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流式細胞術數(shù)據(jù)處理與分析

來源:北京眾仁鑫商貿(mào)有限公司   2021年10月22日 09:30  

數(shù)據(jù)的顯示通??煞譃橐痪S單參數(shù)直方圖(histogramplot)、二維點圖(dotplot)、二維等高圖(contour)和假三維圖(pseudo3D)等。下面簡述zui常用的單參數(shù)直方圖和二維點圖。

1. 單參數(shù)直方圖單參數(shù)直方圖是一維數(shù)據(jù)用得最多的圖形,可用來進行定性分析和定量分析。橫坐標表示熒光信號或散射光信號強度的相對值,其單位用“道數(shù)”(channel)表示,橫坐標可以是線性的,也可以是對數(shù)的。縱坐標通常代表細胞出現(xiàn)的頻率或相對細胞數(shù)。下面以研究細胞周期為例說明如何分析單參數(shù)直方圖所表達的信息。

單參數(shù)直方圖

經(jīng)DNA特異性染料(如P1)染色的細胞群體,通過流式細胞儀測量區(qū)受激光照射后發(fā)出特異性熒光,在一定條件下,熒光強度與細胞內(nèi)的DNA含量成正比,DNA含量高的細胞發(fā)射的熒光強,反之則弱。

DNA含量與細胞數(shù)目的關系,即2N(2倍體)代表GO/G1期細胞,4N(4倍體)代表G2/M期細胞,兩者中間代表S期細胞。這是典型的以2倍體和4倍體細胞為主的流式DNA圖。通過上述信息可得到所測細胞群中增殖細胞的數(shù)量。

2. 二維點圖單參數(shù)直方圖只能表明一個參數(shù)與細胞數(shù)量間的關系,不能顯示兩個獨立參數(shù)與細胞數(shù)量的關系。當需要研究兩個或更多測量參數(shù)之間的關系時,可采用二維點圖。

二維點圖有兩種形式,橫坐標表示前向散射光(FSC),反映細胞的大?。豢v坐標表示側(cè)向散射光,反映細胞內(nèi)顆粒的大小和多少。坐標圖上每一點同時表示具有相應坐標值的細抱存在。

例如,人血白細胞懸液樣品上機后,在坐標圖上根據(jù)細胞大小和細胞內(nèi)顆粒形態(tài)出現(xiàn)三類不同顏色的細胞群,通過設門框把這三類細胞區(qū)分開,即紅色顯示淋巴細胞群(P1),綠色顯示單核細胞群(P2),藍色顯示中性粒細胞群(P3)。如果欲檢測其中一種細胞兩個獨立參數(shù)與細胞數(shù)量之間的關系,則選定其中一個門框。

假設選定淋巴細胞(P1),即可對其兩種不同熒光素標記的細胞數(shù)量進行分析,出現(xiàn)第二種形式的二維點圖。橫坐標為PerCP-Cy5熒光標記的CD3細胞數(shù)目(熒光道數(shù)),縱坐標為FITC熒光標記的CD4細胞數(shù)目(熒光道數(shù))。

因此,左上象限(Q1)代表CD4―細胞百分比,右上象限(Q2)代表CD4+/CD3-細胞百分比,左下象限(Q3)代表CD4―/CD3―細胞百分比,右下象限(Q4)代表CD3―細胞百分比。由此得知,在CD3+淋巴細胞中CD4―淋巴細胞所占的百分比。

雙指標二維點囤的細胞群框定 熒光雙染色二維點


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