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激光共聚焦顯微鏡是近代先進的細胞生物醫(yī)學分析儀器之一。它是在熒光顯微鏡成像的基礎上加裝激光掃描裝置，使用紫外光或可見光激光熒光探針，利用計算機進行圖像處理，不僅可觀察固定的細胞、組織切片，還可對活細胞的結(jié)構、分子、離子進行實時動態(tài)地觀察和檢測。
目前，激光掃描共聚焦顯微技術已用于細胞形態(tài)定位、立體結(jié)構重組、動態(tài)變化過程等研究，并提供定量熒光測定、定量圖像分析等實用研究手段，結(jié)合其他相關生物技術，在形態(tài)學、生理學、免疫學、遺傳學等分子細胞生物學領域得到廣泛應用。
下面讓我們一起來了解一下激光共聚焦顯微鏡的應用有哪些吧
1、組織和細胞中的定量熒光測定
激光掃描共聚焦顯微鏡可以從固定和熒光染色的標本以單波長、雙波長或多波長模式，對單標記或多標記的細胞及組織標本的共聚焦熒光進行數(shù)據(jù)采集和定量分析，同時還可以利用沿縱軸上移動標本進行多個光學切片的疊加， 形成組織或細胞中熒光標記結(jié)構的總體圖像，以顯示熒光在形態(tài)結(jié)構上的定位。 常用于原位分子雜交、腫瘤細胞凋亡觀察、單個活細胞水平的 DNA 損傷及修復等定量分析。
2、細胞間通訊的研究
動物和植物細胞中縫隙連接介導的胞間通信在細胞增殖和分化中起著重要作用。 激光掃描共聚焦顯微鏡可通過觀察細胞縫隙連接分子的轉(zhuǎn)移來測量傳遞細胞調(diào)控信息的一些離子、小分子物質(zhì)。
該技術可以用于研究胚胎發(fā)生、生殖發(fā)育、神經(jīng)生物學、腫瘤發(fā)生等過程中縫隙連接通訊的基本機制和作用，也可用于鑒別對縫隙連接作用有潛在毒性的化學物質(zhì)。
3、細胞物理化學測定
激光掃描共聚焦顯微鏡可對細胞形狀、周長、面積、平均熒光強度及細胞內(nèi)顆粒數(shù)等參數(shù)進行自動測定。 能對細胞的溶酶體、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、細胞骨架、結(jié)構性蛋白質(zhì)、DNA、RNA、酶和受體分子等細胞內(nèi)特異結(jié)構的含量、組分及分布進行定量、定性、定時及定位測定。
4、細胞內(nèi)鈣離子和 pH 值動態(tài)分析
激光掃描共聚焦顯微鏡技術是測量若干種離子濃度并顯示其分布的有效工具，對焦點信息的有效辨別使在亞細胞水平顯示離子分布成為可能。 利用熒光探針，激光掃描共聚焦顯微鏡可以測量單個細胞內(nèi) pH 和多種離子(Ca、K、Na、Mg)在活細胞內(nèi)的濃度及變化。
一般來說，電生理記錄裝置加攝像技術檢測細胞內(nèi)離子量變化的速度相對較快，但其圖像本身的價值較低，而激光掃描共聚焦顯微鏡可以提供更好的亞細胞結(jié)構中鈣離子濃度動態(tài)變化的圖像，這對于研究鈣等離子細胞內(nèi)動力學有意義。
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