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細(xì)胞增殖分析（CCK-8 法）2022/09/19: CellCountingKit-8（簡(jiǎn)稱CCK-8）試劑可用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。CCK-8&MTT方法比較方法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)CCK-8法靈敏度高、不使用有機(jī)溶劑、檢測(cè)迅速、重復(fù)性好價(jià)格較MTT貴、CCK8試劑的顏色為淡紅色、與含酚紅的培養(yǎng)基顏色接近，容易漏加或多加MTT法價(jià)格便宜操作步驟較多，需要使用有機(jī)試劑，靈敏度不如CCK-8，多數(shù)需要配制，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，細(xì)胞毒性較高一、原理：CCK-8是MTT的升級(jí)產(chǎn)品，其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-

從肝臟組織中制備細(xì)胞核2022/09/15: 一、材料與儀器：大鼠、裂解緩沖液、濃蔗糖溶液、超速離心機(jī)、組織研磨器二、實(shí)驗(yàn)步驟：1.配制裂解緩沖液和濃蔗糖溶液（PMSF在使用前添加），冰上放置。裂解緩沖液:①0.25mol/L蔗糖網(wǎng)織紅細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)緩沖液（RSB）②0.25mol/L蔗糖（超級(jí)純）③10mmol/Tris-HCl(pH7.4)④10mmol/LNaCl⑤3mmol/LMgCl2⑥1mmol/LDTT⑦0.5mmol/LPMSF(用前從溶于乙醇的100mmol/L貯存液中添加）濃蔗糖溶液:①2mol/L蔗糖RSB②2mol/L蔗糖

從哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織分離DNA2022/09/09: 材料與儀器：細(xì)胞、TBS抽提緩沖液、離心管實(shí)驗(yàn)步驟：步驟1：根據(jù)樣品類型，從下列方法中選一個(gè)作為步驟1進(jìn)行操作。(1)細(xì)胞樣品①單層培養(yǎng)的細(xì)胞以用冰預(yù)冷的TBS將單層細(xì)胞洗滌2次，用刮棒把細(xì)胞刮入約0.5ml的TBS中，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到冰浴的離心管中，用1mlTBS沖洗培養(yǎng)皿，并入離心管中的細(xì)胞懸液。于4℃以1500g離心10分鐘以收獲細(xì)胞。用5~10倍體積經(jīng)冰預(yù)冷的TBS重懸細(xì)胞并再度離心。用TE(pH8.0）重懸細(xì)胞，使細(xì)胞密度為5x107細(xì)胞/ml，轉(zhuǎn)移至一個(gè)三角燒瓶中（1ml細(xì)胞懸液用5

細(xì)胞凍存和復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)2022/09/01: 實(shí)驗(yàn)方法原理：細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的基本原理是慢凍快解凍，已被證明能最大限度地提高細(xì)胞活力。目前常用甘油或二甲基亞砜作為細(xì)胞低溫保存的保護(hù)劑。這兩種物質(zhì)可以提高細(xì)胞膜對(duì)水的滲透性，再加上緩慢的冷凍可以使細(xì)胞內(nèi)的水從細(xì)胞中滲出，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少冰晶形成對(duì)細(xì)胞的損傷。復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)應(yīng)采用快速熔融的方法，以保證細(xì)胞外晶體在短時(shí)間內(nèi)熔融，以避免因水緩慢熔融進(jìn)入細(xì)胞形成細(xì)胞內(nèi)重結(jié)晶而對(duì)細(xì)胞造成損傷。實(shí)驗(yàn)材料：細(xì)胞試劑、試劑盒：D-Hanks液、小牛血清、培養(yǎng)液、青霉素、鏈霉素、胰蛋白酶、HCl、NaH

標(biāo)記細(xì)胞株要如何保存？2022/08/09: 細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。原代培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后即為細(xì)胞系，由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系所組成。如果不能繼續(xù)傳代，或傳代次數(shù)有限，可稱為有限細(xì)胞系，如可以連續(xù)培養(yǎng)，則稱為連續(xù)細(xì)胞系，培養(yǎng)50代以上并無限培養(yǎng)下去。所以細(xì)胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志的培養(yǎng)細(xì)胞。從培養(yǎng)代數(shù)來講，可培養(yǎng)到40-50代。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。對(duì)于人類腫

細(xì)胞培養(yǎng)基介紹2022/07/14: 細(xì)胞培養(yǎng)基的概念01細(xì)胞培養(yǎng)基是人工模擬細(xì)胞在體內(nèi)生長(zhǎng)的營養(yǎng)環(huán)境，并提供細(xì)胞營養(yǎng)和促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)。細(xì)胞培養(yǎng)基是細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)，它為動(dòng)物細(xì)胞的健康快速成長(zhǎng)提供營養(yǎng)物質(zhì)。所以，只要用到細(xì)胞進(jìn)行生物技術(shù)產(chǎn)品的生產(chǎn)制造，就勢(shì)必少不了細(xì)胞培養(yǎng)基。培養(yǎng)液或培養(yǎng)基，英文都是medium。當(dāng)它是粉劑時(shí)，傾向性地稱為培養(yǎng)基，而將粉劑配成液體后，多稱為培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中常需補(bǔ)加血清、抗生素等成分。細(xì)胞培養(yǎng)基的分類02培養(yǎng)基主要有：天然細(xì)胞培養(yǎng)基、合成細(xì)胞培養(yǎng)基和無血清細(xì)胞培養(yǎng)基等。天然細(xì)胞培養(yǎng)基是人們?cè)缙?

C57小鼠皮膚成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)的方法2022/07/14: 實(shí)驗(yàn)方法1.將實(shí)驗(yàn)小鼠脫頸處死，75%乙醇浸泡5min，固定，備皮，取背部皮膚至于含雙抗的冷PBS緩沖液中。2.仔細(xì)剝離脂肪，血管等多余組織，PBS清洗，加胰酶消化1h。3.分離真表皮，去除表皮后，PBS清洗3次。4.將真皮部分于培養(yǎng)皿內(nèi)剪碎，加入適量胰酶，轉(zhuǎn)移至15ml離心管內(nèi)，37℃恒溫水浴消化1h。5.消化結(jié)束后，加入H-DMEM*培養(yǎng)基終止反應(yīng)，1000rpm離心5min，棄上清。6.PBS清洗一遍，離心棄上清。7.將清洗后的組織塊均勻鋪于6cm培養(yǎng)皿內(nèi)，加入2ml*培養(yǎng)基，37℃，5%

說說關(guān)于細(xì)胞外泌體研究的幾個(gè)重要問題2022/07/06: 外泌體是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡，其大小為30-150nm，具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài)，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等），參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體廣泛存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，細(xì)胞外泌體研究是近些年研究的熱點(diǎn)。細(xì)胞外泌體主要原理是根據(jù)外泌體的密度、粒徑、沉降系數(shù)和親和力等差異進(jìn)行分離，提取方法包括傳統(tǒng)的差速離心、密度梯度離心，以及后來發(fā)展的超濾法、聚合物沉淀法、免疫分離、隔離篩選法、體積排阻色譜法等。這些方法各有利弊。細(xì)胞外泌體研究常見問題：1、培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，如何避免血清來源

SD大鼠乳鼠心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞原代分離培養(yǎng)方法2022/07/05: 1.將新生24h的SD大鼠用75%乙醇浸泡5min，開胸，取出心臟后于含有雙抗的預(yù)冷過的D-HANKS中漂洗兩遍，移入超凈臺(tái)。2.仔細(xì)剪除大血管，左右心房及右心室和室間隔，保留左心室，去除內(nèi)、外膜，PBS清洗。3.用眼科剪將心室肌剪碎至約1mm3，滴加1ml胎牛血清，均勻接種于6cm細(xì)胞培養(yǎng)皿內(nèi)，組織塊間隔1-2mm，放入5%CO2，37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。4.4小時(shí)后去除培養(yǎng)皿，加入3ml含有20%FBS和1%雙抗的H-DMEM培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。5.一般情況下48小時(shí)后可見有細(xì)胞爬出，換新鮮培

新生SD大鼠大腦皮層神經(jīng)元原代分離培養(yǎng)方法2022/06/30: 一.實(shí)驗(yàn)方法1.多聚賴氨酸（Poly-D-Lysine）包被培養(yǎng)板的制備：原代分離進(jìn)行前一天，用PBS緩沖液配制終濃度為0.1mg/ml的多聚賴氨酸工作液，0.22μm濾膜過濾除菌，于超凈工作臺(tái)內(nèi)吸取1ml加入六孔板內(nèi)，確保覆蓋板底，靜置孵育30min后吸出（可回收反復(fù)使用2-3次），用無菌水清洗培養(yǎng)板，置于超凈臺(tái)內(nèi)晾干，照紫外過夜。2.次日，取出生24h以內(nèi)的SD大鼠，75%乙醇浸泡消毒5min。3.棉球吸干乳鼠體表的乙醇，迅速斷頭，浸泡于冰冷的含有2%雙抗的PBS緩沖液中。4.剪開顱骨，取出

原代細(xì)胞分離培養(yǎng)都有哪幾種方法？2022/06/14: 研究中常用的細(xì)胞系/株系是現(xiàn)成的，我們只需要進(jìn)行細(xì)胞傳代和種子保存。然而，這些細(xì)胞系往往因長(zhǎng)期體外培養(yǎng)而失去原有的生物學(xué)特性，對(duì)藥物治療的反應(yīng)差距越來越大。因此，越來越多的人選擇原代細(xì)胞。來源于胚胎、組織、器官和外周血，經(jīng)特殊分離方法制備的原代培養(yǎng)細(xì)胞稱為原代細(xì)胞。原代細(xì)胞培養(yǎng)，也稱為原代培養(yǎng)，是從供體獲得的組織細(xì)胞在體外的培養(yǎng)。原代細(xì)胞是接近和最能反映體內(nèi)生長(zhǎng)特性的細(xì)胞，適用于藥敏試驗(yàn)、細(xì)胞分化等實(shí)驗(yàn)研究。原代細(xì)胞分離培養(yǎng)都有哪幾種方法？1、組織培養(yǎng)法組織培養(yǎng)是一種常見、簡(jiǎn)單且成功的原代細(xì)胞分

充質(zhì)干細(xì)胞涉及的研究竟然這么多2022/05/11: 充質(zhì)干細(xì)胞是人體內(nèi)一類具有自我更新和多向分化潛能的原始細(xì)胞群。根據(jù)遺傳來源的分類，干細(xì)胞可分為胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞。其中，胚胎干細(xì)胞具有發(fā)育全能性，是干細(xì)胞研究和應(yīng)用中具吸引力的一種。然而，關(guān)于胚胎干細(xì)胞的研究一直存在倫理爭(zhēng)議。與胚胎干細(xì)胞相比，成體干細(xì)胞具有獲取方便、致瘤風(fēng)險(xiǎn)低、無倫理爭(zhēng)議等優(yōu)點(diǎn)。因此，成體干細(xì)胞已成為干細(xì)胞臨床應(yīng)用研究的主要對(duì)象。在成體干細(xì)胞的許多臨床研究中，充質(zhì)干細(xì)胞是最多的。間充質(zhì)干細(xì)胞是一種來源于中胚層的成體干細(xì)胞，具有自我更新和多向分化的潛能。間充質(zhì)干細(xì)胞不僅存在于

原代細(xì)胞分離培養(yǎng)有哪些注意事項(xiàng)？2022/04/13: 原代細(xì)胞分離培養(yǎng)有哪些注意事項(xiàng)？1、組織塊培養(yǎng)法（1）接種后的前3天，觀察和移動(dòng)時(shí)注意不要引起液體振蕩。避免頻繁的翻倒和振動(dòng)，否則組織塊不易附著在瓶壁上或附著后脫落飄浮。（2）加入的培養(yǎng)基不宜過多，以免浸泡的組織因輕微波動(dòng)而脫落。（3）細(xì)胞向外遷移時(shí)，注意記錄并清除漂浮的組織塊和殘留細(xì)胞。它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會(huì)影響原代細(xì)胞的生長(zhǎng)。（4）為促進(jìn)組織塊盡快貼在培養(yǎng)瓶上，可在種植前在培養(yǎng)瓶底壁涂上一層薄薄的膠原蛋白。2、貼壁原代細(xì)胞（1）原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的分離細(xì)胞一次接觸體外環(huán)境時(shí)，會(huì)相互影響。這些細(xì)胞

充質(zhì)干細(xì)胞的醫(yī)療價(jià)值真的很高2022/03/15: 充質(zhì)干細(xì)胞是一種早期未分化細(xì)胞，具有自我更新、自我復(fù)制、無限增殖和多向分化潛能等特點(diǎn)。它們可以分泌細(xì)胞因子，減輕炎癥，減少組織細(xì)胞凋亡，促進(jìn)內(nèi)源性組織器官干祖細(xì)胞的增殖，進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)，從而達(dá)到作為種子細(xì)胞修復(fù)組織器官的效果。經(jīng)過連續(xù)傳代和冷凍保存后，仍具有多向分化潛能，被醫(yī)學(xué)界稱為“萬能細(xì)胞”。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)充質(zhì)干細(xì)胞實(shí)際上是一組具有高自我更新能力和不同分裂增殖能力的多能干細(xì)胞。它們可以在體外培養(yǎng)和擴(kuò)增，也可以在特定條件下分化成神經(jīng)細(xì)胞、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等。間充質(zhì)干細(xì)

腸道腫瘤類器官的研究與應(yīng)用2022/02/23: ONCOGENESIS|腸道腫瘤類器官的應(yīng)用研究類器官（Organoids）類器官是一項(xiàng)創(chuàng)新性較高的研究技術(shù)，近幾年來受到科研人士的追捧和廣泛好評(píng)。目前，我們國家在政策層面也給予了大力地支持。2021年科技部發(fā)布的“十四五”國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃“干細(xì)胞研究與器官修復(fù)”重點(diǎn)專項(xiàng)中也特別提到疾病類器官模型。什么是類器官（Organoids）？類器官屬于三維（3D）細(xì)胞培養(yǎng)物，包含其代表器官的一些關(guān)鍵特性。類體外培養(yǎng)系統(tǒng)包括一個(gè)自我更新干細(xì)胞群，可分化為多個(gè)器官特異性的細(xì)胞類型，與對(duì)應(yīng)的器官擁有類似的空間

細(xì)胞污染的辨別2022/02/23: 細(xì)胞污染的辨別細(xì)胞污染有很多種不同的類型，不同情況的細(xì)胞污染其表現(xiàn)也不同，檢測(cè)方法也有所不同。不過大部分的細(xì)胞污染，用肉眼加鏡檢就可以解決啦！細(xì)胞污染一般分細(xì)菌污染，真菌污染，支原體污染，黑膠蟲等。1.細(xì)菌污染pH升高，培養(yǎng)基變黃，培養(yǎng)基嚴(yán)重渾濁，鏡下可見細(xì)菌游動(dòng)。2.真菌污染培養(yǎng)液短期內(nèi)多不渾濁，有肉眼可見漂浮物，鏡下細(xì)胞間有菌絲體，生長(zhǎng)變慢，時(shí)間長(zhǎng)細(xì)胞死亡。3.支原體污染支原體污染后，細(xì)胞生長(zhǎng)一般無可見變化，在光學(xué)顯微鏡下不可見，極易被忽視，往往直到污染非常嚴(yán)重時(shí)才能發(fā)現(xiàn)，檢測(cè)需要通過特定的

細(xì)胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)支原體污染，該怎么辦？2022/02/23: 細(xì)胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)支原體污染，該怎么辦？加油新學(xué)期謹(jǐn)記：對(duì)抗污染，預(yù)防大于一切！在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，很多小伙伴兒一直受到支原體污染的困擾，我自己養(yǎng)的細(xì)胞曾經(jīng)也遇到過支原體污染，深受其害呀！針對(duì)于支原體污染來說，大家一定注意預(yù)防！如果已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一絲絲污染跡象，就要做到早發(fā)現(xiàn)、早挽救！如果細(xì)胞能夠救回來，還是可以繼續(xù)實(shí)驗(yàn)的，不耽誤實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。不過，確實(shí)也很難*清除??！如果說實(shí)在救不回來，那就再買一株新的細(xì)胞吧！最后，要買細(xì)胞的同學(xué)和老師，可以電話或郵箱聯(lián)系我們哦！支原體污染對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)造成多方面的不良影響

細(xì)胞培養(yǎng)基大盤點(diǎn)2022/01/25: 細(xì)胞培養(yǎng)基的概念01細(xì)胞培養(yǎng)基是人工模擬細(xì)胞在體內(nèi)生長(zhǎng)的營養(yǎng)環(huán)境，并提供細(xì)胞營養(yǎng)和促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)。細(xì)胞培養(yǎng)基是細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)，它為動(dòng)物細(xì)胞的健康快速成長(zhǎng)提供營養(yǎng)物質(zhì)。所以，只要用到細(xì)胞進(jìn)行生物技術(shù)產(chǎn)品的生產(chǎn)制造，就勢(shì)必少不了細(xì)胞培養(yǎng)基。培養(yǎng)液或培養(yǎng)基，英文都是medium。當(dāng)它是粉劑時(shí)，傾向性地稱為培養(yǎng)基，而將粉劑配成液體后，多稱為培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中常需補(bǔ)加血清、抗生素等成分。細(xì)胞培養(yǎng)基的分類02培養(yǎng)基主要有：天然細(xì)胞培養(yǎng)基、合成細(xì)胞培養(yǎng)基和無血清細(xì)胞培養(yǎng)基等。天然細(xì)胞培養(yǎng)基是人們?cè)缙?

原代心肌細(xì)胞間的培養(yǎng)是為了什么？2022/01/11: 原代心肌細(xì)胞間作為主要研究模型廣泛應(yīng)用于心血管研究，經(jīng)過長(zhǎng)期的嘗試，我們實(shí)驗(yàn)室找到了一些行之有效的方法，積累了一些經(jīng)驗(yàn)。總結(jié)如下：1、細(xì)胞分散和接種均勻度分離出來的心肌細(xì)胞在溶液中Ca2+的作用下容易結(jié)塊，因此，在差動(dòng)貼壁前后，應(yīng)將心肌細(xì)胞輕輕吹吹多次，形成單一分散狀態(tài)。接種后，心肌細(xì)胞應(yīng)均勻分布在培養(yǎng)板上避免細(xì)胞聚集到培養(yǎng)孔中心另外，將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱后，用滴管輕輕吹每個(gè)孔中心部分2~3次，但要特別注意避免污染。2、成纖維細(xì)胞的抑制和血清類型的選擇成纖維細(xì)胞比原代心肌細(xì)胞間更容易貼壁，具有分裂

細(xì)胞培養(yǎng)基給了體外細(xì)胞“一個(gè)家”2021/12/13: 細(xì)胞培養(yǎng)基是人工模擬動(dòng)物體內(nèi)細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境，維持細(xì)胞體外存活和增殖的營養(yǎng)基礎(chǔ)。它的主要功能是為細(xì)胞提供合適的pH值和滲透壓，以及細(xì)胞自身不能合成的各種營養(yǎng)物質(zhì)。細(xì)胞培養(yǎng)基系列產(chǎn)品包括旨在支持和維持細(xì)胞系生長(zhǎng)的產(chǎn)品，適用于多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞和細(xì)胞系，經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間的測(cè)試和驗(yàn)證。我們開發(fā)的即用型培養(yǎng)基產(chǎn)品包括粉末和濃縮物，可以滿足您的實(shí)驗(yàn)設(shè)施和預(yù)算的雙重需求。培養(yǎng)基中特別添加了能有效改善細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的營養(yǎng)成分和針對(duì)不同物種特選的優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基，適用于各種干細(xì)胞的體外培養(yǎng)。1、預(yù)先加入穩(wěn)定形態(tài)的L-谷氨酰胺，防止

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