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你不知道的實驗小技巧2015/01/14

平時在實驗室zui常聽到的一句話就是「實驗為什么會是這樣的呢」。然后仔細一查找原因，往往是由于操作上面的不認真，或是一些小小的細節(jié)沒有注意到。小編為大家整理了實驗小技巧，希望對大家有幫助。質(zhì)粒DNA提取提取質(zhì)粒的時候，zui后一步的酒精揮發(fā)很關(guān)鍵，基本上是其后續(xù)的酶切反應的決定性因素。所以這一步盡量揮發(fā)長一點時間，是空調(diào)吹熱風，或是37℃溫箱放長一點的時間，我試過室溫到次日，酶切很好。將Amp濃度提高到200ug/ml，下班前接種，次日一早收獲菌體，OD雖然不高，質(zhì)粒豐度卻不一般。菌體量少些，操

如何區(qū)分儀器檢出限、方法檢出限及樣品檢出限2015/01/08

檢出限是分析測試的重要指標，對于儀器性能的評價和方法的建立都是重要的基本參數(shù)之一。在日常檢測過程中，檢出限為具體量度指標，特別是在痕量分析中，痕量分析誤差與樣品含量相對于檢出限的倍數(shù)相關(guān)聯(lián)。檢出限的確定對于分析方法的選擇具有重要意義。對檢出限的忽視有可能導致檢測結(jié)果的不確定度增大。長期以來，各個領(lǐng)域的檢測人員針對檢出限概念、估算方法及在各個不同領(lǐng)域的應用都進行了大量的探討。像分析儀器在測定過程中存在與噪音相區(qū)別的小信號檢出問題，同時也存在著分析方法能可靠測定物質(zhì)zui低含量的界限問題，這兩個概念

如何清潔和維護你的離心機2015/01/08

年末通常是大掃除的時候。離心機作為大家每天都離不開的伙伴，也需要好好清潔一下啦。也許大家都知道應該定期清潔離心機，但究竟何時做，如何做，許多人都不太清楚。至于什么時候需要維護，什么時候需要維修，大家也是“蒙查查”。生物通www.ebiotrade。。ｃｏｍ對于使用離心機的實驗室而言，這些都是重要的技能。不過，除了偶爾擦擦離心機，我們并不清楚如何讓離心機保持在*狀態(tài)。現(xiàn)在，是時候補上這一課了。保持清潔生物通www.ebiotrade。。ｃｏｍ離心機的外部通常是用軟布擦拭，或蘸取中性清潔劑后擦拭。這

蛋白質(zhì)合成蛋白質(zhì)，教科書該改改了吧？2015/01/04

翻開任何一本生物學教科書，首先我們要學習的就是機體的DNA可以給出制造蛋白質(zhì)的指令，而蛋白質(zhì)在機體多種功能的發(fā)揮中扮演著重要的角色。近日，一項刊登于雜志Science上的研究論文中，來自猶他州大學的研究人員通過研究揭示，制造蛋白質(zhì)的氨基酸可以在沒有DNA指令及信使RNA信息存在的情況下進行裝配生成，該研究或?qū)⑿薷慕炭茣袑Φ鞍踪|(zhì)產(chǎn)生的說法。研究者PeterShen說道，這項研究非常有意義，同時其也反映出了生物學領(lǐng)域的博大精深。核糖體是蛋白質(zhì)裝配的機器，其可以根據(jù)特殊的遺傳代碼將不同的氨基酸連接起

美麗化學：自己動手做天氣瓶2014/12/18

什么是天氣瓶出現(xiàn)在科幻小說「海底兩*」的神秘氣象球，其實起源于17世紀歐洲的天氣預報儀器「天氣瓶」，即在密封的玻璃瓶注入蒸餾水、酒精、硝酸鉀、樟腦等混合液，這種液體會隨著天氣改變面貌的氣象儀，普遍運用在19世紀的航海上。天氣瓶的動圖模式材料2.5g硝酸鉀2.5g氯化銨33mL蒸餾水：超市購買就好，建議買常溫的；40mL乙醇（酒精）：濃度有95%和99.9%，2種都可以試試；10g天然樟腦(±)-Camphor：成分里有這么寫就是天然的，通常市面上的樟腦丸都是人工的，一定要天然的，而且據(jù)說天然樟腦

2014Z受歡迎的PCR方法相關(guān)論文2014/12/16

今天，Biotechniques介紹了2014年在該發(fā)表的5篇zui有趣和zui有用的PCR方法相關(guān)文章。PCR是現(xiàn)代分子生物學中的一種基本技術(shù)，所以它的任何創(chuàng)新或改進都受到研究人員的極大歡迎。BioTechniques的編輯們一直都非常喜歡PCR方法，我們很高興看到，2014年帶來了新技術(shù)的強大選擇。在這里，我們介紹了在過去一年中發(fā)表的5篇PCR方法相關(guān)論文，范圍很廣，從基本老式PCR反應有效性和特異性的改進，到技術(shù)如數(shù)字PCR。1、一種強大的耐熱DNA聚合酶鏈置換活性可顯著改善DNA擴增結(jié)果

冰糖葫蘆原是藥2014/12/12

“都說冰糖葫蘆兒酸,酸里面它裹著甜;都說冰糖葫蘆甜,可甜里面它透著酸……"這首歌算是把冰糖葫蘆的特點描寫到位：酸酸甜甜就是它！山楂原本是酸酸的，然而經(jīng)過處理裹上冰糖后不僅顏色變得艷麗了，味道也可口了許多。冰糖葫蘆是冬季人們尤其是孩子zui鐘愛的美食之一。天氣漸漸轉(zhuǎn)涼，又到了吃冰糖葫蘆的季節(jié)，還記得小時候和小伙伴們站在街道上等待著冰糖葫蘆出鍋的情景嗎？眼看著串果、熬糖、蘸糖、冷卻一步步地完成，早已迫不及待，想咬下一顆紅艷艷的冰糖葫蘆。小販們一聲聲的吆喝更是吸引來更多人的注意：“脆香酸甜的冰糖葫蘆,

CHIP心得體會2014/12/12

1、cellcounting：盡量做到準確，會影響input結(jié)果。2、crosslink：甲醛的終濃度是1%，這個基本所有的protocol上都會強調(diào)。3、resuspendcellswithSDS:一定要選用小的tip頭，在液面下吹打，否則很容易產(chǎn)生氣泡，后面的sonication就麻煩了。4、sonication：ChIP中zui重要的一部分，合適的條件要自己摸索，可以一次嘗試不同次數(shù)的sonication，然后建議采用EZ-ChIP上推薦的方法看看sonication的效果如何。5、加入s

蛋白質(zhì)技術(shù)專題：蛋白標準品（Marker）知識匯總2014/12/11

蛋白Marker可分為：一、未預染的Marker即寬分子量蛋白標準、高分子量蛋白標準以及低分子量蛋白標準;二、預染的Marker即單色預染和多色預染。在westernblot過程中，分子量Marker就像個螺絲釘一樣沒雖然是個小細節(jié)，然而就是這樣一個小細節(jié)對實驗結(jié)果有著不可忽視的作用。這個WesternBlot參照家族的一員的作用主要是用來指示蛋白條帶所對應的分子量大小，只有標準量無誤了，實驗結(jié)果才有說服力，除此之外，蛋白標準還有表示轉(zhuǎn)移成功或者蛋白在凝膠上的電泳程度等等的作用，所以選擇正確的蛋

生物分子類實驗室常用實驗技術(shù)原理匯總-92014/12/11

二十六、雙向凝膠電泳（2-DE）雙向凝膠電泳的原理是*向基于蛋白質(zhì)的等電點不同用等電聚焦分離，第二向則按分子量的不同用SDS-PAGE分離，把復雜蛋白混合物中的蛋白質(zhì)在二維平面上分開。二十七、mRNA的分離與純化（寡聚(dT)纖維素柱純化mRNA）真核細胞的mRNA分子zui顯著的結(jié)構(gòu)特征是具有5’端帽子結(jié)構(gòu)（m7G）和3’端的Poly(A)尾巴。絕大多數(shù)哺乳類動物細胞mRNA的3’端存在20-30個腺苷酸組成的Poly（A）尾，通常用Poly（A+）表示。這種結(jié)構(gòu)為真核mRNA的提取，提供了極

生物分子類實驗室常用實驗技術(shù)原理匯總-82014/12/11

二十五、酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）ELISA是一種免疫測定（immunoassay，IA）?；A(chǔ):抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，由此進行定性或定量分析。

生物分子類實驗室常用實驗技術(shù)原理匯總-72014/12/09

二十三、熒光共振能量轉(zhuǎn)移二十四、雙分子熒光技術(shù)

生物分子類實驗室常用實驗技術(shù)原理匯總-62014/12/09

十六、cDNA末端快速擴增(rapidamplificationofcDNAends,RACE)技術(shù)cDNA末端快速擴增(rapidamplificationofcDNAends,RACE)技術(shù)是一種基于mRNA反轉(zhuǎn)錄和PCR技術(shù)建立起來的、以部分的已知區(qū)域序列為起點,擴增基因轉(zhuǎn)錄本的未知區(qū)域,從而獲得mRNA(cDNA)完整序列的方法。簡單的說就是一種從低豐度轉(zhuǎn)錄本中快速增長cDNA5’和cDNA3’末端，進而獲得獲得全長cDNA簡單而有效的方法，該方法具有快捷、方便、等優(yōu)點,可同時獲得多個轉(zhuǎn)

生物分子類實驗室常用實驗技術(shù)原理匯總-52014/12/09

十一、BCA法測蛋白質(zhì)濃度十二、大腸桿菌感受態(tài)細胞（E.coliDH5α）制備1、前夜接種受體菌（DH5?或DH10B），挑取單菌落于LB培養(yǎng)基中37℃搖床培養(yǎng)到第二日（約16小時）；2、取1ml已培養(yǎng)到第二日的培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接于100mlLB培養(yǎng)基中，在37℃搖床上劇烈振蕩培養(yǎng)約2.5-3小時（250-300rpm）；3、將0.1MCaCl2溶液置于冰上預冷；以下步驟需在超凈工作臺和冰上操作；4、吸取1.5ml培養(yǎng)好的菌液至1.5ml離心管中，在冰上冷卻10分鐘；5、4℃下3000g冷凍離心5分鐘；

生物分子類實驗室常用實驗技術(shù)原理匯總-42014/12/08

九、RT-PCRRT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈式擴增（PCR）相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在*條件下進行。實驗步驟：1、RNA的提取；2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA；3、PCR擴增；4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。十、實時熒光定量PCR（Q—PCR）（Real-timeQuantitativePCR）利用熒光信號的變化實時檢測PCR擴增反應中

生物分子類實驗室常用實驗技術(shù)原理匯總-32014/12/08

七、噬菌體展示技術(shù)噬菌體展示技術(shù)是將外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當位置，使外源基因隨外殼蛋白的表達而表達，同時,外源蛋白隨噬菌體的重新組裝而展示到噬菌體表面的生物技術(shù)。噬菌體展示技術(shù)是將多肽或蛋白質(zhì)的編碼基因或目的基因片段克隆入噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當位置，在閱讀框正確且不影響其他外殼蛋白正常功能的情況下，使外源多肽或蛋白與外殼蛋白融合表達，融合蛋白隨子代噬菌體的重新組裝而展示在噬菌體表面。被展示的多肽或蛋白可以保持相對獨立的空間結(jié)構(gòu)和生物活性，以利于靶分子的識

生物分子類實驗室常用實驗技術(shù)原理匯總-22014/12/08

六、酵母雙雜交（Y2H）

生物分子類實驗室常用實驗技術(shù)原理匯總-12014/12/08

一、GSTpull-down實驗基本原理:將靶蛋白-GST融合蛋白親和固化在谷胱甘肽親和樹脂上,作為與目的蛋白親和的支撐物,充當一種“誘餌蛋白”,目的蛋白溶液過柱,可從中捕獲與之相互作用的“捕獲蛋白”(目的蛋白),洗脫結(jié)合物后通過SDS-PAGE電泳分析,從而證實兩種蛋白間的相互作用或篩選相應的目的蛋白,“誘餌蛋白”和“捕獲蛋白”均可通過細胞裂解物、純化的蛋白、表達系統(tǒng)以及體外轉(zhuǎn)錄翻譯系統(tǒng)等方法獲得。此方法簡單易行,操作方便。注：GST即谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶(glutathioneS-transf

電泳儀常見故障代碼及處理2014/12/05

一、EPS-100ErrS：短路、超載。切斷電源后拔掉電泳槽連接線，重新開機看是否不再報警，則正常。仍舊報警則可能芯片損壞，需返修。ErrO：未接負載。檢查電泳緩沖液濃度是否過低。電泳槽連接線未插好，或接觸不良。怎么弄連接線都弄不好的話返修。二、EPS-200/300/600Er1：輸出電壓超過zui大值。Er2：輸出電流超過zui大值。檢查電泳緩沖液濃度是否過高。電泳儀運行時是否插拔電泳槽。Er3：短路。切斷電源后拔掉電泳槽連接線，重新開機看是否不再報警，則正常。仍舊報警則可能芯片損壞，需返修

Tanon凝膠成像系統(tǒng)的常見問題解答2014/12/05

1.紫外透射燈箱無法正常使用當使用凝膠圖像系統(tǒng)時，透射紫外無法開啟，請檢查暗箱推門是否合緊，電源開關(guān)是否打開；若開啟后燈不亮，請切斷電源，檢查紫外透射燈箱后方的電源連接線是否松動，該儀器的保險絲是否燒毀。2.機箱面板失靈判斷計算機控制是否正常。3.反射白光燈無法正常使用判斷計算機控制是否正常，暗箱板面按鍵是否正常；檢查暗箱內(nèi)反射白燈的連接線是否松動。4.電腦無法正常使用判斷是否其他軟件能正常使用；若電腦問題請與電腦提供商聯(lián)想公司。判斷GIS暗箱能否單獨正常使用；若電腦正常，則需檢查RS232通訊