Organoid Dissociation Solution

類器官消化液

1、 產(chǎn)品描述

?；镱惼鞴賯鞔海?span>Organoid Dissociation Solution）可應(yīng)用于多種哺乳動(dòng)物(如人、鼠、豬、蝙蝠、牛等)組織來源類器官的常規(guī)傳代，可使類器官從基質(zhì)膠中分離，并可使其溫和地消化為小細(xì)胞簇或單細(xì)胞，同時(shí)保持其傳代后的生長活力。

2、 產(chǎn)品信息

3、 其他自備材料和試劑

4、 類器官的傳代消化

1、   待類器官培養(yǎng)到直徑為100~500μm大小時(shí)（或變黑不再增大時(shí)），即可進(jìn)行類器官的傳代（每代約1~2周）。以下操作與細(xì)胞接觸的耗材均需用潤洗液潤洗后使用：

2、   吸棄舊培養(yǎng)基，加入等體積上皮類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基，用細(xì)胞刮刀或者移液管吸頭輕輕刮下（或吹打）基質(zhì)膠和類器官混合物，轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管中（每管最多收集2~3孔類器官，避免體積體積過大消化效率低），吹打5~10次，使類器官和基質(zhì)膠分離，300g離心3分鐘。

3、   去除上清液加入5倍于基質(zhì)膠和類器官混合物體積的類器官消化液，吹打混勻后置于37℃培養(yǎng)箱中消化5~10分鐘。取出吹打混勻，取10μL混合液鏡檢是否消化成小的細(xì)胞團(tuán)塊，消化不充分可適當(dāng)延長消化時(shí)間。若要求細(xì)胞計(jì)數(shù)則需消化成單個(gè)細(xì)胞，可延長消化時(shí)間至10~20分鐘后終止消化后臺(tái)盼藍(lán)染色進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。密切監(jiān)視消化過程使在類器官解離液中的孵育時(shí)間最短。

4、   消化完成后，加入5倍體積上皮類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基吹打混勻以終止消化反應(yīng)，然后250g離心3分鐘。

5、   吸棄上清液，用上皮類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基清洗2次以去除殘留的消化液。次清洗可將類器官合并收集在同一個(gè)離心管中。

6、   清洗完成后將離心沉淀中的細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)，在細(xì)胞沉淀中加入基質(zhì)膠（>70%）并在冰上混勻（注意，混勻吹打的動(dòng)作要輕柔，切忌產(chǎn)生大量氣泡，常溫混勻則需要控制在15秒內(nèi)），混勻后置于冰上。

注意：基質(zhì)膠稀釋比例應(yīng)在70%以上以保證培養(yǎng)過程中基質(zhì)膠的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。

7、   將基質(zhì)膠和細(xì)胞的混合懸液點(diǎn)入培養(yǎng)孔板底部正，使用槍頭稍微攤平懸液，注意避免懸液接觸孔板側(cè)壁。（推薦：96孔板接種3~10μL/孔，48孔板接種10~20μL/孔，24孔板接種20~30μL/孔）。

注意：為防止基質(zhì)膠室溫凝固，此步驟應(yīng)盡快完成。

8、   將培養(yǎng)板放入37℃和5%CO?的培養(yǎng)箱中15-25分鐘，讓基質(zhì)膠凝固。

9、   待基質(zhì)膠凝固后，沿壁緩慢加入室溫平衡的類器官培養(yǎng)基，避免破壞已凝固結(jié)構(gòu)。（推薦：96孔板加入100μL/孔，48孔板加入250μL/孔，24孔板加入500μL/孔）。注：不要將培養(yǎng)基直接添加到基質(zhì)膠液滴的頂部，因?yàn)檫@可能會(huì)破壞已凝固結(jié)構(gòu)。

10、 將培養(yǎng)板置于37℃和5%CO?的恒溫培養(yǎng)箱中。

11、 每隔2~3天更換一次培養(yǎng)基，小心地從孔中吸出培養(yǎng)基，并加入新鮮的室溫平衡的類器官培養(yǎng)基。

12、 密切監(jiān)測類器官生長狀態(tài)，直到類器官需要進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。

V2.0版

更新時(shí)間：2025/6/21