶是一種消化酶，可分解許多脊椎動物消化系統(tǒng)中的蛋白質(zhì)，它存在于胰液中。2.質(zhì)膜上的蛋白質(zhì)負(fù)責(zé)多種功能，這些功能對于維持細(xì)胞的正常生理活動至關(guān)重要。3.一些質(zhì)膜蛋白（如鈣粘蛋白家族）是粘附蛋白，可作為錨，將細(xì)胞骨架蛋白連接到細(xì)胞外基質(zhì)。這有助于細(xì)胞粘附和細(xì)胞遷移。4.在細(xì)胞培養(yǎng)物中，可以將胰蛋白酶添加到培養(yǎng)基中，通過消化粘附蛋白從培養(yǎng)皿表面釋放貼壁細(xì)胞。5.胰蛋
酵母蛋白胨的優(yōu)勢及蛋白胨的用途2023/08/21
酵母蛋白胨的優(yōu)勢：動植物源蛋白胨是市場中主要的蛋白胨，對于比較粗放的發(fā)酵，該類產(chǎn)品具有一定的優(yōu)勢。但隨著酵母要求逐漸精細(xì)化、標(biāo)準(zhǔn)化后，這類蛋白胨的弊端逐漸暴露出來。動植物生長的環(huán)境及一些外在因素，可能造成動植物生長狀態(tài)的波動，進(jìn)而造成其體內(nèi)蛋白含量波動，并且蛋白的儲存、提取和加工體系基本是開放的，可能會造成原料品質(zhì)的變化（如變色、腐敗等）和營養(yǎng)成分的差異，最終導(dǎo)致蛋白胨產(chǎn)品質(zhì)量的不穩(wěn)定，以此為原料，勢必會影響發(fā)酵生產(chǎn)的穩(wěn)定性；動物源蛋白凍可能存在致病性和風(fēng)俗禁忌問題，植物性的蛋白胨主要存在過敏性
移液槍如何校準(zhǔn)？2023/08/18
校準(zhǔn)步驟：1、打開電子天平，電子天平調(diào)零。2、天平稱指示穩(wěn)定后，按住歸零鍵歸零。將移液管噴嘴安裝在移液管上，對移液器進(jìn)行清洗。3、將移液器的體積調(diào)整到檢查點(diǎn)。通常選擇具有最小、中等和較大容量值的檢查點(diǎn)?？梢允翘囟ǖ娜萘奎c(diǎn)。4、用移液管將檢測到容量的超純水系統(tǒng)轉(zhuǎn)移到天平的小量杯中。5、天平指示穩(wěn)定后，立即加載并記錄電子分析天平指示的標(biāo)準(zhǔn)值。記錄的結(jié)束會使電子分析日甚至歸零。6、重復(fù)實(shí)施3-5次，記錄結(jié)束，再次將移液器的體積調(diào)整到下一個檢查點(diǎn)。檢查點(diǎn)按照從小到大的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行調(diào)整。
Gelred核酸凝膠染料的使用方法2023/08/16
A.預(yù)制凝膠法1.將GelRed（10,000X）原液以1:10,000比例加入到熔化的凝膠中，混合均勻。（GelRed可在加熱后的凝膠冷卻至45℃左右時添加。）2.倒膠，室溫放置等待凝固。3.按常規(guī)方法上樣電泳。4.觀察染色凝膠使用標(biāo)準(zhǔn)的透照儀(302或312nm)，成像使用溴化乙錠濾光器，SYBR或GelStar濾光器凝膠成像也可以得到很好的結(jié)果。5.未使用的含有GelRed的預(yù)制凝膠可以重新熔化做膠，為保證最佳熒光信號，酌情添加適量染料。不建議長期儲存含有GelRed熔化形式的瓊脂糖。含有
新生牛血清的成分2023/08/10
1.蛋白質(zhì)新生牛血清中的主要成份中除包括可攜帶金屬離子、脂肪酸和自身是激素類蛋白外，主要還有白蛋白，球蛋白。纖維粘連素細(xì)胞促進(jìn)細(xì)胞附著;胎牛血清中含胎球蛋白促細(xì)胞依附;轉(zhuǎn)鐵蛋白可以結(jié)合鐵離子，減少其毒性會被細(xì)胞利用的可能。2.多肽血小板促生長因子能促細(xì)胞分裂，據(jù)專人介紹新生牛血清是多肽家族的重要成員，多肽擁有著重要的作用，比如它可以促進(jìn)細(xì)胞增殖因子數(shù)量的增加。不僅如此，它還能夠促成纖維細(xì)胞生長因子以及神經(jīng)細(xì)胞生長因子等。雖然從數(shù)量上來看新生牛血清的含量比例少，但它能夠促進(jìn)細(xì)胞的增長。3.激素激素
蛋白免疫印跡技術(shù)的步驟，分為哪五大步？2023/08/08
免疫印跡（immunoblotting）又稱蛋白質(zhì)印跡（Westernblotting），是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。結(jié)合化學(xué)發(fā)光檢測，可以同時比較多個樣品同種蛋白的表達(dá)量差異?；静襟E：蛋白免疫印跡技術(shù)可以分為樣品制備、電泳、轉(zhuǎn)
胰蛋白胨國產(chǎn)與進(jìn)口的區(qū)別及特點(diǎn)2023/08/03
國產(chǎn)的的胰蛋白胨是以新鮮牛肉和牛骨經(jīng)胰酶消化，濃縮干燥而成的淺黃色粉末。具有色淺、易溶、透明、無沉淀等良好的物理性狀。含有豐富的氮源、氨基酸等，可配制各種微生物培養(yǎng)基，生化制品及微生物學(xué)科研等領(lǐng)域中。進(jìn)口的胰蛋白胨與國產(chǎn)的酪蛋白胨相同，也叫胰酪蛋白胨，都是采用酪蛋白為原料，經(jīng)過消化、脫色、過濾、濃縮、噴霧干燥而得到的一種淺黃色至類白色的干燥粉末。易溶于水，水溶液呈淡黃色。酪蛋白又稱干酪素是從牛奶中提取的一種營養(yǎng)價值很高的磷蛋白，是生產(chǎn)蛋白胨常用的原料。用此原料生產(chǎn)的蛋白胨，其氨基酸比較齊全，特別
如何用TRIzol提取RNA2023/08/01
試劑配制和準(zhǔn)備1.DEPC水或RNasefree水；2.75%乙醇（現(xiàn)配后預(yù)冷）：用無水乙醇和DEPC水配制（DEPC水：無水乙醇=1：3），然后放4℃?zhèn)溆谩?.5mLDEPC水+4.5mL無水乙醇；3.異丙/醇：棕色瓶；4.lv仿：棕色瓶；5.Trizol：存放于4℃。RNA抽提1.勻漿：在通風(fēng)櫥中往含有組織塊的EP管中加入TRIzol和磁珠（組織100mg+1mltrizol+2顆研磨珠）。2.研磨：設(shè)置研磨時間和頻率，一般卵巢組織為65HZ，120s；隨后可以繼續(xù)實(shí)驗或者凍存在-80℃。3
塑料離心管的特點(diǎn)2023/07/31
實(shí)驗室常用的離心管有塑料的和玻璃的，一般塑料的用的較多，因為玻璃的離心管不能用在高速或者超速離心機(jī)上。塑料的離心管有PP（聚丙烯）、PC(聚碳酸酯)，PE(聚乙烯)等材質(zhì)。PP的管子性能相對來說比較好。塑料離心管為透明或者半透明，可以直觀的看到樣品離心情況。接下來就介紹一下各種材質(zhì)塑料離心管的特點(diǎn)：PP（聚丙烯）：半透明，化學(xué)及溫度穩(wěn)定性較好，但是在低溫下會變脆，所以在離心時不要在4℃以下。PC(聚碳酸酯)：透明度較好，硬度大，可以高溫消毒，但不耐強(qiáng)酸強(qiáng)堿以及一些有機(jī)溶劑如酒精之類。主要用于5萬
ACK紅細(xì)胞裂解液的作用原理2023/07/28
紅細(xì)胞裂解液是一種去除紅細(xì)胞的方法，即用裂解液裂解紅細(xì)胞，它既不損傷有核細(xì)胞又能充分的去除紅細(xì)胞。裂解液裂解是一種比較溫和的紅細(xì)胞去除方法，主要用于經(jīng)酶消化分散的組織細(xì)胞的分離純化，淋巴細(xì)胞的分離純化以及組織細(xì)胞蛋白與核酸提取等實(shí)驗中紅細(xì)胞的去除。經(jīng)紅細(xì)胞裂解液裂解得到的組織細(xì)胞中不含紅細(xì)胞，可進(jìn)一步用于原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合、流式細(xì)胞分析、核酸與蛋白的分離和提取等。紅細(xì)胞裂解液的作用原理：細(xì)胞裂解液一般都使用含酶的，在血紅細(xì)胞表面上有紅細(xì)胞專屬的表面抗原，當(dāng)裂解液中可以攻擊特定紅細(xì)胞表面抗原的酶的
牛血清白蛋白（BSA）的應(yīng)用2023/07/27
牛血清白蛋白（BSA）是牛血清中的一種球蛋白，包含607個氨基酸殘基，分子量為66.446KDa，等電點(diǎn)為4.7。應(yīng)用：牛血清白蛋白（BSA）在生化實(shí)驗中有廣泛的應(yīng)用，例如在WB實(shí)驗中加入BSA，通過提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度，對酶起保護(hù)作用。防止酶的分解和非特異性吸附，能減輕有些酶的變性減輕不利環(huán)境因素，如加熱、表面張力及化學(xué)因素引起的變性。測定蛋白濃度按50：1配置BCA工作液。10ulC液（蛋白標(biāo)準(zhǔn)）+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)液。再分別以0、1、2、4、8、12、16、
二甲基亞砜的基本用途2023/07/26
二甲基亞砜（DMSO）是一種含硫有機(jī)化合物，分子式為C2H6OS，常溫下為無色無臭的透明液體，是一種吸濕性的可燃液體。氯化鉻，氯化/*等過渡金屬鹵化物與氯化/*，氯化鈉等鹵化物在DMSO中有一定溶解度，故可以應(yīng)用在有機(jī)電化學(xué)中。二甲基亞砜廣泛用作溶劑和反應(yīng)試劑，特別是丙烯腈聚合反應(yīng)中作加工溶劑和抽絲溶劑，作聚氨酯合成及抽絲溶劑，作聚酰胺，聚酰亞胺和聚砜樹脂的合成溶劑，以及芳烴、丁二烯抽提溶劑和合成氯氟苯胺的溶劑等。同時也可以用作乙炔、芳烴、二氧化硫及其他氣體的溶劑以及腈綸纖維紡絲溶劑。是一種即溶
冰凍切片的制作步驟以及每個步驟的要求和作用？2023/07/24
冰凍切片是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度，然后進(jìn)行切片的方法。因其制作過程較石蠟切片快捷、簡便，而多應(yīng)用于手術(shù)中的快速病理診斷。制備步驟:將組織在恒溫冷凍機(jī)里面切片。冷凍腔內(nèi)的溫度一般設(shè)置為-18℃至-25℃，根據(jù)不同組織調(diào)節(jié)不同腔溫，平時應(yīng)將冷凍頭放置在冷凍臺上。冷凍切片機(jī)應(yīng)長期處在冷凍恒溫狀態(tài)。1、當(dāng)冰凍組織提取好之后，在冷凍頭上放少量的OCT或羧田基纖維素(可用普通膠水代替)，放上組織，速凍。2、待組織凍結(jié)后，將冷凍頭裝刀切片機(jī)上。3、粗切，修出切面細(xì)切幾張，用毛筆刷去刀上組織片
如何挑選凍存管2023/07/21
材質(zhì)一般凍存管都是由無細(xì)胞毒性的材料制備的，實(shí)驗室常用的材質(zhì)有塑料和玻璃。但因為玻璃材質(zhì)的凍存管不能用在高速或者超速離心機(jī)上，所以塑料材質(zhì)的凍存管用的比較多。聚丙烯的化學(xué)和溫度穩(wěn)定性非常好，液氮的氣體狀態(tài)環(huán)境下，可耐低溫至零下187℃。除此之外，如果對樣品安全性要求比較高，可以選擇非致突變原料和無熱原的VID兼容管。并且注意使用前不要打開，如果已經(jīng)打開，那使用前一定一定要滅菌！構(gòu)成凍存管一般都由管帽、管體構(gòu)成，分為內(nèi)旋蓋和外旋蓋凍存管。如果樣本要液氮?dú)庀嘀斜４?，就用?nèi)旋凍存管，帶硅膠墊的；如果樣
擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)多條帶，原因是什么？2023/07/20
1)引物用量偏大，引物的特異性不高。應(yīng)調(diào)換引物或降低引物的使用量。2)循環(huán)的次數(shù)過多。適當(dāng)增加模板的量，減少循環(huán)次數(shù)。3)酶的用量偏高或酶的質(zhì)量不好。應(yīng)降低酶量或調(diào)換另一來源的酶。4)退火溫度偏低，退火及延伸時間偏長。應(yīng)提高退火溫度，減少變性與延伸時間，也可采用二種溫度的PCR擴(kuò)增。以2度為梯度設(shè)計梯度PCR反應(yīng)優(yōu)化退火溫度。5)樣品處理不當(dāng)。6)Mg2+濃度偏高。因適當(dāng)調(diào)整Mg2+使用濃度。7)若為PCR試劑盒。也可能時試劑盒本身質(zhì)量有問題。8)復(fù)制提前終止。使用非熱啟動的聚合酶時常有發(fā)生。冰
你真的了解胎牛血清嗎？2023/07/18
胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。胎牛血清是高的，因為胎牛還未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對細(xì)胞有害的成分最少。胎牛血清的功能：胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長必需的營養(yǎng)成份，常用于動物細(xì)胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。1.提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)
PCR實(shí)驗原理2023/07/14
原理：PCR利用DNA聚合酶的催化作用，在高溫下依次完成DNA的變性、引物結(jié)合和DNA合成等反應(yīng)，從而使DNA序列得到擴(kuò)增。PCR的核心是引物，其能夠與目標(biāo)DNA序列的特定區(qū)域互補(bǔ)配對，使得DNA聚合酶能夠選擇性地合成引物兩側(cè)的DNA分子，從而擴(kuò)增出目標(biāo)DNA序列。操作過程：1.DNA模板的制備：將目標(biāo)DNA提取出來，使其成為PCR反應(yīng)的模板。2.引物的設(shè)計：根據(jù)目標(biāo)DNA的序列設(shè)計引物，以便在PCR反應(yīng)中能夠引導(dǎo)DNA擴(kuò)增。3.PCR管中的混合溶液制備：將模板DNA、引物和PCR反應(yīng)所需的其他
酶活性測定常見方法2023/07/12
（1）定時法：（兩點(diǎn)法）通過測定酶反應(yīng)開始后某一時間段內(nèi)（t1到t2）產(chǎn)物或底物濃度的總變化量來求取酶反應(yīng)初速度的方法。其中t1往往取反應(yīng)開始的時間。酶與底物在一定溫度下作用一段固定的時間，通過加入強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、蛋白醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)整理沉淀劑等，使反應(yīng)停止（也叫中止反應(yīng)法）。加入試劑進(jìn)入化學(xué)反應(yīng)呈色測出底物和產(chǎn)物的變化。該法最基本的一點(diǎn)是停止反應(yīng)后才測定底物或物的變化。優(yōu)點(diǎn)：簡單易行，對試劑要求不高。缺點(diǎn)：難保證測定結(jié)果的真實(shí)性。難以確定反應(yīng)時間段酶促反應(yīng)是否處于線性期。隨著保溫時間的延續(xù)，酶變性失活加
胎牛血清的幾項技術(shù)指標(biāo)你知道嗎？2023/07/07
一、內(nèi)毒素內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁外壁層上的成分。當(dāng)細(xì)菌死亡自溶或粘附在其它細(xì)胞時，才表現(xiàn)其毒性。內(nèi)毒素直接參與細(xì)胞凋亡，血清中內(nèi)毒素含量越低，對細(xì)胞毒性越小，越利于細(xì)胞的生長和傳代；內(nèi)毒素含量過高，會直接導(dǎo)致細(xì)胞提前老化。國際上規(guī)定，胎牛血清的級別，應(yīng)以內(nèi)毒素水平的高低來確定，其中，特級胎牛血清的內(nèi)毒素應(yīng)二、血紅蛋白含量胎牛血清的顏色會根據(jù)血紅蛋白含量的不同表現(xiàn)出黃色、淡黃色、橘紅色、微紅色等。細(xì)胞培養(yǎng)用血清的標(biāo)準(zhǔn)是血紅蛋白含量不高于20mg/dl，顏色越紅，數(shù)值越高；反之，數(shù)值越低。實(shí)際
細(xì)胞實(shí)驗注意事項2023/07/06
1、細(xì)胞復(fù)蘇將細(xì)胞凍存管從干冰中取出，立即放置37°水浴速融1min，見無冰晶即可不再水?。ㄓ描囎幽萌。⒓?xì)胞凍存液加入10~15ml完培中，吹打混勻，減少DMSO對細(xì)胞毒性，800rpm離心5min棄上清，細(xì)胞沉淀進(jìn)行下一步傳代。2、細(xì)胞傳代試劑與材料（貼壁細(xì)胞）：細(xì)胞：4T1乳腺癌細(xì)胞；基礎(chǔ)培養(yǎng)基：1640培養(yǎng)基（含有生物素、維生素B12、對氨基苯甲酸PABA、高濃度的維生素肌醇和膽堿；不含有蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或生長因子）；血清：胎牛血清FBS（細(xì)胞營養(yǎng)液：提供基本營養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長因子
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