血清:將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置0.5-2小時或4℃過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
細(xì)胞裂解液: 吸棄培養(yǎng)液,用PBS(0.01 M,pH 7.4)將細(xì)胞洗一遍。用細(xì)胞刮刮下細(xì)胞(不能用胰酶和EDTA 處理),加入2-5 mL PBS(0.01 M,pH 7.4)。懸浮細(xì)胞可省略。收集細(xì)胞懸液,4℃ 1000×g離心10min,棄去培養(yǎng)基,用預(yù)冷的PBS潤洗3次。加入適量的預(yù)冷PBS或非變性細(xì)胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞,通常6孔板一個孔的細(xì)胞量需要150-250μL PBS重懸。 將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復(fù)凍融3次,使細(xì)胞充分裂解,也可將樣品進(jìn)行超聲破碎,以達(dá)到裂解的目的。4℃ 10000×g 離心10min,除去細(xì)胞碎片,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:請1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
樣本保存和穩(wěn)定性:
樣本在2-8℃條件下,可以儲存72h,在- 20℃或-80℃可以儲存6個月及以上。樣本收集后,不是一次檢測完,請按一次用量分裝凍存,避免反復(fù)凍融。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對其真實性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。