每天用足夠的時(shí)間來維護(hù)色譜柱，您將節(jié)省更多用于處理色譜柱故障的時(shí)間，同時(shí)您的色譜柱的壽命也會(huì)變得更長(zhǎng)！色譜柱的使用壽命，除了與所分析的樣品和流動(dòng)相及使用頻率有關(guān)外，zui主要的是與日常的維護(hù)密切相關(guān)。 色譜柱的使用壽命主要是根據(jù)柱效和柱壓兩個(gè)指標(biāo)來衡量，如果一支色譜柱柱效太低或柱壓太高，通常被認(rèn)為該色譜 柱的使用壽命已經(jīng)結(jié)束。因此，延長(zhǎng)色譜柱使用壽命的關(guān) 鍵是，消除引起柱效下降和柱壓升高的因素。

一、流動(dòng)相的pH值

   由于硅膠基質(zhì)的填料中存在Si-C和Si-O鍵，流動(dòng)相超過其pH范圍將會(huì)導(dǎo)致硅膠基質(zhì)溶解和鍵合相碳鏈斷裂，使柱效下降，壽命變短。由于流動(dòng)相的pH控制不當(dāng)而對(duì)色譜柱造成的損害，通常很難使色譜柱恢復(fù)，因此必須認(rèn)真對(duì)待，嚴(yán)格控制流動(dòng)相的pH值。。

二、去除樣品和流動(dòng)相中的固體顆粒

    樣品和流動(dòng)相中含有的固體顆粒物質(zhì)會(huì)堵塞色譜柱篩板，篩板被堵不僅會(huì)引起柱壓升高，而且也會(huì)引起柱效下降，因?yàn)楹Y板的堵塞會(huì)引起液流不均，導(dǎo)致色譜峰形拖尾、變寬，甚至出現(xiàn)雙峰，從而使柱效下降。因此，建議使用超純水和色譜純?cè)噭?，在分析前?duì)樣品進(jìn)行超聲、針筒過濾，流動(dòng)相過0.45µm 濾膜，尤其是流動(dòng)相加入了緩沖鹽（如NaH2PO4等），必須過濾。

三、使用保護(hù)柱或在線過濾器

    樣品和流動(dòng)相經(jīng)過濾后并不能*消除固體顆粒物質(zhì)，因?yàn)楸玫哪p、密封圈和管路的老化也會(huì)產(chǎn)生固體顆粒物，這些固體顆粒被流動(dòng)相帶入色譜柱，堵塞篩板，導(dǎo)致柱壓升高、柱效下降。保護(hù)柱和在線過濾器上都有篩板，其孔徑與色譜柱篩板孔徑相同，因此可以阻止固體顆粒物質(zhì)到達(dá)色譜柱，有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升高在分析故障中占很大比例，因此，除對(duì)樣品和流動(dòng)相進(jìn)行過濾外，建議您在色譜柱進(jìn)樣端加上保護(hù)柱或在線過濾器。

四、正確使用緩沖鹽

    緩沖液可以提供離子平衡的反離子，并使流動(dòng)相保持一定的離子強(qiáng)度和p H 值，減少拖尾。緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機(jī)溶劑，因此緩沖鹽使用不當(dāng)會(huì)致其析出，堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙，使填料板結(jié)，柱壓上升；同時(shí)阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展，使色譜柱的保留能力下降，柱效降低。緩沖鹽析出后，去除非常困難，因此，正確的使用緩沖鹽對(duì)延長(zhǎng)色譜柱使用壽命非常重要。

正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出，因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結(jié)為一句話：使用前要過渡，使用后要沖洗。

具體方法如下：

1.等度條件：使用緩沖鹽前用過渡流動(dòng)相以1.0mL/min   流速?zèng)_洗20-30倍柱體積，然后再使用含有緩沖鹽的流動(dòng)相；使用后去除緩沖鹽的方法是用過度流動(dòng)相以1.0mL/min流速?zèng)_洗30倍柱體積，然后以純有機(jī)溶液沖洗30倍柱體積保存。

2.梯度條件：用含有緩沖鹽的流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫之前，用與初始流動(dòng)相組成相同的過渡流動(dòng)相以1.0mL/min流速?zèng)_洗30倍柱體積，再開始梯度的運(yùn)行；分析完成后，再用過渡流動(dòng)相以1.0mL/min沖洗色譜柱30倍柱體積，然后以純有機(jī)溶液沖洗30倍柱體積保存。

五、另外，在使用緩沖液的過程中還要注意以下幾點(diǎn)：

1.避免使用鹽酸鹽，鹽酸鹽對(duì)鋼質(zhì)有腐蝕作用；

2.緩沖液要現(xiàn)配現(xiàn)用，往往緩沖液是良好的菌類培養(yǎng)液，隔天或放置長(zhǎng)時(shí)間實(shí)驗(yàn)時(shí)會(huì)發(fā)生很多怪現(xiàn)象；

3.使用緩沖液要及時(shí)掌握pH范圍，做到胸中有數(shù)；

4.清洗液路和柱子時(shí)，有溫控可加熱到30攝氏度易于沖洗；

5.長(zhǎng)時(shí)間用緩沖溶液要注意觀察接頭處有無析出，若有白色鹽類析出，定期用10%硝酸沖洗液路（拆下柱子，沖洗30mL10%硝酸溶液，再用5倍水沖洗）可以避免液路的堵塞；

6.選擇緩沖液要用可靠的試劑，避免不純的鹽類造成不必要的麻煩；

過渡流動(dòng)相是指有機(jī)相和水相的組成與分析流動(dòng)相相同，但是不含緩沖鹽的溶液。

六、防止強(qiáng)保留物質(zhì)在色譜柱中存留

    強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物在色譜柱中累積，對(duì)樣品中的化合物產(chǎn)生額外的保留行為，不僅引起峰形變寬、拖尾，使柱效下降，同時(shí)也會(huì)引起保留時(shí)間的變化，累積到一定程度時(shí)還會(huì)導(dǎo)致柱壓升高。由于強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物對(duì)色譜分離的影響是一個(gè)累積效應(yīng)，需要一定的時(shí)間才會(huì)體現(xiàn)出來，但對(duì)許多樣品特別是復(fù)雜樣品而言，很難判斷其是否含有強(qiáng)保留物質(zhì)，因此要防止強(qiáng)保留物質(zhì)的累積，需要在每天的日常維護(hù)中用純甲醇或乙腈30倍柱體積清洗色譜柱。

七、色譜柱的再生

1.反相柱

以下列溶劑順序沖洗30倍柱體積

乙腈－水（5:95） →    四氫呋喃   →   乙腈－水（5:95）

2.正相柱

以下列溶劑順序沖洗30倍柱體積

正己烷   →  二氯甲烷  →  異丙醇   →  二氯甲烷  →  流動(dòng)相

3.硅膠柱（Silica）除水

30mL 2.5% 2,2 二甲氧基丙烷和2.5%冰醋酸正己烷溶液沖洗柱子