GB/T 6682-1992

蜂蜜中羥甲基糠醛含量的液相色譜測(cè)定方法，檢出限1.0mg/kg，蜂蜜樣品中的羥甲基糠醛經(jīng)HPLC反相色譜柱分離，用液相色譜儀紫外檢測(cè)器檢測(cè)，通過(guò)色譜軟件來(lái)收集圖譜、查看標(biāo)準(zhǔn)曲線外標(biāo)法定量。本方法使用我公司STI501系列高效液相色譜儀系統(tǒng)來(lái)檢測(cè)，檢測(cè)精度滿足GB/T6682-1992要求。

1檢測(cè)條件  

   1.1甲醇:色譜純。

   1.2甲醇溶液:10%,吸取100ml,的甲醇到1000 ML的容量瓶中，用水稀釋至刻度。

   1.3標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì):羥甲基糠醛純度≥99%,

   1.4標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液:準(zhǔn)確稱取適量的羥甲基糠醛標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于100mL容量瓶，用10ml,甲醇溶解，用水稀釋至刻度，配成0.20mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。此溶液可在溫度低于4℃冰箱中冷藏保存兩個(gè)月。

1.5標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:分別吸取適量的羥甲基糠醛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液至100mL容量瓶中，用10%甲醇溶液釋稀至刻度，配成0.10ug/mL，0.20ug/mL，1.0ug/mL，2.0ug/mL，4.0ug/mL，6.0ug/mL，10ug/ml,標(biāo)準(zhǔn)工作溶液

   2儀器

2.1501高效液相色譜儀（杭州賽析科技）:配全波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器。

  恒流泵：耐壓42Mpa，流速精度0.001ml/min

  內(nèi)置式色譜軟件，可做外標(biāo)法，能兼容XP操作系統(tǒng)，RS-232接口

   2.2分析天平:感量0.01g,

   2.3注射器:10mL，微量進(jìn)樣器

2.4過(guò)濾膜:0.45um，一次性針式過(guò)濾器

2.5 XO-80超聲波清洗器、FB-10T溶劑過(guò)濾器、AP-01真空泵

2.6色譜柱溫箱

   3試樣制備與保存

   3.1試樣的制備

       無(wú)論有無(wú)結(jié)晶的實(shí)驗(yàn)室樣品，都不要加熱。將其攪拌均勻，分出0.5kg作為試樣。制備好的試樣置于樣品瓶中，密封，并做上標(biāo)記。

   3.2試樣的保存

       將試樣于室溫下保存。

   4測(cè)定步驟

   4.1試樣處理

       稱取10g試樣，精確至0.01g，置于100mL燒杯中，加人10mL甲醇（1.2），用玻璃棒輕輕攪拌均勻，使試樣*溶解。轉(zhuǎn)移至l00mL容量瓶中，用水釋稀至刻度，充分混勻。用0.45u m的濾膜過(guò)濾，濾液用于液相色譜儀紫外檢測(cè)器測(cè)定。

   4.2色譜側(cè)定

   4.3液相色譜條件

       a）色譜柱:Vertex C18 5um,250mmX4.6 mm（i.d ）或相當(dāng)者（美國(guó)進(jìn)口）;

       b）流動(dòng)相:甲醇+水（10十90）;

       c）流速:1.0 m L/min;

       d）檢測(cè)波長(zhǎng):285n m;

       e）柱溫:30度

       f）進(jìn)樣量:10uL.

   4.4液相色譜測(cè)定

       首先測(cè)定七個(gè)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（1.5）在上述色譜條件下的峰面積，以峰面積對(duì)相應(yīng)濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，然后測(cè)定未知樣品，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對(duì)樣品進(jìn)行定量。樣品溶液中羥甲基糠醛的響應(yīng)值應(yīng)在儀器的線性范圍內(nèi)。在上述色譜條件下，羥甲基糠醛的參考保留時(shí)間約為12 min。羥甲基糠醛標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜圖和含有短甲基糠醛的蜂蜜樣品色譜圖參見(jiàn)附錄A中圖A.1、圖A.2 ,

   4.5平行試驗(yàn)

       按上述步驟，對(duì)同一試樣進(jìn)行平行試驗(yàn)測(cè)定。

   4.6空白試驗(yàn)

       按上述步驟，對(duì)10%的甲醇溶液進(jìn)行測(cè)定。

   4.7添加試驗(yàn)

       每批樣品應(yīng)至少進(jìn)行一個(gè)樣品的添加試驗(yàn)。稱取10g試樣，精確至0.0lg，添加1.0mL羥甲基糠醛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，加9.9mL甲醇溶解，其他步驟按試樣處理步驟進(jìn)行。

   5精度

      本部分的精密度數(shù)據(jù)是按照GB/T6379的規(guī)定確定的，其重復(fù)性和再現(xiàn)性的值是以95%的可信度來(lái)計(jì)算。

   本方法中經(jīng)甲基糠醛添加濃度及其回收率的試驗(yàn)數(shù)據(jù):

   在添加量為1.0mg/kg時(shí)，平均回收率為93.78%;

   在添加量為10.0mg/kg時(shí)，平均回收率為94.88%;

   在添加量為40.0mg/kg時(shí)，平均回收率為95.76%;

   在添加量為100mg/kg時(shí)，平均回收率為94.68%.