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PCR反應(yīng)詳細基本步驟2024/06/20

聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（Polymerasechainraction,PCR）是一種在體外擴增特定DNA片段的方法，具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡便、重復(fù)性好、易自動化等突出優(yōu)點，可用很短時間使目的基因或某一片段擴增十萬乃至幾百萬倍。PCR反應(yīng)基本步驟：1、變性：根據(jù)DNA高溫變性的原理，將反應(yīng)體系溫度升至變性溫度（高于模板熔點，約95℃），使目的DNA雙鏈裂解成PCR模板（單鏈）。[95℃，30s]2、退火：將反應(yīng)體系溫度驟降至退火溫度（低于引物熔點約55℃），是PCR引物與PCR模板3’端雜交，

影響抗原抗體反應(yīng)因素2024/06/20

影響抗原抗體反應(yīng)的兩個因素：1、反應(yīng)物自身的因素抗體：不同來源的抗體,反應(yīng)性各有差異,抗體的濃度、特異性和親和力都影響抗體抗原反應(yīng),為提高試驗的可靠性,應(yīng)選擇高特異性、高親和力的抗體作診斷試劑.等價帶的寬窄也影響抗原抗體復(fù)合物的形成,單克隆抗體不適用于沉淀反應(yīng).抗原：抗原的理化性狀、分子量、抗原決定簇的種類及數(shù)目均可影響反應(yīng)結(jié)果.顆粒性抗原出現(xiàn)凝集反應(yīng),可溶性抗原出現(xiàn)沉淀反應(yīng),單價抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合不出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象.2、反應(yīng)環(huán)境條件酸堿度：抗原抗體反應(yīng)必須在合適的pH環(huán)境中進行.蛋白質(zhì)具有兩性電離

細胞培養(yǎng)過程中的污染源2024/06/14

在培養(yǎng)細胞的實驗中，難免培養(yǎng)的細胞被污染了，得不到想要的實驗結(jié)果，那么你知道細胞培養(yǎng)的污染來源有哪些嗎？細胞培養(yǎng)過程中污染的來源主要有以下幾條途徑：一、不潔的動物組織標本很多動物組織本該是無菌的(直接與外界相通的呼吸道和消化道、泌尿系統(tǒng)除外)，但由于取材時不小心也會有污染的機會。組織本身含有細菌，如取材時不用濃的抗生素洗液洗滌浸泡，也會帶菌，造成細胞污染。二、空氣空氣中含有大量的微生物，如果操作室與外界隔離不嚴或消毒不充分下，很容易造成污染。另外，凈化工作臺使用過久，濾板未定期更換或長久不更換，

抗體保存溫度和條件2024/06/14

抗體保存溫度和條件抗體的保存方法一般會直接影響抗體的活性和使用效果。在保存得當?shù)那闆r下，大部分抗體可以存放數(shù)月甚至數(shù)年，一般情況需嚴格按照抗體說明書來進行保存?？贵w保存溫度和條件:1、抗體收到后，需在12000rpm離心1~5分鐘，再打開管蓋進行分裝和保存，如果抗體體積不足50ul，可延長離心時間至5分鐘，從而確?？贵w全部離心下來。2、對于多數(shù)抗體而言，分裝成小等份并凍存于-20℃或-80℃是zuijia選擇。腹水形式的產(chǎn)品收到后需立即凍存，因為該類產(chǎn)品含有大量的蛋白酶，長期在置于4℃條件會導(dǎo)致

Elisa酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測方法優(yōu)缺點2024/06/14

ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗的標準程序，通常是把蛋白、抗體、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗體（captureAb）固定在固相載體上，再加入一級檢測抗體（primarydetectionAb），形成一個抗原抗體的復(fù)合物。如果該抗體已經(jīng)用酶（enzyme）標記了，即可用來直接測定抗原的量，若無，則可利用另一個酶標記的二級抗體來測定抗原的量。測定抗原量的方法是加入該酶的底質(zhì)（substrate），作用后產(chǎn)生出現(xiàn)的顏色深淺和樣本中的抗原量呈正比的關(guān)系，依此原理計算出樣本中的抗原總量或濃度。1.直接法（

佰利萊生物為您講解PCR反應(yīng)效率低值解析2024/06/14

佰利萊生物為您講解PCR反應(yīng)效率低值解析反應(yīng)效率視為實時熒光定量PCR分析設(shè)計和優(yōu)化的關(guān)鍵因素。利用標準曲線(通過對目標模板進行連續(xù)梯度稀釋獲得)獲取效率值。該效率值可作為總反應(yīng)的“健康”標志。低效率與高效率所造成的影響有所不同。改善上述兩種情形的步驟則相差甚遠。理想的反應(yīng)效率為100%，但反應(yīng)效率在90–110%范圍內(nèi)都是可以接受的。確定某個特定的分析效率是否低下的方法是稀釋模板生成標準曲線(模板稀釋的范圍應(yīng)涵蓋所有未知樣本)，然后查看該范圍內(nèi)的效率。它應(yīng)盡可能接近100%。熔解曲線出現(xiàn)多個峰

ELISA檢測試劑盒試驗溫育解讀2024/06/14

ELISA檢測試劑盒試驗溫育解讀在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加酶結(jié)合物和顯色劑后?？乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為溫育(incubation)，有人稱之為孵育。溫育的時間選擇:溫育這一步是ELISA測定中最容易出現(xiàn)問題的步驟。目前國內(nèi)ELISA試劑盒的反應(yīng)溫育時間為37℃30分鐘-1小時，進口ELISA試劑盒則通常為37℃1-2小時才能有較wan全的結(jié)合，低于1小時，可能會影響測定下限。ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被

ELISA試劑盒結(jié)果應(yīng)該如何判斷2024/05/30

ELISA試劑盒結(jié)果判定：1、結(jié)果的判定嚴格依據(jù)試劑盒提供的陽性判定值（CO）進行結(jié)果判定。廠商提供試劑的同時，說明書上列出的CO值是建立在一系列科學(xué)試驗及統(tǒng)計研究的基礎(chǔ)上，不應(yīng)隨意更改。定量測定需要制備標準曲線，根據(jù)標準曲線計算結(jié)果。2、灰區(qū)的設(shè)置通常情況下ELISA結(jié)果報告方式為“陰性"或“陽性"，在二者之間有一條明確的分界線，也就是所謂的陽性判定值即CO值，對于樣本的吸光度值（A）高于CO值就判斷為陽性，相反則判斷為陰性，然而在實際工作中經(jīng)常會出現(xiàn)樣本A值位于CO值附近的人群，即ELISA

細胞培養(yǎng)實用技巧總括2024/05/20

細胞是生命的基本單位。（除了病毒外。）細胞由細胞核組成和細胞膜還有線粒體等組成。（除個別生物）小到細菌大至鯨魚。都由細胞組成。細胞培養(yǎng)實用技巧總括:1.買細胞要去正規(guī)的地方購買，一般產(chǎn)品資料上面會有針對細胞的詳細介紹，這樣在培養(yǎng)之前可以了解細胞正常生長的狀態(tài)圖、傳代、培養(yǎng)基的類型等。2.不管是買的細胞，還是他人惠贈的細胞，剛拿到手需要趕緊做的兩件事：一檢測是否有支原體污染;二迅速擴增凍存，凍存細胞復(fù)蘇后第二天更換一次培養(yǎng)基。3.發(fā)現(xiàn)細胞有污染迅速處理掉，特別是當養(yǎng)了很多種細胞時。細菌污染、真菌污

化學(xué)氣體滅菌法有哪些2024/05/17

化學(xué)滅菌法系指利用化學(xué)藥品的氣體或產(chǎn)生的蒸汽進行殺滅微生物的方法。同一種化學(xué)藥品的低濃度時呈現(xiàn)抑菌作用，而在高濃度時則能起殺菌作用。其殺菌機理可能是：能使微生物蛋白質(zhì)變性死亡，或與酶系統(tǒng)結(jié)合影響代謝，或改變膜壁通透性使微生物死亡等。化學(xué)氣體滅菌法可分為三種：臭氧消毒法、甲醛等蒸汽熏蒸法、環(huán)氧乙烷滅菌法。下面詳解三種化學(xué)氣體滅菌法：1.臭氧消毒法臭氧（O3）的消毒原理是：臭氧在常溫、常壓下分子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，很快自行分解成氧（O2）和單個氧原子（O），后者具有很強的活性，對細菌有強的氧化作用，臭氧氧化

抗體制備三個階段具體是什么2024/05/15

抗體是什么：抗體是哺乳動物適應(yīng)性免疫系統(tǒng)對抗病原體的核心，它是在病原體刺激下由漿細胞（效應(yīng)B細胞）所分泌的一種免疫球蛋白，能夠識別并結(jié)合特異的病原體抗原，隨后通過介導(dǎo)中和作用、調(diào)理作用、效應(yīng)T細胞殺傷等來清除病原體。隨著抗體制備與改造技術(shù)的飛速發(fā)展，抗體已經(jīng)廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)各個領(lǐng)域，包括科學(xué)研究、診斷、治療等?？贵w的制備歷史和工藝決定了抗體的質(zhì)量和類型?？贵w制備工藝可分為三個階段：傳統(tǒng)方法免疫動物獲得抗體、應(yīng)用雜交瘤技術(shù)制備抗體和基因工程技術(shù)制備抗體。具體如下：1、傳統(tǒng)方法免疫動物制備抗體：將

細胞凋亡與細胞壞死有哪些區(qū)別呢？2024/05/08

細胞凋亡（apoptosis）指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細胞自主的有序的死亡。細胞凋亡與細胞壞死不同，細胞凋亡不是一件被動的過程，而是主動過程，它涉及一系列基因的激活、表達以及調(diào)控等的作用，它并不是病理條件下，自體損傷的一種現(xiàn)象，而是為更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動爭取的一種死亡過程。壞死（necrosis）：壞死是細胞受到強烈理化或生物因素作用引起細胞無序變化的死亡過程。表現(xiàn)為細胞脹大，胞膜破裂，細胞內(nèi)容物外溢，核變化較慢，DNA降解不充分，引起局部嚴重的炎癥反應(yīng)。細胞凋亡與壞死的區(qū)別在于，雖

血清血漿的區(qū)別及溶血問題2024/05/08

血液生化指標的分析及激素等含量的測定對臨床判斷、預(yù)測藥物毒性作用及疾病的發(fā)生發(fā)展有著重要的意義。那么，血清、血漿、全血有何區(qū)別，各自的用途是什么呢？1、常見的血液生化指標與激素有以下幾種：常見的血液生化指標：血糖（GLU）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、肌酐（Crc）、尿素氮（BUN）、膽gu醇（CHO）、堿性磷酸酶（ALP）、總膽hong素（TBIL）、鎂、鈣等。常見的激素：睪酮（T）、孕酮（P）、雌二醇（E2）、三碘甲腺原氨酸（T3）、甲狀腺素

人白三烯B4（LTB4）ELISA檢測試劑盒 使用說明書2024/05/07

本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷人（Human）白三烯B4（LTB4）ELISA檢測試劑盒使用說明書檢測原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被白三烯B4（LTB4）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并che底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白三烯B4（LTB4）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。樣品

小鼠甲狀腺刺激抗體（TSAB） ELISA試劑盒 使用說明書2024/04/28

本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷小鼠（Mouse）甲狀腺刺激抗體（TSAB）ELISA檢測試劑盒使用說明書檢測原理試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被抗原的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗原，經(jīng)過溫育并chè底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的甲狀腺刺激抗體（TSAB）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。樣品收集、處理及保

小鼠副豬嗜血桿菌抗體（HPS-Ab） ELISA試劑盒 說明書2024/04/22

本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷小鼠（Mouse）副豬嗜血桿菌抗體（HPS-Ab）ELISA檢測試劑盒使用說明書檢測原理試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被副豬嗜血桿菌抗體（HPS-Ag）抗原的包被微孔中，依次加入標本、HRP標記的檢測抗原，經(jīng)過溫育并che底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中副豬嗜血桿菌抗體（H

大腸桿菌尿苷二磷酸（UDP） ELISA試劑盒 說明書2024/04/22

本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷大腸桿菌（E.Coli）尿苷二磷酸（UDP）ELISA檢測試劑盒使用說明書檢測原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被尿苷二磷酸（UDP）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并che底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的尿苷二磷酸（UDP）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。樣

犬包蟲病抗原（Hydatidosis Ag） ELISA試劑盒 使用說明書2024/04/22

本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷犬（Canine）包蟲病抗原（HydatidosisAg）ELISA檢測試劑盒使用說明書檢測原理試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被包蟲病抗體的微孔中，依次加入標本、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并che底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中包蟲病抗原（Hydatidosis）的存在

大鼠核因子κB（NF-κB）ELISA檢測試劑盒 使用說明書2024/04/16

本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷大鼠（Rat）核因子κB（NF-κB）ELISA檢測試劑盒使用說明書檢測原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被核因子κB（NF-κB）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并che底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的核因子κB（NF-κB）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

人血小板衍化生長因子AB（PDGF-AB） ELISA檢測試劑盒 使用說明書2024/04/10

本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷人（Human）血小板衍化生長因子AB（PDGF-AB）ELISA檢測試劑盒使用說明書檢測原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被血小板衍化生長因子B（PDGF-AB）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹-底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血小板衍化生長因子B（PDGF-AB）呈正相關(guān)。用酶標儀在450n