間接法成功的關(guān)鍵在于抗原的純度。雖然有時用粗提抗原包被也能取得實際有效的結(jié)果,但應盡可能予以純化,以提高試驗的特異性。特別應注意除去能與一般健康人血清發(fā)生反應的雜質(zhì),例如以 E.Coli 為工程酶的重組抗原,如其中含有 E.Coli 成份,很可能與受過 E.Coli 感染者血甭中的抗 E.Coli 抗體發(fā)生反應。抗原中也不能含有與酶標抗人 Ig 反應的物質(zhì),例如來自人血漿或人體組織的抗原,如不將其中的 Ig去除,試驗中也發(fā)生假陽性反應。另外如抗原中含有無關(guān)蛋白,也會因竟爭吸附而影響包被效果。
間接法中另一種干擾因素為正常血清中所含的高濃度的非特異性。病人血清中受檢的特異性 IgG 只占總 IgG 中的一小部分。IgG 的吸附性很強,非特異 IgG 可直接吸附到固相載體上,有時也可吸附到包被抗原的表面。因此在間接法中,抗原包被后一般用無關(guān)蛋白質(zhì)(例如牛血清蛋白)再包被一次,以封閉(blocking)固相上的空余間隙。另外,在技術(shù)過程中標本須先行稀釋(1:40~1:200),以避免過高的陰性本底影響結(jié)果的判斷。
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