小分子藥物研發(fā)中，篩選能有效結(jié)合目標蛋白的分子是非常耗時耗（財）力的一個環(huán)節(jié)，但又是必須進行的工作。高失敗率源于結(jié)合情況的錯綜復雜，體外生化實驗的結(jié)合效果，往往不能很好的在細胞水平進行重現(xiàn)。這其中可能是因為分子在穿越細胞膜時，出現(xiàn)了被修飾；也可能是因為純化蛋白和真實細胞環(huán)境的蛋白構(gòu)象不同。例如，在生化水平顯示很好結(jié)合效果的分子，在細胞水平可能結(jié)合的是另一個蛋白。是不是很崩潰……

試想，如果有一個高通量解決方案讓你可以直接在細胞水平進行小分子結(jié)合相應靶向蛋白的驗證，開不開心，意不意外？

這個方案就是Alpha^®-CETSA^®！

什么是CETSA^®？

CETSA^®是細胞熱遷移實驗（Cellular Thermal Shift Assay）的簡稱，是PELAGO公司2012年在歐洲注冊的技術(shù)。該技術(shù)基于的原理是：每種蛋白質(zhì)都有自身的熱熔曲線（如下圖）。隨著溫度的升高，蛋白質(zhì)會發(fā)生降解（藍色曲線）；當?shù)鞍踪|(zhì)結(jié)合小分子以后，該復合蛋白的熱熔曲線會右移（紅色虛線），即相同溫度下，未降解蛋白的量會提高。CETSA^®實驗的樣品來源十分靈活，可以是細胞，也可以是活體給藥以后的組織樣本。

傳統(tǒng)的CETSA^®對于天然構(gòu)象蛋白的檢測模式主要有Western-Blot和MS方法，這兩種方法都無法實現(xiàn)高通量的篩選。2019年7月，PELAGO公司正式和PerkinElmer公司達成戰(zhàn)略合作協(xié)議，推出高通量，高靈敏度的CETSA^®HT檢測方案，即Alpha^®-CETSA^®

Alpha^®-CETSA^®的操作

1.樣品和化合物進行孵育。

2.進行熱休克操作（建議在PCR儀上進行該操作）。

3.加入合適的裂解液。

4.加入Alpha^® CETSA^®檢測試劑。

5.在具有Alpha^®功能的酶標儀上檢測。

新酶標儀加載Alpha^®功能

PerkinElmer公司的Victor NIVO新款酶標儀加載了Alpha^®功能，這是目前可以開展Alpha^®CETSA^®檢測細胞水平蛋白-分子相互作用的小的儀器。

目前，PerkinElmer和PELAGO一起推出的蛋白靶點試劑盒有Akt1，BCL-2，EGFR，MEK1和p38 MAKP，工具微珠2套，方便客戶靈活使用這項技術(shù)。更多的商品化試劑盒也會陸續(xù)推出。

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