如今,ELISA實(shí)驗(yàn)在科研領(lǐng)域應(yīng)用廣泛,以靈敏度高和特異性強(qiáng)的特點(diǎn)被廣大科研工作者親睞,那在ELISA實(shí)驗(yàn)材料上的選擇,有那些我們值得注意的地方呢?一起跟著恒遠(yuǎn)小編來看看吧!
一、固相載體的選擇
不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選,用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
二、包被抗體(或抗原)的選擇
將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間,吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時,
三、酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇
首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份),然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
四、酶的底物及供氫體的選擇
對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。
ELISA試劑盒性能特點(diǎn)
一、準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。
二、靈敏度:zui低檢測濃度小于1.0 ng/mL。
三、特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
四、重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
五、貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
六、有效期:6個月
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