一、HPLC色譜柱的安裝:
首先檢查色譜柱與儀器的連接和管道是否匹配。使用色譜柱測試程序中建議的過濾和脫氣流動相沖洗您的 HPLC 泵和管路。確保系統(tǒng)中沒有氣泡。將流速設(shè)置為0.1mL/min 并連接到色譜柱入口,確保流速沿色譜柱上箭頭指示的方向。擰緊進(jìn)入色譜柱的末端接頭,將流速增加到 1mL/min(僅適用于4.6mm ID 色譜柱)持續(xù)5分鐘。在連接到流通池之前,停止流動并擦拭色譜柱的出口端以去除其他任何的顆粒。將色譜柱出口連接到流通池,以1 mL/min 的速度將大約10個色譜柱體積通過系統(tǒng)(僅適用于 4.6 mm ID 色譜柱),同時觀察背壓。穩(wěn)定的背壓表明流量恒定,而出現(xiàn)波動可能表明系統(tǒng)中有空氣,大幅波動可能會沖擊和損壞色譜柱。當(dāng)壓力穩(wěn)定在規(guī)定的范圍內(nèi)時,色譜柱就可以使用了。
同時在更換溶劑時重新平衡系統(tǒng)時,切勿將一種溶劑換成另一種不混溶的溶劑,無需通過與兩者混溶的中間溶劑,否則會損壞色譜分析柱的性能。如果緩沖液/鹽不溶于第二種溶劑,切勿換成(或換出)緩沖液/鹽溶液。這也是會損壞色譜柱的性能的。對于更復(fù)雜的樣品和延長液相色譜柱的使用壽命,建議在色譜柱前安裝保護(hù)柱。
二、多久檢查一次色譜柱的性能或質(zhì)量:
對于需要多久檢查一次色譜柱的性能,沒有一般的經(jīng)驗(yàn)法則,這取決于使用情況和應(yīng)用。建議在新色譜柱上運(yùn)行測試樣品并將其作為參考。隨著時間的推移,將您自己的測試色譜圖與此原始色譜圖進(jìn)行比較可以幫助您評估色譜柱是否失去了柱效,或者是否有其他影響性能的變化??梢酝ㄟ^定量分析效率、選擇性、分離度和壓力等參數(shù)了解色譜柱的比較性能。
三、色譜柱日常使用維護(hù)保養(yǎng):
1.選擇合適的液相保護(hù)柱,免受非揮發(fā)性材料的損壞和污染,保護(hù)柱填料的粒徑應(yīng)盡可能與色譜柱填料的粒徑相同。
2.留意色譜柱的pH范圍。
3.避免猛烈撞擊或掉落色譜柱,因?yàn)槲锢頉_擊會在色譜柱中產(chǎn)生空隙和通道,從而導(dǎo)致峰拖尾和柱效損失。
4.確保色譜柱末端接頭、管螺母和套圈兼容。連接不兼容的接頭會導(dǎo)致泄漏、增加死體積和損壞色譜柱螺紋。
5.如果色譜柱上刻有箭頭,請安裝色譜柱,使流向與箭頭一致。大多數(shù)色譜柱都有一個優(yōu)選的流動方向,旨在避免色譜柱出現(xiàn)問題和故障。
今天恒譜生分享的知識先到這啦,希望對您的工作有所幫助!
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