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中級(jí)會(huì)員 | 第6年
冷凍離心機(jī)的具體操作步驟介紹2021/12/15
冷凍離心機(jī)就是利用離心力使得需要分離的不同物料得到加速分離的機(jī)器。分為低速、高速冷凍離心機(jī),以及超速分析、制備兩用等多種型號(hào)。離心機(jī)又稱(chēng)沉淀器,類(lèi)型有用來(lái)將液體中的懸浮物質(zhì)很快分離出來(lái)的分離型離心機(jī),有用濃縮和提純微粒的制備式大型離心機(jī),還有實(shí)驗(yàn)分析用的低速分析用離心機(jī),盡管離心機(jī)的類(lèi)型不同,但功能可視為分離、濃縮、提純和分析幾類(lèi)。冷凍離心機(jī)操作步驟為:(1)將離心機(jī)的轉(zhuǎn)頭進(jìn)行預(yù)冷操作。(2)打開(kāi)空壓開(kāi)關(guān),以及高速冷凍離心機(jī)控制面板下面的開(kāi)關(guān),然后接通電源。(3)按下離心機(jī)右下方的控制開(kāi)關(guān),注意
離心機(jī)在使用時(shí)應(yīng)注意以下事項(xiàng)2021/12/03
離心機(jī)是利用離心力,分離液體與固體顆粒或液體與液體的混合物中各組分的機(jī)械。離心機(jī)主要用于將懸浮液中的固體顆粒與液體分開(kāi),或?qū)⑷闈嵋褐袃煞N密度不同,又互不相溶的液體分開(kāi)(例如從牛奶中分離出奶油);它也可用于排除濕固體中的液體。使用時(shí)需注意:1.使用各種離心機(jī)時(shí),必須事先在天平上精密地平衡離心管和其內(nèi)容物,平衡時(shí)重量之差不得超過(guò)各個(gè)說(shuō)明書(shū)上所規(guī)定的范圍,每個(gè)機(jī)器不同的轉(zhuǎn)頭有各自的允許差值,轉(zhuǎn)頭中不能裝載單數(shù)的管子,當(dāng)轉(zhuǎn)頭只是部分裝載時(shí),管子必須互相對(duì)稱(chēng)地放在轉(zhuǎn)頭中,以便使負(fù)載均勻地分布在轉(zhuǎn)頭的周?chē)?
實(shí)時(shí)熒光定量PCR原理技術(shù)及其應(yīng)用2021/11/20
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中,以熒光化學(xué)物質(zhì)測(cè)每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法。通過(guò)內(nèi)參或者外參法對(duì)待測(cè)樣品中的特定DNA序列進(jìn)行定量分析的方法。熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)誕生以來(lái),越來(lái)越受到實(shí)驗(yàn)室老師的青睞。熒光定量PCR原理:熒光定量PCR早稱(chēng)TaqManPCR,后來(lái)也叫Real-TimePCR,是美國(guó)PE(PerkinElmer)公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著
粒子計(jì)數(shù)器的作用及工作原理2021/09/29
粒子計(jì)數(shù)器原理:空氣中的微粒在光的照射下會(huì)發(fā)生散射,這種現(xiàn)象叫光散射。光散射和微粒大小、光波波長(zhǎng)、微粒折射率及微粒對(duì)光的吸收特性等因素有關(guān)。但是就散射光強(qiáng)度和微粒大小而言,有一個(gè)基本規(guī)律,就是微粒散射光的強(qiáng)度隨微粒的表面積增加而增大。這樣只要測(cè)定散射光的強(qiáng)度就可推知微粒的大小,就是光散射式粒子計(jì)數(shù)器的基本原理。塵埃粒子計(jì)數(shù)器的具體工作原理:來(lái)自光源的光線被透鏡組聚焦于測(cè)量腔內(nèi),當(dāng)空氣中的每一個(gè)粒子快速地通過(guò)測(cè)量腔時(shí),便把入射光散射一次,形成一個(gè)光脈沖信號(hào)。這一光信號(hào)經(jīng)過(guò)透鏡組2被送到光檢測(cè)器,正
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)基本原理詳解2021/09/24
01.導(dǎo)讀PCR是1984年開(kāi)始出現(xiàn)的一項(xiàng)基因檢測(cè)技術(shù),由于PCR技術(shù)具有簡(jiǎn)便易行、敏感度高等優(yōu)點(diǎn),該技術(shù)被廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和臨床檢測(cè),成為分子生物學(xué)必要的研究工具。傳統(tǒng)的PCR定量是應(yīng)用終點(diǎn)PCR來(lái)對(duì)樣品中的模板量進(jìn)行定量,通常用凝膠電泳分離,并用熒光染色來(lái)檢測(cè)PCR反應(yīng)的終擴(kuò)增產(chǎn)物。但在PCR反應(yīng)中,由于反應(yīng)體系和反應(yīng)條件等因素會(huì)影響PCR反應(yīng)效率,甚至出現(xiàn)一些非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物。因此,用終點(diǎn)PCR法來(lái)定量并不準(zhǔn)確。實(shí)時(shí)熒光定量PCR(realtimefluorescencequantita
數(shù)字PCR實(shí)驗(yàn)技巧攻略2021/09/22
數(shù)字PCR(DigitalPCR)技術(shù)作為新一代核酸檢測(cè)和定量技術(shù),目前在痕量核酸樣本檢測(cè)、復(fù)雜樣本稀有突變檢測(cè)和微小表達(dá)差異鑒定等方面表現(xiàn)出的優(yōu)勢(shì)已被普遍認(rèn)可。NGS和CRISPR等分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,為數(shù)字PCR技術(shù)在microRNA研究、基因組拷貝數(shù)鑒定、致病微生物鑒定、轉(zhuǎn)基因成分鑒定及基因細(xì)胞治療等諸多領(lǐng)域帶來(lái)了新的契機(jī)?;谶@一功能強(qiáng)大的新技術(shù),如何獲得更理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果呢?下面且聽(tīng)小Q娓娓道來(lái)。引物優(yōu)化設(shè)計(jì)良好的引物探針設(shè)計(jì)是數(shù)字PCR實(shí)驗(yàn)獲得成功的關(guān)鍵因素之一。這正是眾多研究人員選
實(shí)時(shí)熒光定量PCR的原理及應(yīng)用2021/09/17
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光染料或熒光集團(tuán),利用熒光信號(hào)來(lái)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板濃度進(jìn)行定量分析。其特點(diǎn)有:(1)用產(chǎn)生熒光信號(hào)的指示劑顯示擴(kuò)增產(chǎn)物的量,進(jìn)行實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)連續(xù)的熒光監(jiān)測(cè),避免終點(diǎn)定量的不準(zhǔn)確性,并且消除了標(biāo)本和產(chǎn)物的污染,且無(wú)復(fù)雜的產(chǎn)物后續(xù)處理過(guò)程。(2)熒光信號(hào)通過(guò)熒光染料嵌入雙鏈DNA,或熒光探針特異結(jié)合木得檢測(cè)物等方法獲得,打打提高了檢測(cè)的靈敏度、特異性和精確性。Real-timeO-PCR可以應(yīng)用于mRNA表達(dá)的研究、DNA拷貝
單細(xì)胞基因表達(dá)分析的進(jìn)展2021/09/08
數(shù)字PCR實(shí)操結(jié)果及體會(huì)的特異性!導(dǎo)讀:多年來(lái),研究人員一直缺乏工具,來(lái)高效拷問(wèn)這些差異,不過(guò)今非昔比。有了新一代DNA測(cè)序儀和質(zhì)譜儀,研究人員能夠以更高的分辨率、深度和通量來(lái)探索各個(gè)細(xì)胞之間的差異,特別是在單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組水平。將細(xì)胞培養(yǎng)板上的細(xì)胞放在顯微鏡下觀察。表面上,它們都一樣。實(shí)際上,它們一點(diǎn)都不相同。無(wú)論是DNA或RNA的水平,還是蛋白質(zhì)或代謝物的水平,這些細(xì)胞相差甚遠(yuǎn),而這些差異可能對(duì)細(xì)胞行為產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響。多年來(lái),研究人員一直缺乏工具,來(lái)高效拷問(wèn)這些差異,不過(guò)今非昔比。有了新一代DN
超速離心機(jī)和實(shí)驗(yàn)室常規(guī)高速離心機(jī)的區(qū)別2021/09/06
超速離心機(jī)和實(shí)驗(yàn)室常規(guī)高速離心機(jī)的區(qū)別1、常見(jiàn)離心機(jī)的分類(lèi)依據(jù)相對(duì)離心力和轉(zhuǎn)速的大小,離心機(jī)可分為:(1)低速離心機(jī):轉(zhuǎn)速范圍:4000-8000rpm,離心力范圍:1000-10000g;主要用于分離粗粒子懸濁液。(2)高速離心機(jī):轉(zhuǎn)速范圍:10000-25000rpm,離心力范圍:50000g;主要用于分離乳狀液和細(xì)懸濁液。(3)超速離心機(jī):轉(zhuǎn)速范圍:25000-150000rpm,離心力范圍:≥505000g,主要用于分離超細(xì)微粒的懸濁液和高分子膠體懸浮液。2、實(shí)驗(yàn)室常規(guī)高速離心機(jī)和超速離
數(shù)字PCR技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用2021/09/02
數(shù)字PCR技術(shù)的原理數(shù)字PCR(DigitalPCR-dPCR)技術(shù)是一種新的核酸檢測(cè)和定量方法,與傳統(tǒng)定量PCR(qPCR)技術(shù)不同,數(shù)字PCR采用定量的方式,不依賴(lài)于標(biāo)準(zhǔn)曲線和參照樣本,直接檢測(cè)目標(biāo)序列的拷貝數(shù)。由于這種檢測(cè)方式具有比傳統(tǒng)qPCR更加出色的靈敏度和特異性、精確性,dPCR迅速得到廣泛的應(yīng)用,這項(xiàng)技術(shù)在極微量核酸樣本檢測(cè)、復(fù)雜背景下稀有突變檢測(cè)和表達(dá)量微小差異鑒定方面變現(xiàn)出的優(yōu)勢(shì)已被普遍認(rèn)可,而其在基因表達(dá)研究、microRNA研究、基因組拷貝數(shù)鑒定、癌癥標(biāo)志物稀有突變檢測(cè)、致
數(shù)字PCR技術(shù)發(fā)展和原理2021/08/27
在定量PCR時(shí),我們常常糾結(jié)一個(gè)問(wèn)題,究竟是相對(duì)定量還是定量呢?如今,你無(wú)需糾結(jié)了,因?yàn)閿?shù)字PCR(digitalPCR)來(lái)了。盡管這兩種技術(shù)有些類(lèi)似,都是估計(jì)起始樣品中的核酸量,但它們有一個(gè)重要的區(qū)別。定量PCR是依靠標(biāo)準(zhǔn)曲線或參照基因來(lái)測(cè)定核酸量,而數(shù)字PCR則讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個(gè)數(shù),是對(duì)起始樣品的定量。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應(yīng)用領(lǐng)域:拷貝數(shù)變異、突變檢測(cè)、基因相對(duì)表達(dá)研究(如等位基因不平衡表達(dá))、二代測(cè)序結(jié)果驗(yàn)證、miRNA表達(dá)分析、單細(xì)胞基因表達(dá)分析等。[1-2
神通廣大的數(shù)字PCR,到底有多厲害?2021/08/25
神通廣大的數(shù)字PCR,到底有多厲害?什么是數(shù)字PCR?提起PCR,在生物及其相關(guān)行業(yè)內(nèi),半個(gè)世紀(jì)以來(lái)分子診斷的高速發(fā)展離不開(kāi)分子生物學(xué)技術(shù)特別是PCR技術(shù)日新月異的進(jìn)步。1983年由美國(guó)Mullis首先提出設(shè)想,1985年發(fā)明了聚合酶鏈反應(yīng),即簡(jiǎn)易DNA擴(kuò)增法,標(biāo)志著PCR技術(shù)的真正誕生。1999年,美國(guó)學(xué)者KennethKinzler與BertVogelstein提出了數(shù)字PCR(digitalPCR,dPCR)的概念,實(shí)現(xiàn)了核酸拷貝數(shù)定量的突破,成為一種全新的核酸檢測(cè)方法,與傳統(tǒng)PCR技術(shù)相
離心機(jī)使用注意事項(xiàng)及風(fēng)險(xiǎn)預(yù)防2021/08/23
實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)應(yīng)用領(lǐng)域廣泛,一般用于醫(yī)院化驗(yàn)室、科研機(jī)構(gòu)化驗(yàn)室、食品藥品檢驗(yàn)化驗(yàn)室、食品衛(wèi)生化驗(yàn)室等各種實(shí)驗(yàn)室。今天東南儀誠(chéng)為大家介紹如何根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇離心機(jī)、離心管類(lèi)型,以及離心機(jī)操作注意事項(xiàng)和安全風(fēng)險(xiǎn)防范。一、離心機(jī)的分類(lèi)按結(jié)構(gòu)類(lèi)型可分:臺(tái)式離心機(jī)和立式離心機(jī)(落地式離心機(jī))按分離方式可分:過(guò)濾離心機(jī)和沉降離心機(jī)按速度快慢可分:低速離心機(jī)(30000rpm/min)按容量大小可分:微量離心機(jī)(微型離心機(jī)或迷你離心機(jī))、小容量離心機(jī)、大容量離心機(jī)和超大容量離心機(jī)按有無(wú)冷凍可分:冷凍離心機(jī)和常溫
實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)維護(hù)及高效使用方法2021/08/20
離心機(jī)運(yùn)用守則1.在使用離心機(jī)前必須將其放置在平穩(wěn)、堅(jiān)固的地面(臺(tái)面)。2.使用時(shí)機(jī)殼要接地線。3.使用時(shí)負(fù)載必須平衡。4.使用前,打開(kāi)開(kāi)關(guān)調(diào)速旋扭應(yīng)指在“0”位。5.需要將打開(kāi)開(kāi)關(guān)調(diào)速旋扭開(kāi)到時(shí),正確的做法是將調(diào)速旋扭緩慢加擋。6.使用完畢,應(yīng)將調(diào)速旋扭檔逐檔旋回至“0”,然后讓它自行停轉(zhuǎn),嚴(yán)禁在還未停轉(zhuǎn)的狀態(tài)下和開(kāi)機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)的狀態(tài)下打開(kāi)機(jī)蓋。7.離心機(jī)在預(yù)冷狀況時(shí),離心機(jī)蓋有必要封閉,離心完畢后取出回頭要倒置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,擦干腔內(nèi)余水,離心機(jī)蓋處于打開(kāi)狀況。8.回頭在預(yù)冷時(shí)回頭蓋可擺放在離心機(jī)的平
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