將 蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑（含布雷菲德菌素 A）添加到體外或體內(nèi)刺激的淋巴細(xì)胞中，阻斷其細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程。這導(dǎo)致細(xì)胞因子和/或蛋白質(zhì)在高爾基復(fù)合體中積累。細(xì)胞因子在細(xì)胞中積累的增加增強(qiáng)了免疫熒光染色和流式細(xì)胞術(shù)分析對(duì)產(chǎn)生細(xì)胞因子的細(xì)胞的可檢測(cè)性。

推薦的實(shí)驗(yàn)流程 刺激細(xì)胞：已經(jīng)報(bào)道了各種體外方法，用于刺激細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子。多克隆激活劑對(duì)于誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞因子的細(xì)胞特別有用。這些激活劑包括：伴刀豆球蛋白 A、脂多糖、佛波酯加鈣離子載體或離子載體或離子霉素、植物血凝素、葡萄球菌、腸毒素 B 和針對(duì) TCR/CD3 復(fù)合物亞基的單克隆抗體（有或沒(méi)有針對(duì)共刺激受體的抗體，如 CD28）。 BD GolgiPlug™的使用程序：每1 ml細(xì)胞培養(yǎng)物中加入1 μl BD GolgiPlug™（例如，~10^6個(gè)細(xì)胞/mL）并充分混合。用BD GolgiPlug™處理受刺激的細(xì)胞4至6小時(shí)，可顯著提高通過(guò)免疫熒光染色檢測(cè)產(chǎn)生細(xì)胞因子的細(xì)胞的能力。建議BD GolgiPlug™在細(xì)胞培養(yǎng)物中的保存時(shí)間不要超過(guò)12小時(shí)。 作為 BD GolgiPlug™ 的替代品，研究人員可能希望考慮使用 BD GolgiStop™，這是一種含有莫能菌素的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑（Cat.第 554724 號(hào)）。已發(fā)現(xiàn) BD GolgiPlug™ 和 BD GolgiStop™ 對(duì)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色具有不同的影響，即時(shí)間、激活劑和細(xì)胞因子依賴性。在進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色時(shí)，需要考慮這些因素。

蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑（含布雷菲德菌素 A）

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