目前動物ELISA試劑盒在實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)相當(dāng)普及,絕大多數(shù)ELISA試劑盒都是用于技術(shù)未知樣本中抗原的濃度。用商業(yè)化試劑盒當(dāng)然比自己慢慢摸條件快得多,ELISA試劑盒不僅可以讓實(shí)驗(yàn)更便利,往往還更加精確。
ELISA試劑盒的特異性與試劑盒的關(guān)鍵組分--抗體對有關(guān),若抗體對中之一為多抗,另一個必須為單抗,建議使用雙單抗。在選擇市面上的試劑盒時,先閱讀相關(guān)產(chǎn)品的說明書,了解試劑盒的特異性和交叉反應(yīng)性。
與其他免疫分析方法一樣,ELISA的基本原理是利用抗原抗體反應(yīng)的特異性,通過將待測物與酶連接,然后酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng),其所生成的顏色深淺與待測抗原(或抗體)的含量成正比。這種有色產(chǎn)物可用肉眼、光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡觀察,也可以用分光光度計(酶標(biāo)儀)加以測定。
由于ELISA是基于抗原抗體反應(yīng)的特異性,這意味著該種方法的測定對象既可為抗原也可為抗體:當(dāng)被分析樣本為抗原時,技術(shù)試劑可針對該種抗原產(chǎn)生特異性的抗體;當(dāng)被分析樣本為抗體時,則其目標(biāo)抗原可用作結(jié)合的試劑。
由于動物ELISA試劑盒保存的特殊性,使得不少的操作者對冷凍后的產(chǎn)品產(chǎn)生了疑問:ELISA技術(shù)試劑盒被冷凍后再使用有影響嗎?對此,ELISA技術(shù)試劑盒技術(shù)員建議ELISA試劑盒解凍后一次用完,并作出解釋:
ELISA技術(shù)試劑盒的保質(zhì)期一般都是在一年,如果保存得當(dāng)?shù)脑?,不會出現(xiàn)問題的。但不要反復(fù)凍融。當(dāng)然如果是正常的ELISA試劑盒,應(yīng)該放在4左右冰箱保存。
但要注意的是,如果將試劑盒剛從冰箱里面拿出來就立即使用的話,可能會影響,其直接的后果是對一些弱陽性標(biāo)本的技術(shù)出現(xiàn)假陰性。建議:先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20分鐘以上后,再進(jìn)行測定,以使試劑盒在ELISA技術(shù)試劑盒使用前與室溫平衡。這樣做的目的,主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中,能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求的高度,以滿足測定要求。
已開封或者使用后,剩余試劑仍需按照試劑瓶標(biāo)簽所示的溫度保存,動物ELISA試劑盒開封后的酶標(biāo)板要加干燥劑后密封保存于-20,避免潮濕。
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