GT1212-02 蛋白表達增強型轉染試劑1.0mL
- 公司名稱 上海易佰聚經(jīng)貿(mào)有限公司
- 品牌
- 型號 GT1212-02
- 產(chǎn)地 美國
- 廠商性質 經(jīng)銷商
- 更新時間 2025/5/12 20:37:47
- 訪問次數(shù) 1777
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備注：本公司銷售的所有產(chǎn)品僅用于生化科研試驗
產(chǎn)品名稱 :
Transfection Reagent for Transient Protein Expression
蛋白表達增強型轉染試劑
品牌 :
BIOMIGA
貨號 :
GT1212-01
規(guī)格 :
0.5mL/1.0mL/1.5mL/6.0mL
詳細信息 :
說明 : | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 可用于150次6-孔板或3.5mm培養(yǎng)皿的細胞轉染。 產(chǎn)品說明
GeneTran II是一種新型的脂質體和多聚物轉染試劑，可用于各種真核細胞系的質粒轉染，如HEK293、CHO、COS、NIH3T3、MCF-7、PC12、RKO、C2C12、鼠胚胎干細胞和纖維原細胞、間質干細胞、NCCIT、果蠅細胞。同時原代細胞也能轉染，如人腫瘤細胞、大鼠腎上腺嗜鉻細胞、大鼠和小鼠皮質神經(jīng)細胞、肝細胞等。對于懸浮細胞也有較高的轉染效率和較低的毒性，如HEK 293、小鼠淋巴細胞、昆蟲細胞（sf9, sf21, High-Five）。有無血清存在（0-20％）對轉染試劑的效果無影響。
主要特點
高效轉染各種貼壁細胞。 對胚胎干細胞和原代細胞有較高的轉染效率。 對懸浮細胞如HEK293和sf9、sf21、high-five等昆蟲細胞也有很高的轉染效率。 在同類產(chǎn)品中具有更高的轉染效率和更低的毒性。 有無血清存在（0-20％）對轉染試劑的效果無影響。 可用于單個質?；蚨鄠€質粒共轉。 轉染24-72小時后，有高的蛋白表達量。 性價比高 操作簡便
保存條件
GeneTran 可在4℃（切勿放-20℃）至少保存18個月。使用之前請先將試劑瞬時離心。
質粒轉染步驟
以下步驟是用于35mm培養(yǎng)皿或6孔培養(yǎng)板轉染真核細胞的。若用于其他規(guī)格培養(yǎng)皿的轉染，請參考表1的用量。所有的數(shù)據(jù)和體積都是每孔的用量。對于絕大多數(shù)的細胞系和原代細胞，質粒DNA和GeneTran的比例按1:2-1:3混合。轉染HEK293細胞可只按1:1混合。有時優(yōu)化條件也是必須的（參見質粒DNA轉染條件的優(yōu)化，第7頁）。
A. 轉染貼壁細胞（35 mm培養(yǎng)皿或6孔培養(yǎng)板） 轉染前一天鋪板使轉染時細胞達到60-70%的匯合度。 1. 對于每一個轉染樣本，按如下比例配制轉染混合液：
* 不能在轉染混合液中混有Opti-MEM和血清 2. 用槍頭吹打混勻，放置于室溫20-40min。
3. 將混合液加入1 μL Reagent B，混勻后，加入到細胞培養(yǎng)皿中，晃動培養(yǎng)皿混勻培養(yǎng)液。放入CO2培養(yǎng)箱。
注：血清濃度對于轉染效果無影響，經(jīng)測試高達20%的胎牛血清濃度也不會對轉染效果產(chǎn)生影響。
4. 在轉染后的18-48小時之間，對細胞進行換液。轉染18-48小時之后可 檢測基因表達。如果檢測到蛋白表達，請在轉染后4-5天收集培養(yǎng)液。
5. 如果要得到穩(wěn)定細胞株，請在轉染24小時后按1:10傳代培養(yǎng)。
B. 轉染懸浮細胞（35 mm培養(yǎng)皿或6孔培養(yǎng)板） 轉染時保證細胞超過90%的密度 1. 對于每一個轉染樣本，按如下比例配制轉染混合液：
* 不能在轉染混合液中混有Opti-MEM和血清
2. 槍頭吹打混勻，放置于室溫20-40分鐘。
3. 將混合液加入1 μL Reagent B，混勻后，加入到細胞培養(yǎng)皿中，晃動培養(yǎng)皿混勻培養(yǎng)液。放入CO2培養(yǎng)箱。
注：血清濃度對于轉染效果無影響，經(jīng)測試高達20%的胎牛血清濃度也不會對轉染效果產(chǎn)生影響。
4. 在轉染后的18-48小時之間，對細胞進行換液。轉染18-48小時之后可檢測基因表達。如果有蛋白表達，請在轉染后4-5天收集培養(yǎng)液。
5. 如果要得到穩(wěn)定細胞株，請在轉染24小時后按1：10傳代培養(yǎng)
表1各種細胞培養(yǎng)板轉染推薦用量
質粒轉染條件優(yōu)化
前面介紹的轉染步驟是針對一般比較好轉的細胞。 對于C2C12肌肉細胞系，F(xiàn)uGENE-6 和Lipofectamine-2000的轉染效率不到10%，而GeneTran按照下面的體系轉染效率可達70%：
對于其他細胞系，可參考以下方法優(yōu)化條件： A． 在35mm培養(yǎng)板中將質粒量增加到3μg，4μg和6μg。 B． 在35mm培養(yǎng)板中將GeneTran增加到15μL。 C． 如果轉染效率較高，但死細胞較多，可降低質粒量到1μg或更低。也可以減少孵育時間到5-24小時。 D． 可按下表優(yōu)化條件：
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