電子顯微鏡檢測細(xì)胞方法的信息介紹由濟(jì)南浩淼醫(yī)療設(shè)備有限公司為您提供。以下內(nèi)容會(huì)證明電子顯微鏡是觀察細(xì)胞形態(tài)的方法
一、儀器與試劑
射電子顯微鏡或掃描電子顯微鏡,組織切片機(jī),離心機(jī),離心涂片機(jī)。
戊二醛固定液:取25%戊二醛原液10ml,加入0.2mol/L PBS液50ml,再加入蒸餾水40ml,混勻,4℃保存。
鋨酸固定液:將含有1g鋨酸的小瓶浸入清潔液一晚,用雙蒸水沖洗數(shù)遍后,將小瓶放在盛有50ml雙蒸水的100ml棕色磨口瓶內(nèi),擊破鋨酸小瓶使其內(nèi)鋨酸溶于水,1~5ml小瓶分裝,避光,4℃保存。用時(shí)再稀釋1倍成1%的應(yīng)用液。
二、操作步驟
離心收集約5×106 細(xì)胞,用PBS洗滌兩次后,棄上清,加1ml 2.5%戊二醛懸浮細(xì)胞,移入1.5ml Ep管中,室溫下4 000r/min離心15min,固定細(xì)胞0.5~1h;
在磷酸緩沖液里漂洗1~2h或更長時(shí)間,盡量將戊二醛冼凈,用1%的鋨酸固定液固定30min~1h;
固定完畢后加入50%乙醇脫水10min→70%乙醇10min→90%乙醇10min→90%丙酮10min→100%丙酮三次各10min;
丙酮與環(huán)氧樹脂1:1包埋2h,再放入純包埋劑(環(huán)氧樹脂包埋全浸透)數(shù)小時(shí);
環(huán)氧樹脂包埋,62℃烤箱二天,進(jìn)行超薄切片,用醋酸鉛鈾雙染法進(jìn)行切片染色;
在透射電子顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核的變化,照相并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果;
三、結(jié)果判斷
電子顯微鏡是觀察細(xì)胞形態(tài)的方法,細(xì)胞核和細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)清晰易辨。凋亡細(xì)胞染色質(zhì)固縮并凝結(jié)成塊,聚集在核膜周邊呈新月狀或環(huán)狀小體,細(xì)胞漿濃縮,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)變疏松并與胞膜融合,形成一個(gè)個(gè)空泡,線粒體結(jié)構(gòu)無明顯改變。細(xì)胞凋亡的晚期,細(xì)胞核裂解為碎塊,產(chǎn)生凋亡小體。壞死細(xì)胞的染色質(zhì)稀疏呈細(xì)顆粒狀,分布無規(guī)律,邊界不清,細(xì)胞漿腫脹,細(xì)胞器結(jié)構(gòu)破壞,細(xì)胞膜不完整。
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