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實(shí)驗(yàn)室“透析”應(yīng)用介紹

來源:上海優(yōu)高玖貿(mào)易有限公司   2016年08月26日 12:40  

Spectrumlabs提供一系列用于緩沖液置換和小分子雜質(zhì)去除的透析產(chǎn)品,特別是即用型透析裝置,可為100μL – 10mL樣品透析提供的便利。

透析通過在半透膜兩側(cè),從高濃度一側(cè)向低濃度一側(cè)的擴(kuò)散過程,去除小分子。只有小于膜孔徑的分子可以通過膜,在全部料液中達(dá)到平衡。一旦達(dá)到平衡后,底物不再有“凈”移動(dòng),因?yàn)榉肿訉⒁韵嗤乃俾剩ㄟ^膜孔,進(jìn)入透析單元或出來。相反,不能通過膜孔的大分子,將被截留在其所處的膜的原有一側(cè)。

 

為去除不需要的底物,需要更換透析緩沖液,以形成新的濃度梯度。更換緩沖液后,顆粒會(huì)繼續(xù)從高濃度一側(cè)向低濃度一側(cè)移動(dòng),直到再次達(dá)到平衡。每次更換透析緩沖液,膜內(nèi)部的底物按兩個(gè)部分的體積差,被進(jìn)一步純化。例如,在100mL的透析緩沖液中透析1ml的樣品,平衡時(shí),可透析底物的濃度將被稀釋100倍。每更換100mL新的緩沖液,將使樣品再稀釋100倍。如更換3次100mL的透析緩沖液,且假定每次更換透析緩沖液前,均達(dá)到*平衡,樣品種底物的稀釋倍數(shù)將為100x100x100,即1,000,000倍。

 

 

影響透析速率的因素有很多,包括:1)透析緩沖液體積;2)緩沖液組成;3)緩沖液更換次數(shù);4)透析時(shí)間;5)溫度以及6)顆粒粒徑與膜孔徑的比值。相比僅稍小于膜孔的底物,遠(yuǎn)小于膜孔的底物會(huì)更快地達(dá)到平衡,即需要透過的分子的分子量與膜孔的截留分子量(MWCO)差別越大,透析速率越快。

 

透析膜管具有多種規(guī)格,一般,膜的MWCO表示為透析過后,可被膜90%截留的成分的分子量。MWCO的確認(rèn)需使用多種已知分子量的不同標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)。但常規(guī)來說,MWCO更適于球狀分子,而趨于線性的蛋白質(zhì),即使其分子量超過膜標(biāo)稱的MWCO規(guī)格,其也可能通過膜孔。對(duì)此,可以選擇MWCO更小的透析設(shè)備。對(duì)于DNA或RNA樣品,MWCO的選擇應(yīng)不超過其標(biāo)稱分子量的1/3,以避免樣品過多的損失。

 

從透析的影響因素可見,特定樣品所需的透析時(shí)間很難預(yù)測。為*更換緩沖鹽,一般實(shí)驗(yàn)時(shí),多使用樣品體積200-500倍的透析緩沖液,在室溫條件下透析6-8h,并至少更換3次透析緩沖液。zui后一次更換后,再4℃透析一日。這種方法也適合用于去除生物素標(biāo)記或交聯(lián)實(shí)驗(yàn)中過量的標(biāo)記試劑和反應(yīng)副產(chǎn)物。

 

 

此外,由于在透析過程中,分子是雙向透過半透膜的,且每種底物達(dá)到其自身平衡的過程與其它底物無關(guān),所以,較易發(fā)生樣品稀釋。如果某一底物的濃度在膜外側(cè)較高,且粒徑足夠小,可以自由通過膜孔,其會(huì)有從透析緩沖液進(jìn)入膜內(nèi)部樣品的“凈”移動(dòng)。

 

而水是非常小的分子,可以通過幾乎所有規(guī)格透析膜的膜孔。當(dāng)以較稀釋的緩沖液透析高溶質(zhì)濃度的樣品時(shí),會(huì)有通過膜進(jìn)入透析膜的水的“凈”移動(dòng)。當(dāng)樣品中含有甘油和某些糖時(shí),因其具有較強(qiáng)的吸濕性,擴(kuò)散通過膜達(dá)到平衡后,會(huì)顯著影響水的滲透性,導(dǎo)致樣品體積變化。

 

為降低水的移動(dòng)及其所導(dǎo)致的樣品體積的變化,透析時(shí)可使用“步進(jìn)式”方法,即需要使用低溶質(zhì)濃度緩沖液透析高溶質(zhì)濃度的樣品時(shí),可先用稍高濃度的透析緩沖液進(jìn)行透析,之后每次更換緩沖液時(shí),再逐步降低緩沖液濃度,并zui終達(dá)到所需的緩沖液濃度,從而降低在透析過程每個(gè)階段,樣品和透析緩沖液的水“濃度”的影響。

 

Spectrumlabs提供兩種材質(zhì)的透析膜——纖維素酯和再生纖維素,同時(shí)提供兩種不同處理規(guī)模,標(biāo)準(zhǔn)級(jí)和生物技術(shù)級(jí),后者更適于對(duì)純度較為敏感的生物學(xué)實(shí)驗(yàn),如涉及親和研究和核酸的實(shí)驗(yàn)。此外,仕必純提供預(yù)組裝的即用型透析裝置,用于小量樣品的透析處理,這種裝置操作簡便,且可保證較高的樣品收率,可用于HPLC樣品制備、載體藥物的體外溶出等實(shí)驗(yàn)。此外,仕必純可提供0.1-1,000kD的數(shù)十種膜MWCO規(guī)格,是目前市場上MWCO規(guī)格zui全的透析膜產(chǎn)品供應(yīng)商。

 

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