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先用正己烷-乙腈(99：1)以0.5ml/min的流速沖10倍柱體積，再依次以相同的流速相同的用量用氯仿、異丙醇、甲醇、甲醇-水(50：50)沖柱子。
以0.5ml/min的流速用30倍柱體積的pH11.0的氫氧化鈉(LUNA)水溶液沖柱子(注意pH值切不可超過11.0)，立即用水( 0.5ml/min的流速，30倍柱體積)沖洗，再換成流動相。
配制流動相時，應(yīng)各組分分別量取，比例較小的組分要精密量取，需調(diào)pH值時要精密到0.1。
反相條件下使用時，要特別注意控制pH值范圍，pH值越低越有發(fā)生水解的危險，流動相中水的比例越高當(dāng)然也越有發(fā)生水解的危險。理想的pH范圍在pH 3.0-7.0
如果要使用的流動相中還含有緩沖鹽類，建議在用分析流動相之前，先用不含緩沖鹽的同比例流動相過渡，這樣可避免緩沖鹽在分析柱內(nèi)的析出。
有一種情況是，當(dāng)使用氨基柱進行酸性物質(zhì)的分析時，酸性物質(zhì)的存在意味著質(zhì)子的存在，可能會使略帶負電荷的氨基官能團質(zhì)子化，導(dǎo)致使用一段時間后對于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。建議：用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動相洗去多余氨)，之后再進行分析這類酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如0.1%。
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