ELISA試劑盒屬固相免疫測定，抗原、抗體的只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，參加板孔中的標(biāo)本，其間的抗原并不是都有平等的和固相抗的機(jī)會，只需zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個(gè)逐，因此需經(jīng)分散才干到達(dá)反響的結(jié)尾。在這以后參加的酶符號抗體與固相抗原的也相同如此。這就是為何ELISA試劑盒反響老是需求必定時(shí)刻的溫育。
    有此測定（如間接法ELISA）需用稀釋的血清，可在試管中按規(guī)則的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中參加稀釋液，再在其間參加血清標(biāo)本，然后在微型震動器上震動1分鐘以確?；旌?。加酶物使用液和底物使用液時(shí)可用定量多道加液器，使加液進(jìn)程敏捷完結(jié)。在ELISA檢查試劑盒中通常有兩次抗原抗體反響，即加標(biāo)本和加酶物后?？乖贵w反響的完結(jié)需求有必定的溫度和時(shí)刻，這一保溫進(jìn)程稱為溫育（incubation），有人稱之為孵育，在ELISA檢查試劑盒中似不恰當(dāng)。
    ELISA試劑盒溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃（冰箱溫度）等。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體的合適溫度。在樹立ELISA方法作反響動力學(xué)研討時(shí)，實(shí)驗(yàn)標(biāo)明，兩次抗原抗體反響通常在37℃經(jīng)1-2小時(shí)，產(chǎn)品的生成可達(dá)高峰。為加快
    反響，可進(jìn)步反響的溫度，有些實(shí)驗(yàn)在43℃進(jìn)行，但不宜選用更高的溫度?？乖贵w反響4℃更為*，在放射免疫測定中多使反響在冰箱中，以形成zui多的沉積。但因所需時(shí)刻太長，在Elisa試劑盒中通常不予選用。