孵育盒采用物理分隔的方式將膜分格成小室,對應(yīng)待孵育抗體通過注液孔直接注入小室孵育,不需要額外的孵育盒或者雜交袋,更免去剪膜和反復(fù)做記號的麻煩,可整張膜進(jìn)行免疫印跡實驗,記錄實驗結(jié)果更完整和方便。
免疫印跡實驗是目前實驗室進(jìn)行免疫檢測常用的實驗方法之一。與ELISA實驗方法相比,免疫印跡實驗實驗流程更繁瑣,工作量更大,如果對多個樣品同時進(jìn)行檢測,通常是將轉(zhuǎn)印之后的膜一條條剪下,分別放入對應(yīng)的一抗小孵育盒子或者雜交袋;漂洗之后再分別加入對應(yīng)的二抗分別孵育;實驗過程中需要在每張膜條上做標(biāo)記,其工作量相當(dāng)大,一旦標(biāo)記錯誤或記錄錯誤都會造成很麻煩。
一抗孵育:
1、打開孵育器,將孵育器的上蓋取下,底板放平,適當(dāng)調(diào)整膠墊位置處于中間位置,并用封閉液將膠墊表面潤濕;
2、將封閉好的整張膜(膜尺寸應(yīng)該小于膠墊尺寸),輕輕平鋪在膠墊上面,從一面輕輕趕走膠墊與膜之間的氣泡;
3、將孵育器的上蓋輕輕壓在膜上,將長方形液槽一面與膜接觸,膜上彩色Marker條帶置于對應(yīng)槽正中位置,均勻擰緊四角緊固螺絲(緊固到液孔槽加入液體不流出或者流串到其他液孔槽為宜),液孔槽與膜之間形成空腔液槽小室;
4、將對應(yīng)抗體工作液分別通過對應(yīng)液槽背面任意一端的注液孔輕輕注入液槽小室,抗體工作液一般的注入量不超過液槽小室總?cè)莘e的3/4;5、抗體工作液注入之后可將整個孵育器平放在搖床震蕩孵育(振幅不可過強),也可以平放在合適的溫度靜置孵育。
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