免疫組化染色步驟:
1)石蠟切片脫蠟至水。
2)3%H2O2室溫孵育5~10分鐘,以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。
3)蒸餾水沖洗,PBS浸泡5分鐘
4)5~10%正常山羊血清封閉,室溫孵育10分鐘。傾去血清,勿洗,滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗或一抗工作液,37℃孵育1~2小時(shí)或4℃過(guò)夜。
5)PBS沖洗,5分鐘x3次。
6)滴加適當(dāng)比例稀釋的標(biāo)記二抗:37℃孵育10~30分鐘;或滴加第二代標(biāo)記二抗工作液,37℃或室溫孵育10~30分鐘。
7)PBS沖洗,5分鐘x3次。
8)滴加適當(dāng)比例稀釋的辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素,37℃孵育10~30分鐘;或第二代辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液,37℃或室溫孵育10~30分鐘。
9) PBS沖洗,5分鐘x3次。
10)顯色劑顯色
11)自來(lái)水充分沖洗,復(fù)染,封片。