7月30日周四報(bào)道分享，Elisa（酶聯(lián)免疫吸附測定）實(shí)驗(yàn)部分經(jīng)驗(yàn)總結(jié)分享@今日頭條，Elisa（酶聯(lián)免疫吸附測定）實(shí)驗(yàn)是目前應(yīng)用比較較為廣泛的一種實(shí)驗(yàn)方法，其技術(shù)項(xiàng)目可謂是免疫學(xué)反應(yīng)以及在實(shí)驗(yàn)應(yīng)用到科研生產(chǎn)中較為廣泛以及靈敏的技術(shù)手段。雖然Elisa實(shí)驗(yàn)用的地方比較多，但是很多剛剛操作實(shí)驗(yàn)的新手會(huì)出現(xiàn)很多問題，另外就是很多老客戶操作過程中也會(huì)出現(xiàn)或大或小的問題，其實(shí)這些問題很多時(shí)候都是在實(shí)驗(yàn)前以及實(shí)驗(yàn)過程中很多細(xì)節(jié)沒有注意到導(dǎo)致的，很多客戶在剛開始做Elisa（酶聯(lián)免疫吸附測定）實(shí)驗(yàn)時(shí)因?yàn)闆]有做過，所以在做的過程中就會(huì)面臨很多的困難，雖然有師兄師姐鋪路作為指導(dǎo)，但自己在單獨(dú)操作的時(shí)候還是常常會(huì)做得一塌糊涂，比如說以下這些情況都是會(huì)經(jīng)常發(fā)生的：花板，假陽性，全顯色，全部顯色，顯色比空白還低等等，有時(shí)候很多客戶自己也為此苦惱過很長一段時(shí)間，不知道問題出在哪里，更不知道該怎么繼。

但是隨著自己的心態(tài)越來越好，以及在實(shí)驗(yàn)過程中技術(shù)水平得到一些提高，很多時(shí)候或多或少地也掌握了Elisa（酶聯(lián)免疫吸附測定）實(shí)驗(yàn)的脾氣，也就是我們常說的熟能生巧，現(xiàn)在的話做Elisa（酶聯(lián)免疫吸附測定）已是輕車熟路了，但是放在以前技術(shù)一種抗體就得用整整一下午甚至一天還算得頭昏眼花的，現(xiàn)在的話就算你給我十個(gè)八個(gè)的從包被到顯色，基本上都能一個(gè)工作日就能基本搞定。所以動(dòng)手的事情還是得熟能生巧，經(jīng)常做才能更熟悉的操作，Elisa（酶聯(lián)免疫吸附測定）實(shí)驗(yàn)部分經(jīng)驗(yàn)總結(jié)分享@今日頭條，由我們?yōu)榇蠹易鳛橐粋€(gè)講解，起到一個(gè)拋磚引玉的作用，也是我們?cè)?/span>做Elisa（酶聯(lián)免疫吸附測定）實(shí)驗(yàn)多年的一個(gè)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，希望能夠?qū)Υ蠹业膶?shí)驗(yàn)有所幫助。

Elisa（酶聯(lián)免疫吸附測定）實(shí)驗(yàn)部分經(jīng)驗(yàn)總結(jié)分享@今日頭條，在Elisa實(shí)驗(yàn)中，關(guān)于包被原的性質(zhì)真的很重要，比如蛋白的濃度，還有就是是否降解，這些都關(guān)系到你做出來的抗體能否被其識(shí)別，所以保存抗原這一步很重要，希望大家能夠重視，我們?cè)?/span>做重組蛋白時(shí)，技術(shù)老師都嚴(yán)格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個(gè)道理。

還有就是有的包被原有可能不是蛋白，對(duì)于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對(duì)其改造再加以包被，關(guān)于包被的方法簡要列出如下:①親和素生物素:先親和素先包被載體，加入生物素化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。②脂類物質(zhì):可將其在有機(jī)溶劑(例如乙醇)中溶解后加入Elisa（酶聯(lián)免疫吸附測定）板孔中，開蓋置冰箱過夜或冷風(fēng)吹干，待酒精揮發(fā)后，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面。③小分子必須依靠和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。

Elisa（酶聯(lián)免疫吸附測定）實(shí)驗(yàn)部分經(jīng)驗(yàn)總結(jié)分享@今日頭條，關(guān)于ELISA包被液的選擇，一般來講，我們都是選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但是有時(shí)由于試驗(yàn)的需要以及包被原的特殊性，也可能采用中性的緩沖溶液來包。但是應(yīng)注意以下原理：由于蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用，這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。

具體的試驗(yàn)還要有堅(jiān)固的理論外也要實(shí)踐，看一下終可不可以應(yīng)用到自己試驗(yàn)當(dāng)中去。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。

Elisa（酶聯(lián)免疫吸附測定）實(shí)驗(yàn)部分經(jīng)驗(yàn)總結(jié)分享@今日頭條，關(guān)于ELisa實(shí)驗(yàn)中的封閉：其實(shí)就是繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程。封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙，從而排斥Elisa（酶聯(lián)免疫吸附測定）后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。常用封閉劑有：0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉，比較價(jià)廉，可以高濃度使用(5%-10%);還有一些稀有用到的各種動(dòng)物血清(主要為了排除相似蛋白干擾)和酪蛋白等等。但終選用什么，要依據(jù)試驗(yàn)具體來實(shí)踐。

Elisa（酶聯(lián)免疫吸附測定）實(shí)驗(yàn)部分經(jīng)驗(yàn)總結(jié)分享@今日頭條，關(guān)于ELisa實(shí)驗(yàn)中的洗滌板：可以說在Elisa（酶聯(lián)免疫吸附測定）操作中，洗滌是主要的關(guān)鍵技術(shù)，也是Elisa實(shí)驗(yàn)的核心。因?yàn)榫郾揭蚁┑人芰蠈?duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，為達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的，清除殘留在板孔中游離的物質(zhì)，以及非特異性地吸附的干擾物質(zhì)，在洗滌時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。所以在洗板時(shí)會(huì)有一定誤差，人為因素很大(當(dāng)然有條件的用洗板機(jī)除外)，洗的不*或串了孔，對(duì)如此靈敏的Elisa（酶聯(lián)免疫吸附測定）系統(tǒng)可是不小的影響。

Elisa（酶聯(lián)免疫吸附測定）實(shí)驗(yàn)部分經(jīng)驗(yàn)總結(jié)分享@今日頭條，ELIsa實(shí)驗(yàn)中關(guān)于加抗體標(biāo)本(和二抗):注意該換槍頭時(shí)一定要換槍頭。標(biāo)本稀釋一般可用PBS稀釋，也可用封閉液去稀釋。如需加二抗，還要注意二抗的工作濃度，太高浪費(fèi)，太低則著色淺，這些都是需要注意的事項(xiàng)。

Elisa（酶聯(lián)免疫吸附測定）實(shí)驗(yàn)部分經(jīng)驗(yàn)總結(jié)分享@今日頭條，關(guān)于Elisa實(shí)驗(yàn)顯色:顯色系統(tǒng)又很多，我們一開始做的時(shí)候，要選擇適宜的顯色系統(tǒng)。注意顯色系統(tǒng)酶活性底物的保存HRP結(jié)合物加硫柳泵，AP結(jié)合物可加疊氮鈉。

Elisa（酶聯(lián)免疫吸附測定）實(shí)驗(yàn)部分經(jīng)驗(yàn)總結(jié)分享@今日頭條，在Elisa實(shí)驗(yàn)中，每次做盡量要把陰陽空三個(gè)對(duì)照做好，如出現(xiàn)問題也好分析，這一點(diǎn)要提前做好準(zhǔn)備。

Elisa（酶聯(lián)免疫吸附測定）實(shí)驗(yàn)部分經(jīng)驗(yàn)總結(jié)分享@今日頭條，以上這些就是在ELisa實(shí)驗(yàn)中的部分經(jīng)驗(yàn)總結(jié)分享，僅供大家作為參考，希望對(duì)大家在操作Elisa實(shí)驗(yàn)的時(shí)候能有所幫助，另外，購買我司Elisa試劑盒，可以享受免費(fèi)代測服務(wù)哦，我司供應(yīng)產(chǎn)品有Elisa試劑盒，生化試劑盒，生化試劑，中藥標(biāo)準(zhǔn)品，進(jìn)口試劑代理，技術(shù)服務(wù)等，歡迎大家咨詢訂購。