試劑名稱：Fluo-3 Pentapotassium Salt Fluo-3五鉀鹽

儲(chǔ)存：-20℃干燥避光保存至少1年，冰袋運(yùn)輸。

產(chǎn)地：西安強(qiáng)化生物

CAS NO： 853400-67-6

分子式：C36H25Cl2K5N2O13

分子量：959.99

一、描述與基本特性

Fluo-3 Pentapotassium Salt，熒光鈣離子指示劑Fluo-3五鉀鹽，可應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究。

化學(xué)結(jié)構(gòu)：基于熒光素骨架，修飾BAPTA以增強(qiáng)Ca2+親和力 。

用途：用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+濃度，實(shí)現(xiàn)鈣動(dòng)力學(xué)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。適用于流式細(xì)胞術(shù)、熒光顯微鏡等技術(shù)

作用機(jī)制：熒光強(qiáng)度與鈣離子結(jié)合的正相關(guān)

熒光鈣離子指示劑Fluo-3五鉀鹽的核心作用機(jī)制是 "熒光強(qiáng)度隨Ca2+濃度增強(qiáng)" ，具體過程如下：

無鈣狀態(tài)：游離的Fluo-3幾乎無熒光（量子產(chǎn)率極低），因發(fā)色團(tuán)受BAPTA基團(tuán)的電子轉(zhuǎn)移抑制而淬滅。

鈣結(jié)合狀態(tài)：當(dāng)結(jié)合Ca2+后，BAPTA的羧基與Ca2+螯合，分子構(gòu)象變化解除發(fā)色團(tuán)淬滅，熒光強(qiáng)度增強(qiáng)60-100倍（增強(qiáng)80倍）。

動(dòng)態(tài)響應(yīng)：熒光強(qiáng)度變化（ΔF）與Ca濃度呈正比，其中解離常數(shù)為 390–450 nM，適用于胞質(zhì)鈣濃度（~100 nM至μM級(jí)）檢測(cè)。

關(guān)鍵優(yōu)勢(shì)：?jiǎn)尾ㄩL(zhǎng)激發(fā)/發(fā)射設(shè)計(jì)兼容流式細(xì)胞儀、共聚焦顯微鏡等設(shè)備，無需比率測(cè)量即可快速動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。

二、實(shí)驗(yàn)操作指南

（一）探針加載方法

細(xì)胞加載: 因膜滲透性差，需通過微注射、膜片鉗電極導(dǎo)入或劃痕標(biāo)記法加載 。

工作液配制:

母液：高純度無水 DMSO 配制 2–5 mM 儲(chǔ)備液 。

工作濃度：2–20 μM。

減少探針泄漏: 添加有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑：

Probenecid。

Sulfinpyrazone。

（二）檢測(cè)流程

孵育: 工作液與細(xì)胞在室溫孵育 20–120 分鐘，再置換緩沖液移除多余探針 。

檢測(cè)設(shè)備:

激發(fā)波長(zhǎng) 506 nm，發(fā)射波長(zhǎng) 526 nm 。

兼容氬離子激光器及流式 FL1 通道。

（三）干擾控制

重金屬干擾: BAPTA 結(jié)構(gòu)易結(jié)合 Zn2+/Mn2+等，建議添加重金屬螯合劑 TPEN 。

探針流出: 細(xì)胞類型差異導(dǎo)致保留時(shí)間不同，需在加載后 1–2 小時(shí)內(nèi)完成實(shí)驗(yàn) 。

以上由西安強(qiáng)化生物小編xxn整理

用于科研相關(guān)領(lǐng)域，不能用于人體實(shí)驗(yàn)！

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