熒光顯微鏡一般都用高強(qiáng)度的汞燈做激發(fā)光源。使用濾色片把不需要的光濾去,只留下激發(fā)熒光集團(tuán)的高強(qiáng)度很純的光線。這個單色的光線通過物鏡照射到樣本上之后,樣本會被激發(fā)出發(fā)射光(熒光),熒光和激發(fā)光都會沿著物鏡光路返回,這樣的話,就需要用一個二相色鏡把激發(fā)光濾去,只讓我們需要看到的熒光透過。
熒光顯微鏡的應(yīng)用要點
熒光顯微鏡的應(yīng)用要點
熒光顯微鏡是利用“光化熒光”成像,如果所選激發(fā)波長在肉眼所看不見的近紫外光區(qū)(320~400nm),熒光的發(fā)射光譜也較普通光鏡光源的平均波長短,光學(xué)分辨率提高。高能量的光子與電子碰撞,使得電子從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)。激發(fā)態(tài)的電子很不穩(wěn)定,會重新回落到基態(tài),這個過程中會消耗部分熱能,并發(fā)出新的光子。新的光子能量比起初的光子能量低,因此波長更長。由于新的光子波長區(qū)別于入射光的光子波長,通過一定的光學(xué)處理方法將兩束不同波長的光分開,從而使我們只看到發(fā)射出來的新光子(熒光信號),也就是熒光顯微鏡看到的熒光圖像。
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