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青旗(上海)生物技術(shù)發(fā)展有限公司
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elisa實(shí)驗(yàn)步驟

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產(chǎn)品型號

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海市

更新時(shí)間:2021-07-20 09:01:17瀏覽次數(shù):1782次

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供貨周期 現(xiàn)貨 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)
主要用途 僅用于科研
elisa實(shí)驗(yàn)步驟
青旗(上海)生物技術(shù)發(fā)展有限公司,總部位于上海浦東新區(qū),依托本地高校資源,逐步發(fā)展成為以生物技術(shù)為主的研發(fā)、生產(chǎn)、培訓(xùn)為一體的綜合化產(chǎn)業(yè)平臺,公司在標(biāo)準(zhǔn)化細(xì)胞庫建立及細(xì)胞藥物前端模型方面成果顯著。我們秉承對用戶負(fù)責(zé)的態(tài)度,以對科研的高度嚴(yán)謹(jǐn),以嚴(yán)格的質(zhì)量控制,為廣大生物醫(yī)學(xué)科研用戶提供更優(yōu)質(zhì)的服務(wù)!

一、elisa實(shí)驗(yàn)步驟介紹

  樣品收集、處理方法

  1、血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,室溫血液自然凝固10-20分鐘,2000-3000rpm離心20分鐘,將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

  2、血漿:根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑?;旌?0-20分鐘后,2000-3000rpm離心20分鐘。收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

  3、細(xì)胞上清液:檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。2000-3000rpm離心20分鐘,收集上清。

  4、組織勻漿:標(biāo)本采集后用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。使用時(shí)取適量標(biāo)本,加入一定量的PBS,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分后,2000-3000rpm離心20分鐘,收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

二、樣品保存

  如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

  實(shí)驗(yàn)步驟

  1、從室溫平衡20分鐘后的鋁箔袋中取出所需酶標(biāo)板孔數(shù)目,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

  2、標(biāo)準(zhǔn)品和樣本加樣:設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL。樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL,空白孔不加。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

  3、加酶:標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔。

  4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60分鐘。

  5、配液:將20X濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋20倍后備用。

  6、洗滌:小心揭開封板膜,棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

  [洗板方法]

  手工洗板:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,酶標(biāo)板倒扣在吸水紙上拍干,反復(fù)5次。

  自動(dòng)洗板:每孔注入洗液350μL,浸泡1分鐘,洗板5次。

  7、顯色:每孔加入底物A、B各50μL,輕輕震蕩混勻后,37℃避光孵育15min。

  8、終止:每孔加入終止液50μL,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立刻轉(zhuǎn)為黃色。

  9、測定:以空白孔調(diào)零,15分鐘內(nèi)在450nm波長處測定各孔的吸光度(OD值)。

三、elisa實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算

  繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在Excel工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,按曲線方程計(jì)算各樣本濃度?;蛴脴?biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。

四、elisa實(shí)驗(yàn)步驟注意事項(xiàng)

  1、試劑盒保存在2–8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,屬于正?,F(xiàn)象,可水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。初次使用試劑盒時(shí),應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘,以便試劑集中到管底。

  2、要嚴(yán)格避免操作過程中酶標(biāo)板干燥,干燥會使酶標(biāo)板上生物成份迅速失活。

  3、禁止混用不同批次試劑盒內(nèi)的試劑。

  4、本公司提供的96孔酶標(biāo)板是單條可拆型酶標(biāo)板,用戶可按需求使用;剩余的酶標(biāo)板請放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

  5、請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,最好做復(fù)孔。

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