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2022
08-17

液相色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要
在日常分離分析工作中，液相色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，使用是否得當(dāng)，直接影響色譜柱的壽命，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱。（1）柱子在裝卸、更換時(shí)，動(dòng)作要輕，接頭擰緊要適度。必須防止較強(qiáng)的機(jī)械振動(dòng)，以免柱床產(chǎn)生空隙。（2）如果儀器用來做常規(guī)分析，樣品種類有限，但分析次數(shù)多，則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根柱，這樣有助于延長柱子的壽命。（3）避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充
2022
08-09

C18色譜柱的選用、保養(yǎng)與維修知識(shí)
一、C18柱的選用C18的選用主要考慮2個(gè)問題，即柱填料和柱規(guī)格對(duì)色譜柱的影響。1.1C18柱的填料對(duì)色譜柱的影響柱填料的物理性能對(duì)填料色譜行為有重要影響。填料主要的物理性能包括如下：顆粒度、孔徑、孔體積、鍵合相化學(xué)、含碳量及烷基化處理。(1)顆粒度是指柱填料的顆粒直徑的大小。實(shí)際上色譜柱上所標(biāo)的粒徑是一個(gè)平均值。如粒徑“5μm”并不是柱中填料所有的顆粒直徑都是5μm，實(shí)際上有一個(gè)顆粒分布度。這種分布度對(duì)柱反壓及柱效有重要作用。一般來說，平均顆粒度越小，顆粒分布度越小，色譜柱效越高，反壓亦越高。
2022
08-08

HPLC的常用數(shù)據(jù)處理方法
液相色譜儀的儀器本身是記錄樣品通過檢測(cè)器時(shí)，吸光度的變化而產(chǎn)生的電信號(hào)變化，從而產(chǎn)生色譜譜圖，后面的結(jié)果就要靠后期的色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。譜圖處理完即可制作校正曲線，校正曲線是數(shù)據(jù)處理的重點(diǎn)，是將標(biāo)樣譜圖的信息與數(shù)據(jù)做成一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，供處理試樣譜圖使用。校正是通過分析準(zhǔn)備好的標(biāo)準(zhǔn)樣品，來確定計(jì)算組分濃度的響應(yīng)因子的過程。接下來介紹常用的數(shù)據(jù)處理方法：外標(biāo)法外標(biāo)法是指添加一定量的標(biāo)準(zhǔn)品于空白樣品中制成對(duì)照樣品，與未知檢測(cè)樣品平行進(jìn)行樣品處理并檢測(cè)，根據(jù)對(duì)照品響應(yīng)值與標(biāo)準(zhǔn)品的濃度函數(shù)關(guān)系計(jì)算出未知檢測(cè)樣品中
2022
08-05

HPLC色譜柱為什么比GC色譜柱短？
HPLC和GC是已在化學(xué)實(shí)驗(yàn)室中站穩(wěn)腳跟的分離技術(shù)。這兩種技術(shù)的基本目的是分離和量化有機(jī)混合物的成分。您有沒有想過為什么HPLC色譜柱比GC色譜柱更短更寬。在回答這個(gè)問題之前，您應(yīng)該了解柱長度的好處。一、柱長：隨著液相色譜柱長度的增加，洗脫化合物和固定相之間的相互作用時(shí)間也會(huì)增加，從而提高色譜柱效率和分離度。這導(dǎo)致分離良好的峰。然而，由于柱頭壓力增加和分析時(shí)間增加而面臨的實(shí)際問題，不能無限增加柱長。HPLC色譜柱的尺寸要求取決于分離目標(biāo)。通常的分析應(yīng)用要求色譜柱長度為15–25cm，內(nèi)徑為4.6
2022
07-29

液相色譜中的過濾器和過濾作用
以“清潔”流動(dòng)相將樣品輸送至液相分析柱對(duì)于穩(wěn)健的方法和高質(zhì)量的結(jié)果非常重要。過濾器與高效液相色譜(HPLC)儀器的正確、可靠運(yùn)行有關(guān)。過濾器和過濾的主題在LC中非常重要，因?yàn)槿绻鲃?dòng)相流路中存在微粒，LC系統(tǒng)中的許多組件很容易過早失效。例如，從溶劑瓶中抽出的流動(dòng)相中的灰塵或其他顆粒會(huì)導(dǎo)致泵止回閥部分失效（它們會(huì)泄漏）或*失效（泵根本不產(chǎn)生流量）。故障模式可能是進(jìn)樣樣品中的顆粒物或儀器組件在色譜柱入口處積聚，從而導(dǎo)致色譜柱堵塞。一、保護(hù)泵：從LC泵的角度來看，理想的溶劑絕對(duì)不含顆粒物。微粒會(huì)干擾止
2022
07-26

高效液相色譜法提取和純化應(yīng)用
高效液相色譜法是提取和純化甜味劑的可靠技術(shù)。在食品工業(yè)中被廣泛應(yīng)用；食品糖的甜味與蔗糖相似，熱量只有三分之二。這種五碳糖存在于許多植物中，但大多濃度較低（約1%），因此提取和純化成本很高。因此，迄今為止，食品糖主要通過化學(xué)方法生產(chǎn)，使用催化木糖脫氫。一、在木糖轉(zhuǎn)化中引入HPLC一種有吸引力的替代方法是通過發(fā)酵將生物質(zhì)（例如麥秸）中的木糖轉(zhuǎn)化為食品糖。通過該工藝，甜味劑可以在溫和條件（大氣壓和環(huán)境溫度）下以高產(chǎn)率生產(chǎn)，不含有害化學(xué)物質(zhì)。一旦微生物合成了所需的糖醇，就可以通過高效液相色譜（HPLC）
2022
07-23

使用HPLC純化綠茶中的多酚
綠茶被廣泛認(rèn)為是地球上最健康的飲料之一?？v觀歷史，綠茶一直被用作治療多種疾病的民間療法，今天它繼續(xù)被提倡作為補(bǔ)充和替代藥物，雖然它一直備受爭議?，F(xiàn)代研究并沒有消除這些長期存在的假設(shè)，而是讓人們相信綠茶相關(guān)的健康益處。綠茶的藥用特性源自茶樹種，廣泛歸因于該植物的高酚含量。使用高效液相色譜法(HPLC)進(jìn)行的研究發(fā)現(xiàn)，在干葉和芽中含有豐富的多酚，這些天然植物化合物構(gòu)成了一系列代謝組（兒茶素、類黃酮、單寧等），但廣泛的HPLC分析突出了一種代謝物，特別是在涉及綠茶對(duì)人類健康益處的問題時(shí)。一、用HPLC
2022
07-21

高效液相色譜儀的主要性能指標(biāo)
高效液相色譜儀(HPLC)是應(yīng)用高效液相色譜原理，主要用于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定的和分子量大的有機(jī)化合物的儀器設(shè)備。它由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄
2022
07-16

液相保護(hù)柱的作用
任何HPLC或UHPLC柱都是有試用壽命的。正確使用和維護(hù)色譜柱可以延長其使用壽命，有利于該方法的經(jīng)濟(jì)性。重要的是遵循*的色譜慣例，如適當(dāng)?shù)臉悠分苽洌悠窇?yīng)通過0.45µm的膜過濾器進(jìn)行高效液相色譜過濾，通過0.22µm的過濾器進(jìn)行超高效液相色譜過濾）；流動(dòng)相的適當(dāng)質(zhì)量/純度（例如，用于等度模式的等度級(jí)溶劑，用于梯度洗脫的梯度級(jí)溶劑）；過濾流動(dòng)相，發(fā)展良好的方法，具有足夠強(qiáng)的洗脫能力，以盡量減少非特定的吸附；與所選色譜柱兼容的溫度、pH值和最大背壓范圍。另外值得一提的是，總進(jìn)樣次數(shù)與進(jìn)樣體積成反
2022
07-13

氨基柱的反相使用
先用正己烷-乙腈(99：1)以0.5ml/min的流速?zèng)_10倍柱體積，再依次以相同的流速相同的用量用氯仿、異丙醇、甲醇、甲醇-水(50：50)沖柱子。以0.5ml/min的流速用30倍柱體積的pH11.0的氫氧化鈉(LUNA)水溶液沖柱子(注意pH值切不可超過11.0)，立即用水(0.5ml/min的流速，30倍柱體積)沖洗，再換成流動(dòng)相。配制流動(dòng)相時(shí)，應(yīng)各組分分別量取，比例較小的組分要精密量取，需調(diào)pH值時(shí)要精密到0.1。反相條件下使用時(shí)，要特別注意控制pH值范圍，pH值越低越有發(fā)生水解的危險(xiǎn)
2022
07-11

液相色譜工作流程
無論正在利用何種相互作用，液相柱色譜法都分六個(gè)步驟進(jìn)行：柱平衡樣品裝載洗滌洗脫清洗色譜柱再生一、柱平衡：大多數(shù)液相色譜方案從樹脂平衡步驟開始。與目標(biāo)蛋白質(zhì)和所選樹脂相容的緩沖液通過柱子。一種常見的做法是用5-10柱體積(CV)的平衡緩沖液平衡柱。例如，蛋白質(zhì)與疏水相互作用樹脂的結(jié)合在高離子強(qiáng)度下有效。在選擇平衡緩沖液時(shí)也要考慮目標(biāo)蛋白質(zhì)的特性，因?yàn)殡x子強(qiáng)度等緩沖液因素會(huì)受到蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的限制；通常，人們會(huì)避免使用會(huì)使感興趣的蛋白質(zhì)變性或阻止其與固定相相互作用的平衡緩沖條件。二、樣品加載：平衡后，
2022
07-11

梯度洗脫后的色譜柱重新平衡的時(shí)間
許多用戶對(duì)溶劑梯度洗脫分離后LC色譜柱應(yīng)該重新平衡多長時(shí)間有疑問。在這里，我們展示了對(duì)于反相和HILIC分離而言，再平衡周期短的令人滿意的結(jié)果。LC用戶通常會(huì)提出和討論關(guān)于在溶劑梯度洗脫分離后重新平衡LC色譜柱多長時(shí)間的問題。在本文中，我們根據(jù)最近對(duì)該主題的研究討論了細(xì)節(jié)，并表明即使對(duì)于HILIC分離，在兩個(gè)柱體積數(shù)量級(jí)的短再平衡周期內(nèi)也可以獲得令人滿意的結(jié)果。一、核心概念在溶劑梯度洗脫模式下使用LC時(shí)，必須有一段時(shí)間，通常是在分析結(jié)束時(shí)，在溶劑梯度的第一部分中使用的流動(dòng)相流過LC色譜柱，為色譜
2022
07-06

高效液相色譜儀器的組成
HPLC色譜儀器可以是一組單獨(dú)的模塊或元件，但也可以設(shè)計(jì)為單個(gè)裝置。模塊概念在單個(gè)組件失效的情況下更加靈活；此外，系統(tǒng)各個(gè)零件不必來自同一制造商。如果您不喜歡自己進(jìn)行小修，您會(huì)更喜歡緊湊型儀器。然而，這并不需要比模塊化套件更少的工作臺(tái)空間。一臺(tái)HPLC儀器至少具有溶劑罐、帶篩板的傳輸線、高壓泵、進(jìn)樣裝置、色譜柱、檢測(cè)器組成部分。一、高效液相色譜儀HPLC儀器通常由九個(gè)基本組件組成：流動(dòng)相/溶劑容器、溶劑輸送系統(tǒng)、樣品引入裝置、色譜柱、柱后裝置、檢測(cè)器、數(shù)據(jù)收集和輸出系統(tǒng)、檢測(cè)器后洗脫液處理以及連
2022
07-04

保持液相色譜柱柱溫有助于準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性
溫度的變化會(huì)對(duì)色譜分析方法的重現(xiàn)性和色譜柱的壽命產(chǎn)生重大影響。但為什么會(huì)這樣？恒譜生在以下的內(nèi)容將會(huì)為您介紹。一、再現(xiàn)性隨著溫度的變化，液相色譜柱內(nèi)固定相和流動(dòng)相之間的熱力學(xué)會(huì)受到直接影響。在不同溫度下運(yùn)行方法可能會(huì)影響分析物容量因子(k)或分析物在色譜柱上的保留時(shí)間。在升高的溫度下，流動(dòng)相和分析物的動(dòng)能都會(huì)增加。分析物動(dòng)能的增加將導(dǎo)致它們更強(qiáng)烈地移動(dòng)和振動(dòng)，并將破壞分子間結(jié)合，即分析物和固定相之間的分離和保留機(jī)制。很多時(shí)候，這會(huì)導(dǎo)致所有分析物更快地從液相色譜柱中流出，從而縮短保留時(shí)間。通常，這
2022
06-29

hplc溶劑進(jìn)樣口過濾器過濾流動(dòng)相的重要性
緩沖液是一種含有弱酸及其共軛堿（或弱堿及其共軛酸）的水溶液。加入少量強(qiáng)酸或強(qiáng)堿后，緩沖溶液的pH值變化很小，當(dāng)小的環(huán)境因素發(fā)生變化時(shí)，有助于抵消分析方法中的條件變化。緩沖溶液用于將pH值保持在幾乎恒定的值。由于這種弱酸(HA)與其共軛堿之間存在平衡，它們對(duì)pH變化具有抵抗力。一、hplc緩沖液的工作原理當(dāng)一些強(qiáng)酸（更多的H+）被添加到弱酸及其共軛堿的平衡混合物中時(shí)，根據(jù)LeChatelier原理，平衡向左移動(dòng)。類似地，如果將強(qiáng)堿添加到混合物中，則氫離子濃度降低的量小于所添加堿量的預(yù)期量。在準(zhǔn)備緩
2022
06-23

氨基柱如何正向使用？
.氨基柱既可以正相使用，也可以反相使用，但是要注意到的是：正相溶劑和反相溶劑往往是不互溶的，正常情況新氨基柱保存在正相環(huán)境中，例如LUNA氨基柱保存在正己烷-乙腈(99：1)中。正相使用新柱子可直接用流動(dòng)相。推薦先用正己烷-乙腈(99：1)以0.5ml/min的流速?zèng)_10倍柱體積，再根據(jù)流動(dòng)相選用極性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速?zèng)_10倍柱體積，最后換成流動(dòng)相。正相使用時(shí)，不宜分析含醛基、羰基的化合物，不可用于還原糖的分析;流動(dòng)相要*脫氣，并不得含有羰基化合物和過氧化物(質(zhì)量不好的yi醚、四氫
2022
06-22

哪些因素會(huì)影響高效液相色譜柱的使用？
高效液相色譜柱是高效液相色譜的心臟，在高效液相色譜儀的使用中，保持色譜柱的柱效、容量和滲透特性，延長柱子的使用壽命非常重要。色譜柱使用時(shí)間后就會(huì)出現(xiàn)柱壓升高、柱效降低、峰形畸變和分離度降低、保留時(shí)間改變等變化，如不采取措施，將會(huì)縮短色譜柱的使用壽命，影響工作效率，并造成一定的經(jīng)濟(jì)損失。因此，有必要加強(qiáng)和規(guī)范色譜柱的管理，從而延長色譜柱的使用壽命。本文從影響色譜柱使用壽命的幾個(gè)因素出發(fā)，從管理的角度，探討色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng)。影響高效液相色譜柱使用壽命的因素1.流動(dòng)相在以水溶液為流動(dòng)相時(shí)，水溶液中的
2022
06-20

反相色譜柱在使用緩沖液中需要注意些什么？
反相色譜柱為色譜柱提供方便、經(jīng)濟(jì)和有效的保護(hù)，延長了色譜柱的壽命，分析結(jié)果的重現(xiàn)性。隨著使用時(shí)間的增加，高效液相色譜柱分離效能下降，柱壓增高，其原因主要是由于色譜柱進(jìn)口段的少量填料被污染引起的，而色譜柱整個(gè)柱床并未被破壞，使用保護(hù)柱，相當(dāng)于在色譜柱前增加了一段額外的填料，起到了保護(hù)整個(gè)色譜柱的作用。反相色譜柱特點(diǎn)：采用高度可控的單分子層形成和封尾技術(shù)；高的柱間重現(xiàn)性；高的選擇性和分離效率；適合分離酸性、中性和堿性化合物，以及許多藥物和多肽等。反相色譜柱在使用緩沖液的過程中還要注意以下幾點(diǎn)：1.避
2022
06-14

深入了解液相色譜柱小型化
雖然質(zhì)譜聯(lián)用液相色譜已被證明是發(fā)現(xiàn)組學(xué)（蛋白質(zhì)組學(xué)、脂質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)、食物組學(xué)和糖組學(xué)）領(lǐng)域的強(qiáng)大工具。組學(xué)研究經(jīng)常受到樣本復(fù)雜性的挑戰(zhàn)。在處理少量樣品、小體積和復(fù)雜的樣品基質(zhì)（生物流體和單細(xì)胞分析）時(shí)，對(duì)感興趣的分子進(jìn)行識(shí)別和量化可能特別困難。液相色譜柱小型化可以克服這些挑戰(zhàn)。減小色譜柱內(nèi)徑(ID)會(huì)降低色譜稀釋度并提高靈敏度，從而實(shí)現(xiàn)更高效的MS/MS采樣，從而實(shí)現(xiàn)更多的分子鑒定。當(dāng)樣品量被注入色譜柱并被周圍的溶劑稀釋時(shí)，就會(huì)發(fā)生這種稀釋。在這種情況下，更少的溶劑意味著更少的色譜稀釋，這是
2022
06-10

液相色譜的基礎(chǔ)知識(shí)
液相色譜作為常用的色譜被廣泛應(yīng)用于生物、化學(xué)、食品分析等領(lǐng)域，hplc的種類有哪些？恒譜生帶你了解！一、液相色譜的種類1、吸附色譜以硅膠或氧化鋁為固定相。分子與硅膠之間的弱相互作用鍵稱為吸附，鍵的溶解解吸。由于洗脫液分子先于樣品分子占據(jù)硅膠的活性位點(diǎn)，因此樣品分子只有在與活性位點(diǎn)的相互作用強(qiáng)于洗脫液分子時(shí)才能被吸附。樣品分子通過偶極-偶極相互作用可逆地結(jié)合到固定相。固定相對(duì)物質(zhì)的保留時(shí)間取決于與固定相表面相互作用的程度不同。這是分離樣品成分的機(jī)制。2、親和層析使用物質(zhì)相互反應(yīng)的趨勢(shì)作為一種色譜方

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