RIPA裂解液（強）（蛋白類）
| 參考價 | ￥130.00-￥480.00 |
- 公司名稱 上海尚寶生物科技有限公司
- 品牌其他品牌
- 型號
- 所在地上海市
- 廠商性質(zhì)生產(chǎn)廠家
- 更新時間2023/6/29 12:58:23
- 訪問次數(shù) 1627
| 50ml | 130.00元 | 9999 瓶 可售 |
| 100ml | 190.00元 | 9999 瓶 可售 |
| 500ml | 480.00元 | 9999 瓶 可售 |
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100ml |
|---|---|---|---|
| 貨號 | T0013B | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
RIPA裂解液（強）（蛋白類）
產(chǎn)品貨號：T0013B
產(chǎn)品包裝：50ml/100ml/500ml
RIPA裂解液（強）（蛋白類）產(chǎn)品簡介：
多種成分均可以從細胞中提取總蛋白，如 Triton、SDS、NP-40 等。RIPA 裂解液（強）(RIPA Lysis Buffer) 是采用一種經(jīng)典的細胞組織快速裂解并獲得總蛋白的裂解液，其裂解強度大于 NP-40 裂解液、RIPA 裂解液(中)。 所獲得的蛋白質(zhì)可用于 Western，免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)等。
Medium RIPA Lysis Buffer 主要由 Tris 、NP-40、sodium deoxycholate 等組成，并含有多種蛋白酶抑制劑成分， 可以有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用。
產(chǎn)品組成：
| 試劑名稱 | 50ml | 100ml | 500ml | 保存條件 |
|---|---|---|---|---|
| Weak RIPA Lysis Buffer | 50ml | 100ml | 500ml | -20℃ |
| PMSF(100mM) | 0.75ml | 1.5ml | 7.5ml | -20℃ |
操作步驟（僅供參考）：
(一)貼壁培養(yǎng)細胞
1. 取 Enhanced RIPA Lysis Buffer 室溫溶解混勻，加入 PMSF，使 PMSF 終濃度為 1mM。
2. 去除貼壁細胞的培養(yǎng)液，用 PBS、NS 或無血清培養(yǎng)液清洗 1 次，低速離心，棄上清， 留取沉淀。
3. 按照 6 孔板每孔加入 150～250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例，加入 RIPA Lysis Buffer。移液器輕輕吹打， 使裂解液和細胞充分接觸。置于冰上或 4℃裂解，通常裂解液作用于細胞 1～3s 內(nèi)，細胞就會被裂解。通常 6 孔板每孔細胞加入 150μl 裂解液已經(jīng)足夠，但如果細胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200～ 250μl。
4. 10000～12000g，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。
5. 后續(xù)的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)懸浮培養(yǎng)細胞
1. 取 Weak RIPA Lysis Buffer 置室溫溶解混勻后，加入 PMSF，使 PMSF 終濃度為 1mM。
2. 低速離心懸浮細胞，棄上清，收集沉淀。
3. 用手指輕彈細胞，使其松散。按照 6 孔板每孔細胞加入 150～250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例，加入 Weak RIPA Lysis Buffer 。通常 6 孔板每孔細胞加入 150μl 裂解液已經(jīng)足夠，但如果細胞密度非常高可以適當(dāng)加大 裂解液的用量到 200～250μl。再用手指輕彈以充分裂解細胞，充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀。
4. 10000～12000g，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。
5. 進行后續(xù)的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(三)組織樣本
1. 取 Enhanced Lysis Buffer 置于室溫溶解混勻后，加入 PMSF，使 PMSF 終濃度為 1mM。
2. 把組織剪切成細小的碎片，越小越好。 取在液氮或超低溫冰箱中冷凍 30min 以上的組織，迅速用液氮研磨， 研磨過程盡量控制在 1～2min 之內(nèi)，以減少蛋白的降解。
3. 按照每 20mg 組織加入 150～250μl 裂解液的比例，加入含有 PMSF 的裂解液。冰上或 4℃裂解 15～30min。
4. 步驟 3、4 亦可以采用如下過程：按照每 20mg 組織加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的 Enhanced RIPA Lysis Buffer。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿，直至充分裂解，該過程盡量控制在 1～2min 之內(nèi)，以 減少蛋白的降解。
5. 10000～12000g，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。
6. 進行后續(xù)的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注意事項：
1. 去除貼壁細胞的培養(yǎng)液后，如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不用清洗。
2. 如果裂解不充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。
3. 如果細胞量較多，必需分裝成 50～100 萬細胞/離心管，然后再裂解。大團的細胞較難裂解充分，而少量的 細胞由于裂解液容易和細胞充分接觸，相對比較容易裂解充分。
4. 如果組織樣品本身非常細小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈 Vortex 使樣品裂解充分。然 后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗。
5. 溶解 RIPA Lysis Buffer 時，應(yīng)盡量縮短溶解時間，避免有效成分失效。
6. 裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組 DNA 等的復(fù)合物。在 不檢測和基因組 DNA 結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗；如果需要檢測和 基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。 如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如 NF-KB、p53 等時，通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因 子。
7. 細胞裂解的操作步驟，應(yīng)置于冰上或 4℃進行。
有效期： 12 個月有效。
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