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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本產(chǎn)品是跟 TRIzol 一樣的、基于異硫氰酸胍/酚/氯仿提取 RNA 原理開發(fā)的快速總 RNA 提取試劑，可用于從各種動(dòng)物組織（包括白細(xì)胞）和部分植物材料中快速提取總 RNA。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.操作簡(jiǎn)單快速，只要 10 分鐘左右，可以全在室溫下進(jìn)行。

2.RNA 質(zhì)量高，OD260/OD280 一般在 1.9 左右。一般不含用 RT-PCR 可以檢測(cè)到的基因組 DNA 污染。

3.適用于大部分實(shí)驗(yàn)材料，如培養(yǎng)細(xì)胞、各種動(dòng)物材料和少數(shù)植物材料。

4.性價(jià)比高于進(jìn)口 TRIzol 和 TRI Reagent 等同類產(chǎn)品。

5.動(dòng)物 RNA 提取液（Trizol）只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成 份規(guī) 格包裝

動(dòng)物 RNA 提取液250 mL250 mL 棕玻瓶

使用手冊(cè)1 份無

保存和運(yùn)輸

常溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期一年。

自備試劑

氯仿、異丙醇、75%乙醇、RNase-free 水。

使用方法：

注意：下面的操作步驟是用 1 mL 本產(chǎn)品進(jìn)行的微量提取的，細(xì)胞使用量一定要準(zhǔn)確，不能超過下述用量，否則將超出本產(chǎn)品的裂解能力，RNA 產(chǎn)量將急劇降低。如果樣品量大，請(qǐng)按比例增加各成份的用量。RNA 工作環(huán)境最好用高效無毒的 RNase 污染清除劑徹-底處理。

1.對(duì)貼壁細(xì)胞（10 平方厘米）：吸盡培養(yǎng)液，加入 1 mL 的本產(chǎn)品用槍充分吹打確保細(xì)胞全部裂解，然后將裂解液轉(zhuǎn)移至干凈的 1.5 mL 塑料離心管中，進(jìn)入第 6 步。

2.對(duì)懸浮細(xì)胞（五百萬至一千萬個(gè)）：離心收集細(xì)胞，吸盡液體，加入 1 mL 本產(chǎn)品，用槍充分吹打確保細(xì)胞全部裂解，然后將裂解液轉(zhuǎn)移到干凈的

1.5 mL 塑料離心管中，進(jìn)入第 6 步。

3.  對(duì)新鮮組織（50-100 mg）：將新鮮組織-剪切成小塊，放入 10 mL 或 15 mL 塑料離心管中，加入 1 mL 的本產(chǎn)品，用 Polytron 剪切式勻漿器冰上勻漿 30 秒左右，將勻漿液轉(zhuǎn)移至新的 1.5 mL 塑料離心管中， 進(jìn)入第 6 步。注意：對(duì)肝、脾、胰、腎等細(xì)胞分裂十分旺盛的組織（細(xì)胞中含大量正在復(fù)制的 DNA），使用量不要超過 30-50 mg，否則十分容易產(chǎn)生 DNA 污染。對(duì) 10 mg 以下的組織，最好加入本公司的微量RNA 助沉劑。

4.對(duì)非凍型 RNA 保存液保存的組織（50-100 mg）：先用紙吸去 RNA保存液后再剪切成小塊，其余操作同第 3 步。RNA 保存液處理后的組織韌性很強(qiáng)，勻漿時(shí)間需要適當(dāng)延長(zhǎng)。

5.對(duì)液氮中保存的組織（50-100 mg）：在研缽中研磨成粉，加入 1 mL本產(chǎn)品，用槍充分吹打確保細(xì)胞全部裂解，然后將裂解液轉(zhuǎn)移到干凈的

1.5 mL 塑料離心管中，進(jìn)入第 6 步。

6.在裝有裂解物/勻漿物的 1.5 mL 塑料離心管中加入 0.2 mL 自備氯仿， 振蕩器上充分振蕩混均 30 秒。注意：一定要把官底的溶液震蕩起來， 否則只是液面的振動(dòng)。

7. 13000-15000 g 室溫離心 3 分鐘。

8.將上清液（約 0.6 mL）轉(zhuǎn)移到另一干凈的 1.5 mL 塑料離心管中。下層有機(jī)相（藍(lán)色）和中間層含有 DNA 和蛋白質(zhì)，避免觸及，否則將產(chǎn)生蛋白質(zhì)和 DNA 污染。為保險(xiǎn)起見，可以留下 50-100uL 上清液不取。

9.對(duì)脂類豐富的組織（如脂肪組織和腦組織），需再重復(fù)氯仿抽提一到兩次以讓氯仿充分去除脂類分子。

10.在上清液中加入等體積的異丙醇，振蕩器上振蕩 30 秒混勻。

11.13000-15000 g 室溫離心 5 分鐘，離心底的側(cè)面將形成 RNA 沉淀。如果組織使用量低于 10 mg 或需要提高 RNA 回收率，可以將離心時(shí)間延長(zhǎng)到 20 或 30 分鐘。

12.小心吸棄上清液，注意不要吸棄 RNA 沉淀。

13.在含 RNA 沉淀的離心管中加入 1 mL 75%乙醇，振蕩混勻 30 秒。14. 13000-15000 g 室溫離心 1 分鐘。

15.小心吸棄上清液，注意不要吸棄 RNA 沉淀。

16.重復(fù)第 13-15 的洗滌步驟一次（也可以省略）。

17.短暫快速離心，用移液槍小心吸棄殘留乙醇(約 50 μL)。注意不要吸棄 RNA 沉淀。此步十分重要，否則殘留的乙醇會(huì)影響 RNA 的后續(xù)使用。

18.室溫放 1-2 分鐘后立即加入 50-100 μL RNase-free 水使RNA 沉淀溶解。千萬不要用真空離心法使 RNA 沉淀過于干燥，否則 RNA 將變得十分難溶。RNA 樣品可以立即使用或存放于-80℃待用。

19.RNA 的濃度可以用 pH 在 7.5-8.2 的 TE 緩沖液將 5-10 μL RNA 稀釋 10-20 倍后在 OD260 和 OD260 測(cè)光吸收，通過光吸收可以得出RNA 濃度（1 OD260 的 RNA=40 μg/mL），進(jìn)而計(jì)算出 RNA 的產(chǎn)量

（濃度×體積)和產(chǎn)率(RNA 產(chǎn)量/組織用量)。RNA 的產(chǎn)率隨組織的營養(yǎng)狀態(tài)和組織的種類不同而不同，一般來說，代謝旺盛的組織(如肝臟和腎臟)RNA 的產(chǎn)率高，代謝不旺盛的組織(如肌肉和脂肪組織)RNA 的產(chǎn)率低。肌肉、胎盤和腦組織一般是 1-2 μg RNA/mg 組織，肝、胰和腎組織一般是 5-10 μg RNA/mg 組織， 培養(yǎng)細(xì)胞一般是 5-15 μg/10E6 細(xì)胞。

20.RNA 的純度通過 OD260/OD280 來確定，一般在 1.8-2.1 之間即算合格。但即使低于此范圍，一般也不會(huì)影響 RT-PCR 等反應(yīng)。如果有蛋白質(zhì)污染，可以通過酚/氯仿抽提一次然后酒精沉淀去除，如果有多糖污染可以用本公司的 RNA 多糖清除劑去除。

選擇我們的動(dòng)物 RNA 提取液（Trizol），就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！