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上海昆盟生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第5年
原代心肌細(xì)胞研究要注意些什么?2021/11/24
作為主要的研究模型,原代心肌細(xì)胞被廣泛應(yīng)用于心血管研究。那么我們?cè)谘芯窟^程中都要注意些什么呢?1、新生鼠年齡的選擇新生鼠心肌細(xì)胞在出生后3天內(nèi)具有部分增殖能力,而成年鼠心肌細(xì)胞為終末分化細(xì)胞,不再具有分裂增殖能力。因此,大鼠出生時(shí)間越短,離體心肌細(xì)胞存活率越高,越容易貼壁。大量觀察表明,選擇1~3日齡大鼠分離心肌細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)是理想的,尤其是半日齡大鼠。2、消化酶的選擇和使用新生大鼠原代心肌細(xì)胞間可采用組織塊法和消化法分離。前者較少使用,因?yàn)殡y以獲得密度均勻的細(xì)胞和控制成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)。消化法
一文帶你全面了解細(xì)胞因子2021/10/21
一文帶你全面了解細(xì)胞因子一、細(xì)胞因子的概念細(xì)胞因子(cytokine,CK),是由免疫細(xì)胞(如單核、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等)和某些非免疫細(xì)胞(內(nèi)皮細(xì)胞、表皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞等)經(jīng)刺激而合成、分泌的一類具有廣泛生物學(xué)活性的小分子蛋白質(zhì)(多肽或糖蛋白)。細(xì)胞因子的發(fā)現(xiàn)歷史1957年,發(fā)現(xiàn)干擾素(interferon,IFN)1969年,提出淋巴因子(lymphokine)的概念1974年,定名細(xì)胞因子(cytokine,CK)1975年,命名了腫瘤壞死因子(TumorNecrosisF
RNA pull down實(shí)驗(yàn)技術(shù)2021/09/23
RNApulldown實(shí)驗(yàn)技術(shù)1.實(shí)驗(yàn)原理RNApulldown是體外研究RNA與蛋白互作的重要技術(shù)。該技術(shù)是用生物素標(biāo)記體外轉(zhuǎn)錄的靶RNA分子,再用鏈霉親和素純化出與靶RNA結(jié)合的蛋白復(fù)合體,洗脫得到RNA結(jié)合蛋白質(zhì)。再通過westernblot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)特定的RNA結(jié)合蛋白是否與靶RNA結(jié)合;或通過質(zhì)譜儀檢測(cè)可以篩選出與靶RNA結(jié)合的蛋白。生物素與鏈霉親和素間的作用是目前已知強(qiáng)度最高的非共價(jià)作用;其中活化生物素可以在蛋白質(zhì)交聯(lián)劑的介導(dǎo)下,與已知的幾乎所有生物大分子偶聯(lián)。因此用生物素標(biāo)記核酸后,
DNA pull down實(shí)驗(yàn)技術(shù)2021/09/23
DNApulldown實(shí)驗(yàn)技術(shù)1.實(shí)驗(yàn)原理DNApulldown是體外研究DNA與蛋白互作的有力工具。該技術(shù)將生物素標(biāo)記的DNA片段結(jié)合在鏈霉親和素磁珠上,再與細(xì)胞核蛋白孵育,純化出與DNA片段互作的蛋白,洗滌洗脫得到的蛋白產(chǎn)物,做Westernblot檢測(cè)特定蛋白是否與靶DNA片段結(jié)合;做質(zhì)譜鑒定即可篩選出與DNA片段可能互作的蛋白信息(如:轉(zhuǎn)錄因子、組蛋白等)。生物素與鏈霉親和素間的作用是目前已知強(qiáng)度最高的非共價(jià)作用;其中活化生物素可以在蛋白質(zhì)交聯(lián)劑的介導(dǎo)下,與已知的幾乎所有生物大分子偶聯(lián)。
GST pull down實(shí)驗(yàn)技術(shù)2021/09/23
GSTPulldown實(shí)驗(yàn)技術(shù)1.實(shí)驗(yàn)原理Pulldown技術(shù)是將"誘餌"蛋白與一種易于純化的配體標(biāo)簽(如:GST標(biāo)簽、His標(biāo)簽)進(jìn)行融合表達(dá),而帶標(biāo)簽的誘餌蛋白能被特異結(jié)合該標(biāo)簽的固相親和配基捕獲,形成"次級(jí)親和支持物",用于純化與誘餌蛋白相互作用的其他蛋白。純化產(chǎn)物洗脫后,經(jīng)Westernblot驗(yàn)證或LC-MS/MS,即鑒定與誘餌蛋白互作的蛋白。1988年Smith等利用谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)融合標(biāo)簽從細(xì)菌中一步純化出GST融合蛋白。從此,GST融合蛋白在蛋白質(zhì)相互作用研究領(lǐng)域里
常用的細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法【大盤點(diǎn)】2021/09/22
細(xì)胞凋亡人體內(nèi)的細(xì)胞注定是要死亡的,有些死亡是生理性的,有些死亡則是病理性的,有關(guān)細(xì)胞死亡過程的研究,已成為生物學(xué)、醫(yī)學(xué)研究的一個(gè)熱點(diǎn)。已知的細(xì)胞死亡方式起碼有兩種,即細(xì)胞壞死與細(xì)胞凋亡(apoptosis)。細(xì)胞壞死是早已被認(rèn)識(shí)到的一種細(xì)胞死亡方式,而細(xì)胞凋亡則是逐漸被認(rèn)識(shí)的一種細(xì)胞死亡方式。此圖片來源于網(wǎng)絡(luò)細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的一種基本生物學(xué)現(xiàn)象,在多細(xì)胞生物去除不需要的或異常的細(xì)胞中起著必要的作用。它在生物體的進(jìn)化、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定以及多個(gè)系統(tǒng)的發(fā)育中起著重要的作用。細(xì)胞凋亡不僅是一種特殊的細(xì)胞死亡
細(xì)胞低氧培養(yǎng)模型簡(jiǎn)介2021/09/17
人的生存離不開氧氣。如果你感覺很長(zhǎng)一段時(shí)間里整天無精打采、昏昏欲睡,在排除睡眠不足的因素外,那么你有可能是血液中缺氧了。血液除了能在身體內(nèi)流動(dòng),攜帶能量、廢物等,最主要的功能就是攜帶氧氣,這是它的基本功能之一。如果血液缺氧,嚴(yán)重時(shí)就會(huì)導(dǎo)致器官病變,最常見的就是心梗、腦梗等。近年來,低氧(Hypoxic)于生物機(jī)體及細(xì)胞的生理作用及其分子機(jī)制研究越來越受到醫(yī)學(xué)科研學(xué)者的關(guān)注。低氧培養(yǎng)的適用研究領(lǐng)域近30年來與“低氧誘導(dǎo)”相關(guān)的文章統(tǒng)計(jì)(此項(xiàng)數(shù)據(jù)來源于Pubmed數(shù)據(jù)庫)細(xì)胞是生物體結(jié)構(gòu)和功能的基本
【表觀遺傳】中樞性性早熟研究2021/09/17
中樞性性早熟(CPP)是兒科內(nèi)分泌的常見疾病,發(fā)病率較高,且逐年增加趨勢(shì)明顯。CPP可以導(dǎo)致患者或者家長(zhǎng)出現(xiàn)社會(huì)、心理問題,而且還可能嚴(yán)重?fù)p害兒童的終身高。因此,CPP是兒科內(nèi)分泌醫(yī)生密切關(guān)注的疾病之一。CPP發(fā)病原因目前尚不明確,可能是由于某種因素促發(fā)了下丘腦促性腺激素釋放激素(GnRH)神經(jīng)元,使其提前活化,通過分泌大量的GnRH,進(jìn)而激活下丘腦-垂體-性腺軸。5-羥色胺(5-HT)最初在血清中發(fā)現(xiàn),又名血清素,是一種吲哚衍生物,它廣泛存在于哺乳動(dòng)物中。5-HT由色氨酸代謝產(chǎn)生。血液中色氨酸
細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)2021/09/17
細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)及其定制化解決方案常用的細(xì)胞生物學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn),主要包含:細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞保種、原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)、細(xì)胞增殖檢測(cè)(MTT法/CCK8法)、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期、細(xì)胞遷移、細(xì)胞侵襲、流式細(xì)胞分選、慢病毒包裝及穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選、電生理檢測(cè)、定制化細(xì)胞模型等。原代細(xì)胞分離我司可提供細(xì)胞培養(yǎng)和原代細(xì)胞分離的服務(wù)。例如:原代schwann細(xì)胞、原代海馬神經(jīng)元細(xì)胞、原代成骨細(xì)胞、臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、海綿體平滑肌細(xì)胞等。細(xì)胞培養(yǎng)與傳代細(xì)胞凍存/保種細(xì)胞復(fù)蘇細(xì)胞換液培養(yǎng)細(xì)胞傳代培養(yǎng)細(xì)胞共培養(yǎng)細(xì)胞3D培養(yǎng)類器官培養(yǎng)
細(xì)胞焦亡研究中的檢測(cè)指標(biāo)有哪些?2021/09/16
細(xì)胞焦亡是什么?細(xì)胞凋亡(Apoptosis)是經(jīng)典的細(xì)胞死亡方式,但隨著研究的不斷深入,很多細(xì)胞死亡現(xiàn)象并不能用細(xì)胞凋亡來解釋,隨著研究的深入,科學(xué)家又陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了一些新的細(xì)胞死亡新機(jī)制。細(xì)胞焦亡(Pyroptosis)便是近年來發(fā)現(xiàn)并證實(shí)的一種炎癥程序性細(xì)胞死亡,其特征為依賴于炎性半胱天冬酶(主要是caspase-1,4,5,11),并伴有大量促炎癥因子的釋放。細(xì)胞焦亡可由各種病理刺激引發(fā),如中風(fēng)、心臟病發(fā)作、癌癥、感染等。按照激活機(jī)制,細(xì)胞焦亡可分為Caspase-1依賴和不依賴兩種途徑。兩
如何選擇合適的內(nèi)參抗體?2021/09/16
如何選擇合適的內(nèi)參抗體?Tips:在選擇內(nèi)參抗體時(shí),我們需要遵循幾個(gè)原則:1.種屬來源哺乳動(dòng)物的樣本需要選擇哺乳動(dòng)物中穩(wěn)定表達(dá)的蛋白作為內(nèi)參,同樣的,植物樣本需要選擇植物中穩(wěn)定表達(dá)的蛋白作為內(nèi)參。2.細(xì)胞定位靶標(biāo)蛋白的細(xì)胞定位不同,適合的內(nèi)參也不同。如全細(xì)胞裂解液可選擇beta-actin、beta-tubulin等,膜蛋白一般選擇NaKATPase,核蛋白則選擇LaminB1、HistoneH3等。3.分子量?jī)?nèi)參蛋白的分子量需要與目標(biāo)蛋白的分子量有所區(qū)別,否則兩者條帶無法分開。一般目的蛋白與內(nèi)
TUNEL法細(xì)胞凋亡檢測(cè)假陽性率高怎么破?2021/09/15
TUNEL法基于對(duì)細(xì)胞DNA損傷的檢測(cè),通??捎糜跈z測(cè)組織切片樣本和細(xì)胞樣本,是晚期細(xì)胞凋亡檢測(cè)中常用的方法。那么對(duì)于檢測(cè)過程中常見的假陽性率高的現(xiàn)象是如何產(chǎn)生的呢?1.固定操作不當(dāng)固定液選擇不恰當(dāng),固定液濃度過高,固定時(shí)間過長(zhǎng),組織切片過厚都會(huì)影響固定效果。一般建議選擇含4%多聚甲醛的PBS溶液來固定細(xì)胞或組織切片,時(shí)間在30min左右。2.基因轉(zhuǎn)錄水平高基因轉(zhuǎn)錄活性高的非凋亡細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生假陽性,例如睪丸組織。3.激發(fā)光下長(zhǎng)時(shí)間照射在強(qiáng)激發(fā)光長(zhǎng)時(shí)間照射下,高濃度的PI會(huì)吸收能量在特定波長(zhǎng)的激光光
原代細(xì)胞分離與培養(yǎng)2021/09/02
原代細(xì)胞(primarycell)是指從生物體獲取細(xì)胞直接培養(yǎng)。通常,把培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。由于細(xì)胞剛從活體組織分離出來,因此原代細(xì)胞更接近于生物體內(nèi)的生活狀態(tài),且生物性狀尚未發(fā)生很大改變。這一方法可為研究生物體細(xì)胞的生長(zhǎng)、代謝、繁殖提供有力的手段,同時(shí)也為以后傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件。原代細(xì)胞的分離與培養(yǎng)常用的原代細(xì)胞培養(yǎng)方法有組織塊培養(yǎng)和分散組織培養(yǎng)。組織塊培養(yǎng):是將剪碎的組織塊直接移植在培養(yǎng)瓶壁上,加入培養(yǎng)基后進(jìn)行培養(yǎng)。組織塊培養(yǎng)法是常用的、簡(jiǎn)便易行和成功率較高
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