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實驗室透析常見問題解答

來源:上海聯(lián)碩生物科技有限公司   2020年07月15日 09:28  

Q1:如何準(zhǔn)備透析膜管?

透析膜管的準(zhǔn)備因膜管材質(zhì)和生產(chǎn)工藝的差別而有所不同。注意,我們不推薦煮沸處理,因其可能損壞膜管并改變膜孔徑。
1、即用型 RC 膜,CE 膜可以用 DI 水沖洗 15-30 分鐘,去除防腐劑處理液。
2、Spectra/PorR7 標(biāo)準(zhǔn)級 RC 膜已經(jīng)預(yù)處理,去除了重金屬和硫化物,只需在去離子水中浸泡 15-30 分鐘,去除疊 dan 化鈉即可。
3、Spectra/PorR 1-6 標(biāo)準(zhǔn)級 RC 膜,一般情況下,在水中漂洗足以去除甘油或防腐劑,而對于親和研究之類極其敏感的透析應(yīng)用或者重金屬及硫化物會影響透析樣品下游分析的應(yīng)用,可能需要一些額外的處理以去除在生產(chǎn)過程中引入的痕量水平重金屬及硫化物。
 
Q2:透析的原理是什么?一般需要多長時間才能完成?
1、透析是指溶質(zhì)在濃度梯度的驅(qū)使下,選擇性擴(kuò)散通過半透膜,從而達(dá)到大 / 小分子分離,膜兩側(cè)濃度平衡,即小顆粒的溶質(zhì)通過膜,而大分子物質(zhì)不能通過,被截留在膜另一邊。
2、如果將樣品置于透析膜管內(nèi),通過置換膜管外部的透析緩沖液,可將小顆粒物質(zhì)清除,從而達(dá)到純化大分子物質(zhì)的目的。一般來說,一天之內(nèi)置換 3-5 次緩沖液,然后在室溫條件下,放在攪拌臺上隔夜透析,即可達(dá)到的透析結(jié)果。標(biāo)準(zhǔn)的透析操作一般需要 16-24 小時。許多因素會影響透析效率,包括:擴(kuò)散系數(shù)、pH 值、溫度、時間、物質(zhì)濃度、樣品體積、透析緩沖液體積、透析緩沖液的置換次數(shù)、膜表面積、膜厚度、分子帶電荷及緩沖液攪拌速率。
 
Q3:透析一個樣品需要多少體積的透析緩沖液?緩沖液置換頻率怎么安排?
透析緩沖液的體積越大,小分子擴(kuò)散的驅(qū)動力越大。我們一般推薦緩沖液和樣品的體積比為 100:1。當(dāng)擴(kuò)散速率降低,膜兩側(cè)溶液趨于平衡時,通過置換緩沖液,可維持小分子擴(kuò)散驅(qū)動力和透析速率。我們一般推薦在 12-24 小時內(nèi),置換緩沖液 2 到 3 次,具體安排如下:
1、緩沖液置換:透析開始后 2-3 小時
2、二緩沖液置換:透析開始后 4-5 小時
3、后一次緩沖液置換:透析隔夜之前
 
Q4:如何選擇正確的截留分子量(MWCO)?
截留分子量應(yīng)該竟可能的大,以使透析速率更大化。但是,為了獲得大的樣品回收率,選擇的截留分子量應(yīng)至少為需純化的大分子物質(zhì)分子量的一半。對于需對幾種分子進(jìn)行分離的應(yīng)用,分子之間的分子量差至少為 5 倍,才能完成有效的膜透析。若不能滿足分子量差的要求,可能需要使用其它的分離技術(shù),如色譜方法或切向流過濾。
 
Q5:哪種膜的蛋白質(zhì)結(jié)合率低?
每種膜對不同的分子具有不同的親和性。對于球狀蛋白,相對的結(jié)合親和性由低到高為 CE< RC。

Q6:怎樣為膜管選擇合適大小的膜夾?
1、標(biāo)準(zhǔn) RC 膜(Spectra/Por 1-7)和生物技術(shù)級 RC 膜由柔韌的再生纖維素聚合物制造,可使用任何一種透析膜夾密封。生物技術(shù)級 CE & PVDF 膜由相對剛性的聚合物制造,需要使用相對溫和的通用膜夾。鑒于通用膜夾對于所有類型的膜管都能起到很好的密封作用,如不確定選擇哪種膜夾合適,使用通用膜夾即可。標(biāo)準(zhǔn)膜夾一般只用于標(biāo)準(zhǔn)級RC 膜管。
2、膜夾的密封寬度一般需比膜管的扁平寬度長 4-10 mm。通用膜夾的小密封寬度為 50 mm。對于所有扁平寬度規(guī)格的膜管,均有相應(yīng)的膜夾可供選擇。

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