手機版
化工儀器網(wǎng)手機版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
微滴式數(shù)字PCR儀熱循環(huán)程序的主體是變性-退火（復(fù)性）-延伸三個溫控步驟的循環(huán)。無論是常規(guī)PCR、熒光定量PCR還是數(shù)字PCR退火溫度是反應(yīng)特異性最關(guān)鍵的參數(shù)之一。
微滴式數(shù)字PCR儀退火溫度設(shè)置得太低可能導(dǎo)致非特異性PCR產(chǎn)物的擴增；退火溫度過高可能會降低PCR擴增效率，降低目標(biāo)產(chǎn)物的產(chǎn)量。
微滴式數(shù)字PCR儀理想的退火溫度跟多個因素有關(guān)。要找到理想的Ta溫度，需要嘗試不同的溫度下重復(fù)測試相同的反應(yīng)體系，這需要耗費更多時間和試劑耗材。
其實與經(jīng)典PCR反應(yīng)一樣，使用具有溫度梯度功能的熱循環(huán)儀可以很容易地確定微滴式數(shù)字PCR反應(yīng)體系理想的退火溫度，在一次實驗中即可同時測試8個不同退火溫度，以篩選出理想的溫度條件。
所謂溫度梯度，即在標(biāo)準(zhǔn)的96孔PCR儀中，各行/列在同一個溫度步驟中產(chǎn)生不同的溫度。在一次運行中即可考察不同溫度對PCR擴增效果的影響，極大地減少實驗次數(shù)，避免重復(fù)實驗產(chǎn)生的不確定因素造成的影響。
對于某些難度更大的稀有突變檢測實驗中，由于野生型背景的干擾以及引物探針設(shè)計困難，很可能出現(xiàn)非特異性擴增。這時ddPCR體系的退火溫度不僅要確保陽性微滴和陰性微滴的區(qū)分，還要確保僅發(fā)生非特異性的微滴與特異性擴增的微滴明確分開。
在沒有溫度梯度功能加持的情況下，相同的數(shù)字PCR體系優(yōu)化和構(gòu)建可能需要經(jīng)過十?dāng)?shù)次重復(fù)實驗來測試不同退火溫度條件下的實驗效果。此外也需要指出，并非所有的數(shù)字PCR技術(shù)都能通過溫度梯度的方式優(yōu)化檢測體系，目前僅兼容標(biāo)準(zhǔn)PCR熱循環(huán)儀的數(shù)字PCR平臺才能使用溫度梯度熱循環(huán)程序。溫度梯度功能是快速優(yōu)化、構(gòu)建數(shù)字PCR反應(yīng)體系的利器，能大大減少體系優(yōu)化階段數(shù)字PCR試劑耗材的額外消耗，縮短工作時間，快速取得理想的實驗結(jié)果。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心