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BD流式細(xì)胞術(shù)臨床應(yīng)用研究-腫瘤科2021/10/31: 人體內(nèi)每天都會產(chǎn)生大量突變細(xì)胞，但由于機(jī)體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視作用，只有少數(shù)會發(fā)展成為腫瘤細(xì)胞。正常情況下，免疫系統(tǒng)可識別并消滅新抗原的異己成分或突變細(xì)胞來維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。但當(dāng)機(jī)體免疫功能低下時，這一穩(wěn)定就會被打破，從而發(fā)生腫瘤。據(jù)2012年中國衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)年鑒統(tǒng)計(jì)，中國死亡率排ming前shi的惡性腫瘤是肺癌，肝癌，胃癌，食管癌，結(jié)直腸癌，白血病，腦瘤，乳腺癌，胰腺癌和骨癌。其中，肺癌發(fā)病率已高達(dá)61.4/10萬，每年約有40萬人被確診患有肺癌，其死亡率排在首wei。預(yù)計(jì)到2025年，我國肺癌病人數(shù)將達(dá)

流式的絕對計(jì)數(shù)2021/10/31: 流式絕對計(jì)數(shù)的方法主要是采用商品化的絕對計(jì)數(shù)管，管里含有已知數(shù)量的熒光標(biāo)記的易于與細(xì)胞區(qū)分的熒光微球。利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞絕對計(jì)數(shù)的方法既快速又準(zhǔn)確,自動化程度高,簡而言之,每種樣品取相同體積的兩份,分別加入檢測試劑和對照試劑,室溫避光下溫育15分鐘,加入紅細(xì)胞裂解液,再溫育30分鐘,即可用流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測.在樣品管中還加有已知數(shù)量的熒光標(biāo)記的易于與細(xì)胞區(qū)分的熒光微球(絕對計(jì)數(shù)管)作為絕對計(jì)數(shù)的內(nèi)標(biāo),根據(jù)所采集到的干細(xì)胞數(shù)與熒光微球數(shù)目的比值,再乘以樣品管中的熒光微球數(shù),即為樣品管中干細(xì)胞的

醫(yī)院常用流式檢驗(yàn)項(xiàng)目2021/10/31: 醫(yī)院常用流式檢驗(yàn)項(xiàng)目項(xiàng)目名稱單抗組合檢測意義淋巴細(xì)胞亞群（T/B/NK）T細(xì)胞亞群(CD3/CD4/CD8)T、B淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞在各種臨床疾病，如自體免疫性疾病、免疫缺陷、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、自身免疫性溶血性貧血、再生障礙性貧血、病毒感染疾病、惡性腫瘤、免疫治療等中均會發(fā)生異常改變。這些指標(biāo)的檢測對監(jiān)測機(jī)體的免疫功能、控制上述疾病的發(fā)生和發(fā)展、了解疾病的機(jī)制、指導(dǎo)臨床治療具有極其重要的意義。CD19+B細(xì)胞減少，體液免疫抑制；免疫缺陷時CD4+、CD8+T減少；部分病毒時，CD8+T增多；進(jìn)

多色流式之BD流式—機(jī)器試劑一站式解決方案2021/10/30: 多色流式實(shí)驗(yàn)的意義流式多色實(shí)驗(yàn)幫助研究者得到更精細(xì)的細(xì)胞分群和更精準(zhǔn)的細(xì)胞特性分析。鑒于多色流式在科研中應(yīng)用越來越廣泛，多色流式實(shí)驗(yàn)結(jié)果和機(jī)器的直接相關(guān)性和緊密性，我們必須充分了解流式細(xì)胞儀，根據(jù)流式細(xì)胞儀的性能參數(shù)，試劑特性，抗原表達(dá)特點(diǎn)，來設(shè)計(jì)符合實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡?流式實(shí)驗(yàn)方案，提高流式數(shù)據(jù)可靠性與準(zhǔn)確性。BD流式細(xì)胞儀BDFACSCanto™3激光10色BDLSRFortessa™X-205激光18色BDFACSVerse™3激光8色三角和八角檢測器1、機(jī)器試劑一站式解決方案第一步：充分了解流式

細(xì)胞死亡&細(xì)胞功能：細(xì)胞死亡總介紹2021/10/30: 細(xì)胞死亡是一個基本的生物過程，活細(xì)胞的死亡有多重形式。程序性細(xì)胞死亡(Programmedcelldeath,PCD)是多細(xì)胞生物中，由基因調(diào)控的細(xì)胞自sha過程，對多細(xì)胞生物的發(fā)育、體內(nèi)穩(wěn)態(tài)和完整性至關(guān)重要。PCD的研究涉及多個領(lǐng)域，如免疫、神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、癌癥、感染等。常見的PCD有細(xì)胞凋亡(Apoptosis)、自噬(Autophagy)和焦亡(Pyroptosis)，以及近年發(fā)現(xiàn)的鐵死亡(Ferroptosis)。一、不同形式的死亡、關(guān)鍵分子蛋白、形態(tài)變化二、不同形式細(xì)胞死亡的形態(tài)變化（細(xì)

不是所有品牌都能做到多色流式-BD Pharmingen2021/10/30: 名稱最大激發(fā)波長最大發(fā)射波長laser濾光片355nm激光BUV395348395355nm379/25BUV496348496355nm515/30BUV563348563355nm585/15BUV661348661355nm670/25BUV737348737355nm740/35BUV805348805355nm820/60405nm激光BV421407421405nm450/40BV480439478405nm525/50BV510405510405nm525/50BV60540760

細(xì)胞死活鑒定染料BD Horizon2021/10/30: 細(xì)胞死活鑒定染料BDHorizonTMFixableViabilityStain(FVS)Reagents為什么要鑒定細(xì)胞死活？?死細(xì)胞非特異性染色使細(xì)胞背景增高，影響檢測靈敏度?鑒定細(xì)胞生命活性?死細(xì)胞假陽性染色結(jié)果影響真實(shí)驗(yàn)結(jié)果比例與傳統(tǒng)染料PI、7-AAD相比優(yōu)勢？適用于胞內(nèi)染色的死活細(xì)胞鑒定FixableViabilityStain適用于需要固定、破膜、洗滌、染色處理的細(xì)胞死活檢測，而PI、7-AAD檢測細(xì)胞死活的染色過程是在其他抗體孵育完成后進(jìn)行，不能洗滌即要上機(jī)檢測；胞內(nèi)蛋白染色，經(jīng)

真空采血的先后順序你都知道嗎2021/10/29: 采血管多為普通玻璃管和塑料管。普通玻璃管由于pH值較大，容易引起溶血，而拉管工藝制作的玻璃試管線性溝密布，深淺粗細(xì)無常導(dǎo)致細(xì)胞掛壁。塑料真空采血管使用PET塑料，PET塑料管具有：質(zhì)量輕，便于運(yùn)輸；管壁破損機(jī)率極小，標(biāo)本在運(yùn)輸，離心及試驗(yàn)過程發(fā)生泄漏的可能性極?。皇褂煤罂芍苯痈邏簻缇蚍贌N毀等優(yōu)點(diǎn)。好的試管管內(nèi)壁在注塑時經(jīng)過特殊的處理，能有效降低血細(xì)胞與管壁的粘合度，減少纖維蛋白絲的產(chǎn)生。規(guī)范抽血順序目的是為了保證標(biāo)本采集質(zhì)量，減少不同試管間的相互影響。建議真空采血管采血順序如下：1.采血針采

流式細(xì)胞術(shù)分析血小板2021/10/28: 血栓性疾病、出血性疾病、心血管疾病以及自身免疫性血小板減少癥等疾病的病生理過程與血小板相關(guān)。血小板功能檢測包括黏附、聚集和活化功能試驗(yàn)。使用流式細(xì)胞儀檢測全血中血小板表面相關(guān)標(biāo)志物是一種新技術(shù)，它拓寬了血小板相關(guān)疾病的診斷與功能研究方法，豐富了血小板功能評估指標(biāo)。一、liu式細(xì)胞儀血小板分析應(yīng)用范圍1、通過分析信號傳遞、細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)、顆粒釋放、糖蛋白構(gòu)形、膜磷脂、與抗凝因子的結(jié)合和微粒形成，分析血小板活化，血小板對刺激物的反應(yīng)性。2、通過分析受激后表面結(jié)合蛋白觸發(fā)凝血鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和表面糖蛋白缺陷檢測

流式細(xì)胞儀檢測外周血樹突狀細(xì)胞2021/10/28: 概述樹突狀細(xì)胞（DC）的主要功能是吸收抗原，進(jìn)行加工，并向T淋巴細(xì)胞呈遞。其它抗原呈遞細(xì)胞也有此功能，如B淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。但是，與其它細(xì)胞不同的是，DC細(xì)胞具有誘導(dǎo)初發(fā)免疫反應(yīng)的*功能，例如，可以活化處女T細(xì)胞（NaiveTcell）。DC細(xì)胞存在于外周淋巴組織中，已在血液和非淋巴器官中發(fā)現(xiàn)了不同類型的DC細(xì)胞，并被認(rèn)為是淋巴組織中細(xì)胞的前體。由于血液和組織中DC細(xì)胞含量少，且缺乏特異的DC標(biāo)記物，所以DC細(xì)胞的研究非常困難。因此，關(guān)于DC細(xì)胞的了解主要來自于通過密度梯度離心、培養(yǎng)、和/或陰

從外周血淋巴細(xì)胞中提取RNA2021/10/28: 實(shí)驗(yàn)試劑1.Ficoll(AmershamBiosciences)2.冰冷磷酸鹽緩沖液(PBS)，pH7.43.裂解緩沖液：5mol/L單巰基氰酸胍，10mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA)，50mmol/LTris—HCl，1mmol/L二硫蘇糖醇(DTT)，用0.45微孔濾膜過濾4.4mol/L和3mol/L氯化鋰，高壓滅菌5.RNA溶解緩沖液：0．1%SDS，lmmol/LEDTA，10mmol/LTris—HCl，pH7．5，高壓滅菌6.3mol/L乙酸鈉，pH4．8，焦碳酸二乙酯(DE

外周血的簡便提取方法2021/10/28: 從外周血提取DNA是一個經(jīng)常遇到的問題，當(dāng)然可以用試劑盒提取，不過代價還是有點(diǎn)大，并且不方便，定試劑總要等上幾天，如果血液標(biāo)本不稀缺資源，不妨用一些簡便方法提取。方法一(1)取抗凝血5ml在沉淀中加入15mlPBS，混勻，離心2000r/min10min。(2)將血漿轉(zhuǎn)至新的試管中，-70℃保存。(3)將血細(xì)胞轉(zhuǎn)入另一支試管中(10ml或50ml)加入盡可能多的冷的蒸餾水混勻。(4)將其插入冰內(nèi)5～10min或放入-20℃15min。(5)將上述混合液從冰中或-20℃取出放至室溫，離心2000r

人外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)2021/10/28: 在正常情況下，人外周血中是沒有分裂相的，只有在異常情況下才能發(fā)現(xiàn)。植物血球凝集素（PHA）是人類淋巴細(xì)胞有絲分裂的刺激劑，在PHA作用下，原處于Go期的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，進(jìn)而進(jìn)行有絲分裂。利用PHA這一特性，淋巴細(xì)胞經(jīng)過含有HPA培養(yǎng)液培養(yǎng)，在體外便可獲得豐富的含有絲分裂的生長活躍的細(xì)胞群體，終止分裂中期的淋巴細(xì)胞，例可得到所需的人體染色體圖形。具有用血量少、操作簡單等優(yōu)點(diǎn)。1、實(shí)驗(yàn)材料2.5%碘酒、75%酒精、無菌棉簽或棉球、鑷子、吸管、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)液（PRMI1640、M199）、小

外周血培養(yǎng)基配制2021/10/26: 一、配制用水培養(yǎng)基的大部分是水，所以水的質(zhì)量直接影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。按Waymouth標(biāo)準(zhǔn)，水的電阻應(yīng)為200萬歐姆，一般實(shí)驗(yàn)室里以玻璃蒸餾器制備的雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。二、培養(yǎng)基培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實(shí)驗(yàn)室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基，以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）調(diào)pH至7.2～7.4，若pH值超過7.6或遠(yuǎn)低于6.8，則大多數(shù)細(xì)胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌，使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過處理。三、血清培養(yǎng)中常使用小牛血清（或胎牛血清

人類外周血染色體制備2021/10/26: 一、原理人外周血小淋巴細(xì)胞，通常都處在G1期（或G0期），一般情況下不進(jìn)行分裂。如在培養(yǎng)液中加入植物血凝素（PHA），這種小淋巴細(xì)胞受到刺激可轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，進(jìn)入有絲分裂。短期培養(yǎng)后，經(jīng)秋水仙素處理，低滲和固定，即可得到大量的有絲分裂細(xì)胞。人體的1ml外周血內(nèi)一般含有約1×106~3×106個小淋巴細(xì)胞，足夠染色體標(biāo)本制備和分析之用。二、用品和試劑1.5ml注射器（7號針尖），培養(yǎng)瓶、刻度吸管，需15磅滅菌20分鐘。離心管、吸管、量筒、載玻片，經(jīng)洗液按常規(guī)清洗、烘干備用。2.超凈工作臺，恒溫培

2100 生物分析儀系統(tǒng) 了解如何更換注射器、接頭和墊片2021/10/26: 2100生物分析儀系統(tǒng)是用于生物分子樣品質(zhì)量控制的成熟的自動化電泳工具。2100生物分析儀與2100Expert軟件和生物分析儀分析配套使用，可對新一代測序(NGS)、基因表達(dá)、生物制藥和基因編輯研究等多種工作流程中的各樣品類型進(jìn)行高精度分析評估。系統(tǒng)可及時提供數(shù)字化數(shù)據(jù)，對DNA、RNA和蛋白質(zhì)的分子量、定量、完整性和純度進(jìn)行客觀的評價。獲得準(zhǔn)確結(jié)果只需極少量的樣品，數(shù)據(jù)可以多種不同的格式導(dǎo)出，便于使用?？筛鼡Q電極卡夾有利于方法間的無污染切換系統(tǒng)可大程度減少與有害物質(zhì)的接觸，確保操作人員的安全

Agilent 2100 生物分析儀系統(tǒng)如何準(zhǔn)備 DNA 芯片2021/10/26: 2100生物分析儀系統(tǒng)是用于生物分子樣品質(zhì)量控制的成熟的自動化電泳工具。2100生物分析儀與2100Expert軟件和生物分析儀分析配套使用，可對新一代測序(NGS)、基因表達(dá)、生物制藥和基因編輯研究等多種工作流程中的各樣品類型進(jìn)行高精度分析評估。系統(tǒng)可及時提供數(shù)字化數(shù)據(jù)，對DNA、RNA和蛋白質(zhì)的分子量、定量、完整性和純度進(jìn)行客觀的評價。獲得準(zhǔn)確結(jié)果只需極少量的樣品，數(shù)據(jù)可以多種不同的格式導(dǎo)出，便于使用?？筛鼡Q電極卡夾有利于方法間的無污染切換系統(tǒng)可大程度減少與有害物質(zhì)的接觸，確保操作人員的安全

動脈、靜脈和末梢血血常規(guī)檢測2021/10/25: 【摘要】目的比較動脈、靜脈和末梢血血常規(guī)的檢測結(jié)果，并探討靜脈采血后放置不同時間對檢測結(jié)果的影響，為血常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)化操作提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法選取健康志愿者40名，每人采取動脈、靜脈和末梢血各1份，采用Back-man-Counter全自動血球計(jì)數(shù)儀檢測血常規(guī)，然后將標(biāo)本分別于室溫放置5min、20min、30min、1h、12h和24h后重新測定，檢測結(jié)果采用t檢驗(yàn)分析。結(jié)果動脈和靜脈血的血常規(guī)檢測結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與末梢血結(jié)果之間差異具有顯著性（P結(jié)論動脈和靜脈的血常規(guī)檢測結(jié)果較末梢血能準(zhǔn)確反

PCR定量技術(shù)--PCR　ELISA2021/10/25: PCR自誕生以來，人們就在努力探索PCR定量的方法。熒光素染色凝膠電泳在PCR最初的一段時間是唯yi的檢測技術(shù)，因此人們在凝膠電泳的基礎(chǔ)上使用掃描照片進(jìn)行光密度分析，以求實(shí)現(xiàn)PCR的相對定量。但是由于普通凝膠電泳檢測本身的不特異性，只能進(jìn)行粗略的相對定量，難以滿足人們?nèi)找鎸_定量的渴望，不過由于普通凝膠電泳光密度分析簡捷易行，成本低，目前還是科研還很常用。但是難以滿足臨床應(yīng)用的要求。由于固相捕獲技術(shù)的成熟和應(yīng)用，特別是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）的成功，給核酸定量提供了一個思路。此后，應(yīng)用固

Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)總結(jié)2021/10/25: 1．Transwell腫瘤細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)過程與Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)基本一致，不同的只是不需要鋪Matrigel。個人認(rèn)為，由于沒有基質(zhì)膠的阻擋，細(xì)胞穿過膜的速度較侵襲實(shí)驗(yàn)明顯加快，所以細(xì)胞量要更大。我做侵襲實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞密度是1×105，而遷移實(shí)驗(yàn)的密度是1×106。另外，下層培養(yǎng)液的FBS濃度也可適當(dāng)下調(diào)，我做侵襲實(shí)驗(yàn)的濃度是5%，遷移實(shí)驗(yàn)的濃度是2.5%。2．Transwell上皮細(xì)胞培養(yǎng)步驟做了一段時間的原代細(xì)胞培養(yǎng)，把經(jīng)驗(yàn)?zāi)贸鰜砀蠹曳窒硪幌掳?，請有關(guān)戰(zhàn)友共同探討：(1).將雄性wist

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