膠原酶（膠原蛋白水解酶）

一種從細(xì)菌中提取出來的酶,對膠原有很強(qiáng)的消化作用.適于消化纖維性組織、上皮組織以及癌組織,它對細(xì)胞間質(zhì)有較好的消化作用,對細(xì)胞本身影響不大,可使細(xì)胞與膠原成分脫離而不受傷害.該酶分離效果好,即使有鈣、鎂離子存在仍有活性,故可用PBS和含血清（或BSA）的培養(yǎng)液配制,即操作簡便又可提高細(xì)胞成活率,zui終濃度200u/mL  此酶消化作用緩和,無需機(jī)械振蕩。

市面賣的膠原酶一般是100mg一瓶，可以直接加100mlPBS或DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基（更佳）配置，濃度即為0.1%。消化大量組織，應(yīng)提高濃度到0.2% 0.3%，再添加少量BSA或FBS（提高細(xì)胞活性）。

它能在生理PH和溫度條件下特異性地水解天然膠原蛋白的三維螺旋結(jié)構(gòu)，而不損傷其它蛋白質(zhì)和組織。膠原酶的化學(xué)本質(zhì)是一種蛋白質(zhì)，因此，這對溫度、PH和導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性的各種因素均非常敏感，極易受到外界條件的影響而改變其本身的構(gòu)象和性質(zhì)。

膠原酶（collagenase）是從溶組織梭狀細(xì)胞芽孢桿菌提取制備的，主要水解結(jié)締組織中膠原蛋白成分。當(dāng)擬消化的組織較硬，內(nèi)含較多結(jié)締組織或膠原成分時，用胰蛋白酶解離細(xì)胞的效果較差，這時可采用膠原酶解離細(xì)胞法。 膠原酶僅對細(xì)胞間質(zhì)有消化作用而對上皮細(xì)胞影響不大。因此適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織，可使上皮細(xì)胞與膠原成分分離而不受損害。常用劑量為zui終濃度200U/ml。膠原酶分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝細(xì)胞專用膠原酶，要根據(jù)所要分離消化的組織類型選擇膠原酶類型。

膠原酶I型 : 含有比較均勻的各種酶活力（包括膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性）， 主要用于上皮、肝、肺、脂肪和腎上腺組織細(xì)胞的分離。

膠原酶II型 : 含有更高的梭菌蛋白酶活性，適用于肝臟，骨，腎，甲狀腺，心臟和唾液腺組織細(xì)胞的分離，更適合消化間質(zhì)細(xì)胞。

膠原酶 III型： 含有較低的蛋白酶活性，常用于乳腺細(xì)胞的制備。

膠原酶IV型 ：含有低胰酶活性，通常用于胰島細(xì)胞的制備，或者需要維持受體完整性的細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)。

膠原酶V型 ：可用于胰腺小島組織的分離，結(jié)締組織分離。

組織量：酶液=1：3左右。

三，中性蛋白酶

中性蛋白酶只水解由亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸等疏水大分子氨基酸提供氨基的肽鍵。對不同氨基酸構(gòu)成的肽鍵的水解能力，因酶的來源而異，大體是亮氨酸>苯丙氨酸>酪氨酸。

• 彈性蛋白酶，由動物的胰臟用水提取而得，也可用細(xì)菌的培養(yǎng)液在低溫下用水提取而得。

彈性蛋白酶 可使結(jié)締組織蛋白質(zhì)中的彈性蛋白消化分解，包括肽鍵結(jié)合的、酰胺結(jié)合的和酯結(jié)合的進(jìn)行加水分解。作用的最適pH值7.8，最適作用溫度25℃。

胰蛋白酶應(yīng)用廣泛，特異性也差，一般用在間質(zhì)少的細(xì)胞組織； 中性蛋白酶作用相對特異性，在皮膚，腸道，胃這里用的多點(diǎn)，比胰蛋白酶也要溫和點(diǎn)，常與膠原酶混合消化。

以皮膚為例，胰蛋白酶既破壞橋粒也破壞半橋粒，其作用部位是基底層細(xì)胞和其上的棘層細(xì)胞，而中性蛋白酶只破壞半橋粒，不影響表皮細(xì)胞之間的連接，作用部位在基底膜Iv型膠原和纖維粘連蛋白。

對于比較難消化的組織，可以混合酶一起用。比如：胰酶和膠原酶一起用，膠原酶和彈性蛋白酶一起用。也可以先用膠原酶消化，再用胰酶短時間消化獲得目的細(xì)胞。