FFPE RNA石蠟包埋樣本是一個(gè)可靠的分子生物學(xué)研究的材料來(lái)源
石蠟包埋樣本是一個(gè)可靠的分子生物學(xué)研究的材料來(lái)源。在石蠟切片上進(jìn)行原位雜交或原位PCR分析的分子生物學(xué)方法,是免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)的重要延伸。通過(guò)對(duì)DNA或mRNA分析亦可直接證實(shí)或補(bǔ)充免疫細(xì)胞化學(xué)的發(fā)現(xiàn)。成功地從蠟塊中提取出高質(zhì)量的DNA,*可以滿(mǎn)足某些腫瘤分子生物學(xué)研究的需要,結(jié)束了DNA研究依賴(lài)于新鮮或冰凍組織和細(xì)胞的歷史,而且可以廣泛地應(yīng)用于大宗病例的回顧性研究,對(duì)腫瘤發(fā)生的分子機(jī)制的探討,診斷與鑒別診斷研究和患者預(yù)后評(píng)估等方面均具有重要價(jià)值。
FFPERNA石蠟包埋樣本制片操作程序如下:
(一)材料的采集與分割
采集材料應(yīng)根據(jù)制片的目的和要求而定,材料要有代表性,無(wú)病蟲(chóng)害或其它損傷,如要觀察病理解剖,則要取病斑、病癥部位。采下的材料應(yīng)立即放在標(biāo)本箱或濕布包起來(lái)帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分割固定(如有條件也可在試驗(yàn)地采集后進(jìn)行分割固定)。為使固定液能迅速的滲透材料,材料要進(jìn)行分割。分割時(shí)動(dòng)作要迅速,以防材料萎蔫。分割塊的大小,宜小不宜大,一般不超過(guò)1cm3,分割后立即殺死固定。
(二)殺死與固定
利用藥劑迅速把細(xì)胞殺死,以保持材料本來(lái)的狀態(tài)和結(jié)構(gòu)。常用的固定有A.A固定液、卡諾固定液等。將固定液放在具塞小瓶中,投入材料,蓋好瓶蓋。用FA.A固定液固定,時(shí)間至少24小時(shí)。F.A.A固定液既是良好的固定劑,也是保存劑,因此材料可長(zhǎng)期保存在固定液中備用??ㄖZ固定液穿透力強(qiáng),固定較小材料一般1~6小時(shí)即可,不超過(guò)24小時(shí)。因卡諾固定液不能做保存劑,所以固定后要用95%、85%酒精浸洗,每級(jí)約20min.,然后保存在70%的酒精中備用。
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